電話：400-998-2324郵箱：service_uplc_ms@163.com網(wǎng)址：本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用！請勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測等用途！-上海液質(zhì)檢測技術(shù)有限公司第第頁琥珀酸脫氫酶（SDH）活性檢測試劑盒說明書貨號：UPLC-MS-4333規(guī)格：100T/96S

微量法產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時(shí)聯(lián)系工作人員。試劑名稱規(guī)格保存條件試劑一液體110mL×1瓶-20℃保存試劑二液體1mL×1支-20℃保存試劑三液體18mL×1瓶4℃保存試劑四粉劑×1支4℃保存試劑五粉劑×1瓶4℃保存試劑六粉劑×1瓶-20℃保存溶液的配制：1、試劑四：臨用前加入到試劑三中溶解待用；2、試劑五：臨用前加入4mL雙蒸水，用不完的試劑仍4℃保存；3、試劑六：臨用前加入3.333mL雙蒸水，用不完的試劑4℃保存。產(chǎn)品說明：SDH（EC）SDH是線粒體的一種\h位于\h線粒體\h內(nèi)膜上的一種膜結(jié)合酶，是連接呼吸電子傳遞和氧化磷酸化的樞紐之一。此外，為多種原核細(xì)胞產(chǎn)能的\h呼吸鏈提供電子。（傳遞還原2,6-（P），并且在600nm處具有特征吸收峰，通過600nm吸光度的變化，測定2,6-DCPIP的還原速度，代表SDH酶活性。注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。需自備的儀器和用品：可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/和蒸餾水。操作步驟：一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）0.1g5001mL10μL4℃11000g離心10min，取上清，置冰上待測。二、測定步驟1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至600nm，蒸餾水調(diào)零。2、樣本測定試劑名稱（μL）測定管空白管試劑三168168試劑五121237℃(哺乳動物)或25℃（其它物種）保溫10min左右樣本10蒸餾水10試劑六1010600nm20A1120A2，ΔA=A1-A2ΔA測定、ΔA空白。三、SDH活性的計(jì)算用微量比色皿測定的計(jì)算公式如下按樣本蛋白濃度計(jì)算單位的定義：每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘消耗1nmol2,6-二氯酚靛酚定義為一個(gè)酶活性單位。SDH活性（U/mgprot）=[（ΔA測定-ΔA空白）÷（ε×d）×V反總×109]÷(Cpr×V樣)÷T=952.381×（ΔA測定-ΔA空白）÷Cpr按樣本質(zhì)量計(jì)算單位的定義：每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘消耗1nmol2,6-SDH活性（U/g質(zhì)量）=[（ΔA測定-ΔA空白）÷（ε×d）×V反總×109]÷(V樣÷V樣總×W)÷T=961.905×（ΔA測定-ΔA空白）÷W按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算單位的定義：每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在反應(yīng)體系中每分鐘消耗1nmol2,6-二氯酚靛酚定義為一個(gè)酶活性單位。SDH活性（U/104cell）=[（ΔA測定-ΔA空白）÷(ε×d)×V反總×109]÷(V樣÷V樣總×500)÷T=1.924×（ΔA測定-ΔA空白）2×10-4Lε2,6-2.1×14L/mo/cmd1cmV樣：加入樣本體積，0.01mL；V樣總：加入試劑一和試劑二體積，1.01mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1min；Cpr質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬；109：單位換算系數(shù)，1mol=109nmol。用96孔板測定的計(jì)算公式如下按樣本蛋白濃度計(jì)算單位的定義：每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘消耗1nmol2,6-二氯酚靛酚定義為一個(gè)酶活性單位。SDH活性（U/mgprot）=[（ΔA測定-ΔA空白）÷（ε×d）×V反總×109]÷(Cpr×V樣)÷T=1587.302×（ΔA測定-ΔA空白）÷Cpr按樣本質(zhì)量計(jì)算單位的定義：每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘消耗1nmol2,6-SDH活性（U/g質(zhì)量）=[（ΔA測定-ΔA空白）÷（ε×d）×V反總×109]÷(V樣÷V樣總×W)÷T=1603.175×（ΔA測定-ΔA空白）÷W按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算單位的定義：每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在反應(yīng)體系中每分鐘消耗1nmol2,6-二氯酚靛酚定義為一個(gè)酶活性單位。SDH活性（U/104cell）=[（ΔA測定-ΔA空白）÷(ε×d)×V反總×109]÷(V樣÷V樣總×500)÷T=3.206×（ΔA測定-ΔA空白）VV樣：加入樣本體積，0.01mL；V樣總：加入試劑一和試劑二體積，1.01mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬；109：單位換算系數(shù)，1mol=109nmol。注意事項(xiàng)：1、測定過程中所有試劑和樣本在冰上放置，以免變性失活。2