專題3、5植物的組織培養(yǎng)技術(shù)、DNA 和蛋白質(zhì)技術(shù)專題3、5植物的組織培養(yǎng)技術(shù)、DNA考綱內(nèi)容高考風(fēng)向標(biāo)實驗：(1)植物的組織培養(yǎng)(2)蛋白質(zhì)的提取和分離(3)PCR技術(shù)的基本操作和應(yīng)用(4)DNA的粗提取與鑒定本專題內(nèi)容與必修內(nèi)容關(guān)聯(lián)度大，多分拆于必修的相關(guān)內(nèi)容中，多以選擇題形式出現(xiàn)考綱內(nèi)容高考風(fēng)向標(biāo)實驗：(1)植物的組織培養(yǎng)本專題內(nèi)容與必修一、植物的組織培養(yǎng)技術(shù)

1.菊花的組織培養(yǎng)全能性(1)理論基礎(chǔ)：植物細(xì)胞的①_______。(2)基本過程外植體愈傷組織長出叢芽→生根→移栽(3)實驗操作步驟接種移栽

制備MS培養(yǎng)基→外植體消毒→②_____→培養(yǎng)→③____→栽培一、植物的組織培養(yǎng)技術(shù)全能性(1)理論基礎(chǔ)：植物細(xì)胞的①__2.月季的花藥培養(yǎng)(1)理論基礎(chǔ)：花粉具有④______。全能性(2)花粉發(fā)育過程：⑤__________、⑥_______、⑦_(dá)_____等階段。四分體時期單核期雙核期(3)產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑植物組織培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基。()√2.月季的花藥培養(yǎng)(1)理論基礎(chǔ)：花粉具有④______。全二、DNA和蛋白質(zhì)技術(shù)

1.DNA的粗提取與鑒定(1)實驗原理不同0.14mol/L不藍(lán)色

1)DNA在不同濃度的NaCl溶液中的溶解度⑧_____，濃度為⑨___________時其溶解度最小。 2)DNA⑩___溶于酒精溶液。3)DNA與二苯胺在沸水浴中呈?_____。雜質(zhì)

(2)實驗步驟：選材、制備雞血細(xì)胞液→破碎細(xì)胞，獲取含DNA的濾液→去除濾液中的?_____→DNA析出與鑒定。二、DNA和蛋白質(zhì)技術(shù)(1)實驗原理不同0.14mol/2.血紅蛋白的提取和分離相對分子質(zhì)量

(1)凝膠色譜法：也稱分配色譜法，是根據(jù)?__________________分離蛋白質(zhì)的方法。相對分子質(zhì)量較小的移動速度較慢，而相對分子質(zhì)量較大的無法?_____________，移動速度較快。 (2)緩沖溶液：能夠抵制外界的?_______對溶液pH的影響，維持pH?___________。 (3)電泳：帶電粒子在?_____的作用下發(fā)生遷移的過程。進(jìn)入凝膠內(nèi)部酸和堿基本不變電場的大小2.血紅蛋白的提取和分離相對分子質(zhì)量 (1)凝膠色譜法：也稱

(4)實驗操作 1)樣品處理及粗分離 紅細(xì)胞的洗滌→血紅蛋白的釋放→分離血紅蛋白溶液→透析2)凝膠色譜柱操作凝膠色譜柱的裝填

凝膠色譜柱的制作→?__________________→樣品的加入和洗脫 3)純度鑒定：用SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳。 (4)實驗操作2)凝膠色譜柱操作凝膠色譜柱的裝填 凝膠色譜3.多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增DNA片段(1)PCR原理DNA模板四種脫氧核苷酸在一定的緩沖溶液中提供?___________、分別與兩條模板鏈結(jié)合的兩種引物、?______________、_________________，同時控制溫度使DNA復(fù)制在_____反復(fù)進(jìn)行。(2)PCR的反應(yīng)過程：變性→_____→延伸。耐熱的DNA聚合酶體外復(fù)性3.多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增DNA片段(1)PCR原理DNAPCR擴(kuò)增包括三個環(huán)節(jié)，變性、復(fù)性(退火)、延伸，這三步的溫度依次是()AA．95℃、55℃、72℃C．55℃、95℃、72℃B．72℃、55℃、95℃D．80℃、60℃、72℃PCR擴(kuò)增包括三個環(huán)節(jié)，變性、復(fù)性(退火)、延伸，這三步的考點植物的組織培養(yǎng)

1.影響植物組織培養(yǎng)的因素

(1)內(nèi)部因素：材料的選取。 (2)外部因素：營養(yǎng)成分的種類及配比；植物激素的用量及使用順序；pH、溫度、光照等。考點植物的組織培養(yǎng) 1.影響植物組織培養(yǎng)的因素2.獲得成功的關(guān)鍵(1)植物組織培養(yǎng)所利用的植物材料體積小、抗逆性差，對培養(yǎng)條件要求較高。

(2)培養(yǎng)材料一旦被微生物污染，就會導(dǎo)致實驗失敗。原因是微生物增殖快，生長迅速，消耗養(yǎng)分多，并產(chǎn)生代謝廢物毒害培養(yǎng)材料。(3)無菌技術(shù)主要包括對操作空間、實驗用具、實驗材料以及操作者的消毒或滅菌。2.獲得成功的關(guān)鍵(1)植物組織培養(yǎng)所利用的植物材料體積小、使用順序?qū)嶒灲Y(jié)果先使用生長素，后使用細(xì)胞分裂素有利于細(xì)胞分裂，但細(xì)胞不分化先使用細(xì)胞分裂素，后使用生長素細(xì)胞既分裂又分化同時使用分化頻率提高3.植物激素在組織培養(yǎng)過程中的重要作用(1)使用順序不同，結(jié)果不同(2)用量比值不同(生長素比細(xì)胞分裂素)，結(jié)果也不同①高：利于根的分化、抑制芽的形成。②低：利于芽的分化、抑制根的形成。③適中：促進(jìn)愈傷組織的形成。使用順序?qū)嶒灲Y(jié)果先使用生長素，后使用細(xì)胞分裂素有利于細(xì)胞分裂4.實驗操作中應(yīng)注意的幾個問題

(1)材料的選取：菊花的組織培養(yǎng)實驗中，應(yīng)選擇未開花植株的莖上部新萌生的側(cè)枝；月季花藥的培養(yǎng)實驗中，應(yīng)選擇花粉發(fā)育過程中的單核靠邊期的花粉進(jìn)行培養(yǎng)。

(2)外植體消毒：所用的消毒劑是體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的氯化汞溶液，所使用的清洗液是無菌水。 (3)培養(yǎng)過程：在初期，菊花的組織培養(yǎng)需光照，月季花藥的培養(yǎng)不需光照，而在后期均需光照。4.實驗操作中應(yīng)注意的幾個問題 (1)材料的選取：菊花的組織單倍體育種與花藥組織培養(yǎng)的區(qū)別

花藥組織培養(yǎng)形成的是高度不育的單倍體植株；而單倍體育種則需要把對花藥進(jìn)行組織培養(yǎng)得到的單倍體植株誘導(dǎo)為染色體數(shù)目正常的純合植株，以使其有正常的繁殖能力，再從中挑選出具有優(yōu)良性狀的個體。單倍體育種與花藥組織培養(yǎng)的區(qū)別 花藥組織培養(yǎng)形成的是高度不育【典例1】植物微型繁殖技術(shù)屬于植物組織培養(yǎng)的范疇。請回答下列問題。

(1)該技術(shù)可以保持品種的________________，繁殖種苗的速度________。離體的葉肉細(xì)胞在適宜的條件下培養(yǎng)，最終能夠形成完整的植株，說明該葉肉細(xì)胞具有該植物的全部________________。(2)把試管苗轉(zhuǎn)接到新的培養(yǎng)基上時，需要在超凈工作臺上進(jìn)行，其原因是避免__________的污染。【典例1】植物微型繁殖技術(shù)屬于植物組織培養(yǎng)的范疇。請回答下列

(3)微型繁殖過程中，適宜濃度的生長素單獨(dú)使用可誘導(dǎo)試管苗________，而與____________配比適宜時可促進(jìn)芽的增殖。若要抑制試管苗的生長，促使愈傷組織產(chǎn)生和生長，需要使用的生長調(diào)節(jié)劑是________(填“脫落酸”或“2,4－D”)。 (4)將某植物試管苗培養(yǎng)在含不同濃度蔗糖的培養(yǎng)基上一段時間后，單株鮮重和光合作用強(qiáng)度的變化如下圖。據(jù)圖分析，隨著培養(yǎng)基中蔗糖濃度的增加，光合作用強(qiáng)度的變化趨勢是___________，單株鮮重的變化趨勢是_____________。據(jù)圖判斷，培養(yǎng)基中不含蔗糖時，試管苗光合作用產(chǎn)生的有機(jī)物的量________(填“能”或“不能”)滿足自身最佳生長的需要。 (3)微型繁殖過程中，適宜濃度的生長素單獨(dú)使用可誘導(dǎo)試

(5)據(jù)上圖推測，若要在誘導(dǎo)試管苗生根的過程中提高其光合作用能力，應(yīng)________(填“降低”或“增加”)培養(yǎng)基中蔗糖濃度，以便提高試管苗的自養(yǎng)能力。 (5)據(jù)上圖推測，若要在誘導(dǎo)試管苗生根的過程中提高其光

[解題思路]植物組織培養(yǎng)技術(shù)是利用植物細(xì)胞全能性的原理進(jìn)行的，是植物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)。操作過程中應(yīng)注意無菌操作，避免雜菌污染，因為培養(yǎng)過程中使用的培養(yǎng)基營養(yǎng)物質(zhì)豐富；適宜濃度的生長素可以誘導(dǎo)試管苗生根，而如果要促進(jìn)愈傷組織形成芽，則需要與細(xì)胞分裂素配比；促進(jìn)愈傷組織產(chǎn)生和生長，應(yīng)使用2,4－D。[答案](1)遺傳性狀快遺傳信息(2)微生物(3)生根細(xì)胞分裂素2,4－D(4)逐漸減小先增加后下降不能(5)降低 [解題思路]植物組織培養(yǎng)技術(shù)是利用植物細(xì)胞全能性的原[答案?考點對應(yīng)練

1．將無根的非洲菊幼苗轉(zhuǎn)入無植物激素的培養(yǎng)基中，在適宜的溫度和光照等條件下培養(yǎng)一段時間后，應(yīng)出現(xiàn)的現(xiàn)象是()B

解析：雖然培養(yǎng)基中沒有激素，但幼苗葉片本身可以產(chǎn)生生長素，促進(jìn)生根；而細(xì)胞分裂素的產(chǎn)生部位在根尖，所以細(xì)胞分裂素不能產(chǎn)生，所以植物能夠在一定時間后長出少量的根而沒有長出新芽。?考點對應(yīng)練()B 解析：雖然培養(yǎng)基中沒有激素，但幼苗葉片本考點DNA的粗提取與鑒定

1.實驗原理

(1)DNA在不同濃度的NaCl溶液中的溶解度不同，其變化曲線如下圖所示。 (2)DNA不溶于酒精溶液，但細(xì)胞中的其他某些物質(zhì)可以溶于酒精溶液，據(jù)此可提取含雜質(zhì)較少的DNA。(3)DNA＋二苯胺藍(lán)色(用于DNA的鑒定)。考點DNA的粗提取與鑒定 1.實驗原理(3)DNA＋二苯胺步驟具體措施分析選材、制備雞血細(xì)胞液雞血＋檸檬酸鈉用離心機(jī)離心，再放冰箱內(nèi)靜置雞血紅細(xì)胞、白細(xì)胞都具有細(xì)胞核，含大量DNA；檸檬酸鈉(抗凝劑)使血液分層，血細(xì)胞處于底部提取血細(xì)胞核物質(zhì)①雞血細(xì)胞液＋蒸餾水，快速沿一個方向攪拌5min②紗布過濾①血細(xì)胞吸水漲破，快速攪拌加速血細(xì)胞破裂②過濾得到含染色質(zhì)的濾液，濾出細(xì)胞膜、細(xì)胞器等破碎結(jié)構(gòu)溶解DNA①濾液＋2mol/L的NaCl溶液40mL(攪拌)②紗布過濾不溶雜質(zhì)高鹽溶液溶解DNA，去除不溶于高鹽溶液的雜質(zhì)2.實驗流程步驟具體措施分析選材、制備雞血＋檸檬酸鈉用離心雞血紅細(xì)胞、白步驟具體措施分析析出含DNA 的黏稠物溶液＋蒸餾水，輕輕攪拌，析出絲狀物(直至不再增加為止)NaCl溶液相當(dāng)于被稀釋到0.14mol/L，這一濃度下DNA的溶解度最低，所以DNA析出過濾多層紗布過濾得到含DNA的黏稠物DNA黏稠 物再溶解2mol/LNaCl溶液20mL＋上述黏稠物→溶解高鹽溶液溶解DNA，再次去除不溶于高鹽溶液的雜質(zhì)過濾用2層紗布過濾濾液中含DNA，去除不溶雜質(zhì)

提取含雜質(zhì)較少的DNA上述濾液＋冷卻的95%酒精50mL析出DNA，去除溶于95%冷酒精的雜質(zhì)DNA鑒定絲狀物＋0.015mol/LNaCl溶液5mL＋二苯胺(現(xiàn)配)4mL，沸水浴5min，對照組不加絲狀物①試管1和試管2的自變量是有無絲狀物，因變量為有無淺藍(lán)色出現(xiàn)②0.015mol/LNaCl溶液溶解DNA續(xù)表步驟具體措施分析析出含DNA溶液＋蒸餾水，輕輕攪NaCl3.實驗關(guān)鍵(1)取材不能用哺乳動物的血細(xì)胞(由于其成熟紅細(xì)胞無細(xì)胞核)。(2)獲取DNA時要向雞血細(xì)胞液加入足量的蒸餾水，以便使細(xì)胞膜和核膜破裂，把核內(nèi)物質(zhì)釋放出來。

(3)實驗中有6次攪拌，除最后一次攪拌外，前5次攪拌均要朝一個方向。并且在析出DNA、DNA再溶解和提取DNA中，各步驟攪拌都要輕緩，玻璃棒不要直插燒杯底部，防止DNA分子斷裂。3.實驗關(guān)鍵(1)取材不能用哺乳動物的血細(xì)胞(由于其成熟紅細(xì)(4)2次加蒸餾水①第一次加蒸餾水是為了使血細(xì)胞吸水膨脹破裂(注：植物細(xì)胞是用洗滌劑溶解細(xì)胞膜)。②第二次加蒸餾水是為了稀釋NaCl溶液，析出DNA。(5)3個濃度的NaCl溶液①2mol/LNaCl溶液，為了溶解DNA，使DNA與蛋白質(zhì)分離。②一個是0.14mol/LNaCl溶液，為了析出DNA。③0.015mol/LNaCl溶液，目的是為了溶解DNA。(6)DNA易吸附在玻璃容器上，所以實驗中最好使用塑料燒杯、試管、容器，以減少DNA的損失。(4)2次加蒸餾水①第一次加蒸餾水是為了使血細(xì)胞吸水膨脹破4.去除濾液中的雜質(zhì)的其他方案(1)方案一：用嫩肉粉(蛋白酶)，它能水解蛋白質(zhì)，但對DNA沒有影響。(2)方案二：加熱至60～75℃，大多數(shù)蛋白質(zhì)不能忍受60～75℃的高溫而變性，但DNA不變性。4.去除濾液中的雜質(zhì)的其他方案(1)方案一：用嫩肉粉(蛋白酶【典例2】下列關(guān)于DNA粗提取與鑒定的說法正確的是()

A.析出DNA時要緩慢地加蒸餾水，當(dāng)析出黏稠物時即不再加水 B.在探究洗滌劑對植物細(xì)胞DNA提取的影響實驗中，自變量是洗滌劑和食鹽 C.提取的DNA溶解后加入二苯胺試劑即可染成藍(lán)色 D.將含有DNA的濾液放在60℃～75℃的恒溫水浴箱中保溫后過濾，能去除蛋白質(zhì)雜質(zhì)【典例2】下列關(guān)于DNA粗提取與鑒定的說法正確的是() A

[解題思路]DNA在0.14mol/L

的NaCl溶液中溶解度最低而析出，方法是用蒸餾水進(jìn)行稀釋，直至DNA析出量不再增加為止；探究洗滌劑對植物細(xì)胞DNA提取的影響實驗中，自變量是洗滌劑；提取的DNA溶解后加入二苯胺試劑后要進(jìn)行加熱和分設(shè)對照組。[答案]D [解題思路]DNA在0.14mol/L的NaCl?考點對應(yīng)練

2．在DNA粗提取過程中，先后兩次向燒杯中加入蒸餾水的作用分別是()B

A．稀釋血液、沖洗樣品 B．使血細(xì)胞破裂、降低NaCl濃度使DNA析出 C．使血細(xì)胞破裂、增大DNA溶解量 D．使血細(xì)胞破裂、提取含雜質(zhì)較少的DNA

解析：第一次是使血細(xì)胞破裂；第二次是降低NaCl濃度使DNA析出。?考點對應(yīng)練的作用分別是()B A．稀釋血液、沖洗樣品考點蛋白質(zhì)的提取和分離(以血紅蛋白的提取和分離為例)

1.樣品處理

(1)紅細(xì)胞的洗滌：目的是去除雜蛋白，分離時采用低速短時間離心，直至上清液不再呈現(xiàn)黃色，表明紅細(xì)胞已洗滌干凈。 (2)血紅蛋白的釋放：在蒸餾水和甲苯(溶解細(xì)胞膜)的作用下，紅細(xì)胞破裂，釋放出血紅蛋白。 2.粗分離

(1)分離血紅蛋白溶液：將攪拌好的混合溶液離心后，將試管中的液體用濾紙過濾，除去脂溶性沉淀層，于分液漏斗中靜置片刻后，分離下層的紅色透明液體。考點蛋白質(zhì)的提取和分離(以血紅蛋白的提取和分離為例) 1.樣分離的 種類相對分子質(zhì)量直徑大小運(yùn)動方式運(yùn)動速度運(yùn)動路程洗脫次序大分子 物質(zhì)大大于凝膠顆粒空隙垂直向下 的運(yùn)動較快較短先小分子 物質(zhì)小小于凝膠顆粒空隙垂直向下、 無規(guī)則擴(kuò) 散的運(yùn)動較慢較長后

(2)透析：取1mL的血紅蛋白溶液裝入透析袋中，將透析袋放入盛有300mL、物質(zhì)的量濃度為20mmol/L的磷酸緩沖液中，透析12h，去除樣品中分子量較小的雜質(zhì)。3.純化：利用凝膠色譜柱可對血紅蛋白進(jìn)行純化。凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)的原理，見下表：4.純度鑒定：使用最多的是SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳(可測定蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量)。分離的相對分直徑大小運(yùn)動方式運(yùn)動運(yùn)動洗脫大分子大大于凝膠垂直項目DNA粗提取與鑒定血紅蛋白的提取與分離材料選擇雞血細(xì)胞等含DNA豐富的生物組織哺乳動物成熟的紅細(xì)胞破碎細(xì)胞方式①動物細(xì)胞：吸水漲破②植物細(xì)胞：洗滌劑、食鹽攪拌研磨等加蒸餾水和甲苯攪拌去除雜質(zhì)方式①用不同濃度的NaCl溶液處理②用酒精處理③用蛋白酶處理等①透析處理②純化處理鑒定方式二苯胺，沸水浴SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳法測定相對分子質(zhì)量DNA與血紅蛋白的提取和分離過程比較項目DNA粗提取與鑒定血紅蛋白的提取與分離材料選擇雞血細(xì)胞【典例3】(2011

年南京一模)下列關(guān)于DNA和血紅蛋白的提取與分離實驗的敘述中，錯誤的是()

A．可用蒸餾水漲破細(xì)胞的方法從豬紅細(xì)胞中提取到DNA和蛋白質(zhì) B．用不同濃度的NaCl溶液反復(fù)溶解與析出DNA可去部分雜質(zhì) C．透析法分離蛋白質(zhì)的依據(jù)是利用蛋白質(zhì)不能通過半透膜的特性 D．進(jìn)一步分離與純化血紅蛋白可用凝膠色譜法、離心法、電泳法等【典例3】(2011年南京一模)下列關(guān)于DNA和血紅蛋

[解題思路]豬紅細(xì)胞中沒有細(xì)胞核，只能用于蛋白質(zhì)的提取和分離實驗中；DNA在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同，低濃度和高濃度都可使DNA溶解，但在0.14mol/L的NaCl溶液中，溶解度最小，可析出DNA，從而去除部分雜質(zhì)；透析法分離蛋白質(zhì)的依據(jù)是蛋白質(zhì)是大分子物質(zhì)，不能通過半透膜，從而去除樣品中分子量較小的雜質(zhì)。[答案]A [解題思路]豬紅細(xì)胞中沒有細(xì)胞核，只能用于蛋白質(zhì)的提取[答?考點對應(yīng)練

3．在血紅蛋白的整個提取過程中，不斷用磷酸緩沖液處理的目的是()D

A.防止血紅蛋白被O2

氧化 B.血紅蛋白是一種堿性物質(zhì)，需要酸中和 C.磷酸緩沖液會加速血紅蛋白的提取過程 D.讓血紅蛋白處在穩(wěn)定的pH范圍內(nèi)，維持其結(jié)構(gòu)和功能

解析：利用磷酸緩沖液模擬細(xì)胞內(nèi)的pH環(huán)境，保證血紅蛋白的正常結(jié)構(gòu)和功能，便于分離觀察和研究。?考點對應(yīng)練的目的是()D A.防止血紅蛋白被O2氧化考點PCR反應(yīng)的過程及結(jié)果

1．過程

(1)變性：當(dāng)溫度上升到90℃以上時，雙鏈DNA解聚為單鏈。 (2)復(fù)性：系統(tǒng)溫度下降至50℃左右時，兩種引物通過堿基互補(bǔ)配對與兩條單鏈DNA結(jié)合。 (3)延伸：當(dāng)系統(tǒng)溫度上升至72℃左右，溶液中的四種脫氧核苷酸(A、T、G、C)在DNA聚合酶的作用下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則合成新的DNA鏈。考點PCR反應(yīng)的過程及結(jié)果 1．過程2.結(jié)果(1)PCR一般要經(jīng)歷三十多次循環(huán)，每次循環(huán)都包括變性、復(fù)性、延伸。(2)兩引物之間的固定長度的DNA序列呈指數(shù)擴(kuò)增。2.結(jié)果(1)PCR一般要經(jīng)歷三十多次循環(huán)，每次循環(huán)都包括細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制PCR不同點解旋在解旋酶作用下邊解旋邊復(fù)制80℃～100℃高溫解旋，雙鏈完全分開酶DNA解旋酶、DNA聚合酶TaqDNA聚合酶引物RNADNA或RNA溫度體內(nèi)溫和條件高溫相同點①需提供DNA復(fù)制的模板②四種脫氧核苷酸作原料③子鏈延伸的方向都是從5′端到3′端3.細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制與PCR技術(shù)的比較細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制PCR不解旋在解旋酶作用下邊解旋邊80

【典例4】(2011

年韶關(guān)模擬)多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)是一種體外迅速擴(kuò)增DNA片段的技術(shù)。PCR過程一般經(jīng)歷下述三十多次循環(huán)：使模板DNA變性、解鏈→復(fù)性(引物與DNA模板鏈結(jié)合)→引物鏈延伸(形成新的脫氧核苷酸鏈)。下列有關(guān)PCR過程的敘述中不正確的是()

A．變性過程中破壞的是DNA分子內(nèi)堿基對之間的氫鍵，也可利用解旋酶實現(xiàn) B．復(fù)性過程中引物與DNA模板鏈的結(jié)合是依靠堿基互補(bǔ)配對原則完成 C．延伸過程中需要DNA聚合酶、ATP、四種核糖核苷酸 D．PCR與細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制相比，所需要酶的最適溫度較高 【典例4】(2011年韶關(guān)模擬)多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)

[解題思路]變性的目的是破壞DNA分子內(nèi)堿基對之間的氫鍵，讓DNA解鏈，在體內(nèi)可在解旋酶的作用下進(jìn)行，體外則是高溫；引物是脫氧核苷酸小片段，在復(fù)性時，能與DNA模板鏈結(jié)合；延伸過程中需要DNA聚合酶、ATP、四種脫氧核糖核苷酸；PCR

是體外的DNA復(fù)制，需要高溫才能讓DNA解旋，所以要求酶的最適溫度較高。[答案]C [解題思路]變性的目的是破壞DNA分子內(nèi)堿基對之間的氫[?考點對應(yīng)練

4．PCR實驗中使用的微量離心管、槍頭、緩沖液以及蒸餾水使用前必須進(jìn)行的關(guān)鍵步驟是()C

A.反復(fù)洗滌 B．加熱消毒 C.高壓滅菌 D．在－20℃儲存

解析：通過對PCR實驗中所用儀器和試劑進(jìn)行高壓滅菌，可以避免外源DNA等因素的污染。?考點對應(yīng)練水使用前必須進(jìn)行的關(guān)鍵步驟是()C A.反復(fù)洗滌1．(2012年惠州三調(diào))下列有關(guān)生物實驗材料的選用正確的是()B

A.觀察線粒體時可用榕樹葉肉細(xì)胞代替口腔上皮細(xì)胞 B.提取DNA時可以用花椰菜也可以用雞血 C.西瓜汁中無還原性糖，不能代替梨汁做還原性糖的鑒定 D.用樣方法調(diào)查種群密度時可以用蔓生的紫藤作調(diào)查對象

解析：榕樹葉肉細(xì)胞有顏色，不能用于觀察線粒體；西瓜汁中有顏色，不能代替梨汁做還原性糖的鑒定；蔓生的紫藤難以計數(shù)。1．(2012年惠州三調(diào))下列有關(guān)生物實驗材料的選用正確的2．(2011年廣東)以下關(guān)于豬血紅蛋白提純的描述，不正確的是()D

A.洗滌紅細(xì)胞時，使用生理鹽水可防止紅細(xì)胞破裂 B.豬成熟紅細(xì)胞中缺少細(xì)胞器和細(xì)胞核，提純時雜蛋白較少

C.血紅蛋白的顏色可用于凝膠色譜法分離過程的監(jiān)測 D.在凝膠色譜法分離過程中，血紅蛋白比分子量較小的雜蛋白移動慢

解析：D項考查凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)的原理，相對分子質(zhì)量越大的蛋白質(zhì)通過凝膠色譜柱的速度越快。2．(2011年廣東)以下關(guān)于豬血紅蛋白提純的描述，不正確

3．(2009年廣東)材料：飼料原料中的磷元素有相當(dāng)一部分存在于植酸中，豬、禽等動物由于缺乏有關(guān)酶，無法有效利用植酸，造成磷源浪費(fèi)，而且植酸隨糞便排除后易造成環(huán)境有機(jī)磷污染。植酸酶能催化植酸水解成肌醇和磷酸，因此成為目前重要的飼料添加劑之一。

(1)商品化植酸酶主要來自微生物。在產(chǎn)酶菌株篩選過程中，常在基本培養(yǎng)基中添加不溶于水的植酸鈣制成固體平板，植酸鈣被植酸酶分解后可在平板上產(chǎn)生_______，可根據(jù)其大小選擇目的菌株，所得菌株需要進(jìn)一步測定植酸酶活性。活性測定可以植酸鈉作為底物，活性可用一定條件下單位時間________________________________________表示。透明圈消耗量(肌醇和磷酸的生成量)植酸鈉的 3．(2009年廣東)材料：飼料原料中的磷元素有相當(dāng)一部(2)利用上述所得菌株制備植酸酶的流程如下圖：

Ⅰ中的主要成分為_____________；Ⅱ中包含植酸酶等多種蛋白質(zhì)。請寫出一種純化得到植酸酶的方法及其依據(jù)。________________________________________________________________________________________________________________。小分子雜質(zhì)

凝膠色譜法：根據(jù)蛋白質(zhì)之間分子大小、吸附性質(zhì)等差異進(jìn)行純化(或電泳法：根據(jù)蛋白質(zhì)之間電荷、分子大小等差異進(jìn)行純化)(2)利用上述所得菌株制備植酸酶的流程如下圖： Ⅰ中的主要成

(3)為建設(shè)基因工程菌，可用PCR等技術(shù)從上述菌株中克隆植酸酶基因。PCR反應(yīng)包含多次循環(huán)，每次循環(huán)包括三步：____________________。反應(yīng)過程中打開模板DNA雙鏈的方法是______。變性、復(fù)性和延伸加熱(4)除植酸酶外，微生物還應(yīng)用在______________________________的生產(chǎn)中。蛋白酶、脂肪酶、纖維素酶是______。變性、復(fù)性和延伸加熱(4)除植酸酶外，微生物專題3、5植物的組織培養(yǎng)技術(shù)、DNA 和蛋白質(zhì)技術(shù)專題3、5植物的組織培養(yǎng)技術(shù)、DNA考綱內(nèi)容高考風(fēng)向標(biāo)實驗：(1)植物的組織培養(yǎng)(2)蛋白質(zhì)的提取和分離(3)PCR技術(shù)的基本操作和應(yīng)用(4)DNA的粗提取與鑒定本專題內(nèi)容與必修內(nèi)容關(guān)聯(lián)度大，多分拆于必修的相關(guān)內(nèi)容中，多以選擇題形式出現(xiàn)考綱內(nèi)容高考風(fēng)向標(biāo)實驗：(1)植物的組織培養(yǎng)本專題內(nèi)容與必修一、植物的組織培養(yǎng)技術(shù)

1.菊花的組織培養(yǎng)全能性(1)理論基礎(chǔ)：植物細(xì)胞的①_______。(2)基本過程外植體愈傷組織長出叢芽→生根→移栽(3)實驗操作步驟接種移栽

制備MS培養(yǎng)基→外植體消毒→②_____→培養(yǎng)→③____→栽培一、植物的組織培養(yǎng)技術(shù)全能性(1)理論基礎(chǔ)：植物細(xì)胞的①__2.月季的花藥培養(yǎng)(1)理論基礎(chǔ)：花粉具有④______。全能性(2)花粉發(fā)育過程：⑤__________、⑥_______、⑦_(dá)_____等階段。四分體時期單核期雙核期(3)產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑植物組織培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基。()√2.月季的花藥培養(yǎng)(1)理論基礎(chǔ)：花粉具有④______。全二、DNA和蛋白質(zhì)技術(shù)

1.DNA的粗提取與鑒定(1)實驗原理不同0.14mol/L不藍(lán)色

1)DNA在不同濃度的NaCl溶液中的溶解度⑧_____，濃度為⑨___________時其溶解度最小。 2)DNA⑩___溶于酒精溶液。3)DNA與二苯胺在沸水浴中呈?_____。雜質(zhì)

(2)實驗步驟：選材、制備雞血細(xì)胞液→破碎細(xì)胞，獲取含DNA的濾液→去除濾液中的?_____→DNA析出與鑒定。二、DNA和蛋白質(zhì)技術(shù)(1)實驗原理不同0.14mol/2.血紅蛋白的提取和分離相對分子質(zhì)量

(1)凝膠色譜法：也稱分配色譜法，是根據(jù)?__________________分離蛋白質(zhì)的方法。相對分子質(zhì)量較小的移動速度較慢，而相對分子質(zhì)量較大的無法?_____________，移動速度較快。 (2)緩沖溶液：能夠抵制外界的?_______對溶液pH的影響，維持pH?___________。 (3)電泳：帶電粒子在?_____的作用下發(fā)生遷移的過程。進(jìn)入凝膠內(nèi)部酸和堿基本不變電場的大小2.血紅蛋白的提取和分離相對分子質(zhì)量 (1)凝膠色譜法：也稱

(4)實驗操作 1)樣品處理及粗分離 紅細(xì)胞的洗滌→血紅蛋白的釋放→分離血紅蛋白溶液→透析2)凝膠色譜柱操作凝膠色譜柱的裝填

凝膠色譜柱的制作→?__________________→樣品的加入和洗脫 3)純度鑒定：用SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳。 (4)實驗操作2)凝膠色譜柱操作凝膠色譜柱的裝填 凝膠色譜3.多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增DNA片段(1)PCR原理DNA模板四種脫氧核苷酸在一定的緩沖溶液中提供?___________、分別與兩條模板鏈結(jié)合的兩種引物、?______________、_________________，同時控制溫度使DNA復(fù)制在_____反復(fù)進(jìn)行。(2)PCR的反應(yīng)過程：變性→_____→延伸。耐熱的DNA聚合酶體外復(fù)性3.多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增DNA片段(1)PCR原理DNAPCR擴(kuò)增包括三個環(huán)節(jié)，變性、復(fù)性(退火)、延伸，這三步的溫度依次是()AA．95℃、55℃、72℃C．55℃、95℃、72℃B．72℃、55℃、95℃D．80℃、60℃、72℃PCR擴(kuò)增包括三個環(huán)節(jié)，變性、復(fù)性(退火)、延伸，這三步的考點植物的組織培養(yǎng)

1.影響植物組織培養(yǎng)的因素

(1)內(nèi)部因素：材料的選取。 (2)外部因素：營養(yǎng)成分的種類及配比；植物激素的用量及使用順序；pH、溫度、光照等。考點植物的組織培養(yǎng) 1.影響植物組織培養(yǎng)的因素2.獲得成功的關(guān)鍵(1)植物組織培養(yǎng)所利用的植物材料體積小、抗逆性差，對培養(yǎng)條件要求較高。

(2)培養(yǎng)材料一旦被微生物污染，就會導(dǎo)致實驗失敗。原因是微生物增殖快，生長迅速，消耗養(yǎng)分多，并產(chǎn)生代謝廢物毒害培養(yǎng)材料。(3)無菌技術(shù)主要包括對操作空間、實驗用具、實驗材料以及操作者的消毒或滅菌。2.獲得成功的關(guān)鍵(1)植物組織培養(yǎng)所利用的植物材料體積小、使用順序?qū)嶒灲Y(jié)果先使用生長素，后使用細(xì)胞分裂素有利于細(xì)胞分裂，但細(xì)胞不分化先使用細(xì)胞分裂素，后使用生長素細(xì)胞既分裂又分化同時使用分化頻率提高3.植物激素在組織培養(yǎng)過程中的重要作用(1)使用順序不同，結(jié)果不同(2)用量比值不同(生長素比細(xì)胞分裂素)，結(jié)果也不同①高：利于根的分化、抑制芽的形成。②低：利于芽的分化、抑制根的形成。③適中：促進(jìn)愈傷組織的形成。使用順序?qū)嶒灲Y(jié)果先使用生長素，后使用細(xì)胞分裂素有利于細(xì)胞分裂4.實驗操作中應(yīng)注意的幾個問題

(1)材料的選取：菊花的組織培養(yǎng)實驗中，應(yīng)選擇未開花植株的莖上部新萌生的側(cè)枝；月季花藥的培養(yǎng)實驗中，應(yīng)選擇花粉發(fā)育過程中的單核靠邊期的花粉進(jìn)行培養(yǎng)。

(2)外植體消毒：所用的消毒劑是體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的氯化汞溶液，所使用的清洗液是無菌水。 (3)培養(yǎng)過程：在初期，菊花的組織培養(yǎng)需光照，月季花藥的培養(yǎng)不需光照，而在后期均需光照。4.實驗操作中應(yīng)注意的幾個問題 (1)材料的選取：菊花的組織單倍體育種與花藥組織培養(yǎng)的區(qū)別

花藥組織培養(yǎng)形成的是高度不育的單倍體植株；而單倍體育種則需要把對花藥進(jìn)行組織培養(yǎng)得到的單倍體植株誘導(dǎo)為染色體數(shù)目正常的純合植株，以使其有正常的繁殖能力，再從中挑選出具有優(yōu)良性狀的個體。單倍體育種與花藥組織培養(yǎng)的區(qū)別 花藥組織培養(yǎng)形成的是高度不育【典例1】植物微型繁殖技術(shù)屬于植物組織培養(yǎng)的范疇。請回答下列問題。

(1)該技術(shù)可以保持品種的________________，繁殖種苗的速度________。離體的葉肉細(xì)胞在適宜的條件下培養(yǎng)，最終能夠形成完整的植株，說明該葉肉細(xì)胞具有該植物的全部________________。(2)把試管苗轉(zhuǎn)接到新的培養(yǎng)基上時，需要在超凈工作臺上進(jìn)行，其原因是避免__________的污染。【典例1】植物微型繁殖技術(shù)屬于植物組織培養(yǎng)的范疇。請回答下列

(3)微型繁殖過程中，適宜濃度的生長素單獨(dú)使用可誘導(dǎo)試管苗________，而與____________配比適宜時可促進(jìn)芽的增殖。若要抑制試管苗的生長，促使愈傷組織產(chǎn)生和生長，需要使用的生長調(diào)節(jié)劑是________(填“脫落酸”或“2,4－D”)。 (4)將某植物試管苗培養(yǎng)在含不同濃度蔗糖的培養(yǎng)基上一段時間后，單株鮮重和光合作用強(qiáng)度的變化如下圖。據(jù)圖分析，隨著培養(yǎng)基中蔗糖濃度的增加，光合作用強(qiáng)度的變化趨勢是___________，單株鮮重的變化趨勢是_____________。據(jù)圖判斷，培養(yǎng)基中不含蔗糖時，試管苗光合作用產(chǎn)生的有機(jī)物的量________(填“能”或“不能”)滿足自身最佳生長的需要。 (3)微型繁殖過程中，適宜濃度的生長素單獨(dú)使用可誘導(dǎo)試

(5)據(jù)上圖推測，若要在誘導(dǎo)試管苗生根的過程中提高其光合作用能力，應(yīng)________(填“降低”或“增加”)培養(yǎng)基中蔗糖濃度，以便提高試管苗的自養(yǎng)能力。 (5)據(jù)上圖推測，若要在誘導(dǎo)試管苗生根的過程中提高其光

[解題思路]植物組織培養(yǎng)技術(shù)是利用植物細(xì)胞全能性的原理進(jìn)行的，是植物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)。操作過程中應(yīng)注意無菌操作，避免雜菌污染，因為培養(yǎng)過程中使用的培養(yǎng)基營養(yǎng)物質(zhì)豐富；適宜濃度的生長素可以誘導(dǎo)試管苗生根，而如果要促進(jìn)愈傷組織形成芽，則需要與細(xì)胞分裂素配比；促進(jìn)愈傷組織產(chǎn)生和生長，應(yīng)使用2,4－D。[答案](1)遺傳性狀快遺傳信息(2)微生物(3)生根細(xì)胞分裂素2,4－D(4)逐漸減小先增加后下降不能(5)降低 [解題思路]植物組織培養(yǎng)技術(shù)是利用植物細(xì)胞全能性的原[答案?考點對應(yīng)練

1．將無根的非洲菊幼苗轉(zhuǎn)入無植物激素的培養(yǎng)基中，在適宜的溫度和光照等條件下培養(yǎng)一段時間后，應(yīng)出現(xiàn)的現(xiàn)象是()B

解析：雖然培養(yǎng)基中沒有激素，但幼苗葉片本身可以產(chǎn)生生長素，促進(jìn)生根；而細(xì)胞分裂素的產(chǎn)生部位在根尖，所以細(xì)胞分裂素不能產(chǎn)生，所以植物能夠在一定時間后長出少量的根而沒有長出新芽。?考點對應(yīng)練()B 解析：雖然培養(yǎng)基中沒有激素，但幼苗葉片本考點DNA的粗提取與鑒定

1.實驗原理

(1)DNA在不同濃度的NaCl溶液中的溶解度不同，其變化曲線如下圖所示。 (2)DNA不溶于酒精溶液，但細(xì)胞中的其他某些物質(zhì)可以溶于酒精溶液，據(jù)此可提取含雜質(zhì)較少的DNA。(3)DNA＋二苯胺藍(lán)色(用于DNA的鑒定)。考點DNA的粗提取與鑒定 1.實驗原理(3)DNA＋二苯胺步驟具體措施分析選材、制備雞血細(xì)胞液雞血＋檸檬酸鈉用離心機(jī)離心，再放冰箱內(nèi)靜置雞血紅細(xì)胞、白細(xì)胞都具有細(xì)胞核，含大量DNA；檸檬酸鈉(抗凝劑)使血液分層，血細(xì)胞處于底部提取血細(xì)胞核物質(zhì)①雞血細(xì)胞液＋蒸餾水，快速沿一個方向攪拌5min②紗布過濾①血細(xì)胞吸水漲破，快速攪拌加速血細(xì)胞破裂②過濾得到含染色質(zhì)的濾液，濾出細(xì)胞膜、細(xì)胞器等破碎結(jié)構(gòu)溶解DNA①濾液＋2mol/L的NaCl溶液40mL(攪拌)②紗布過濾不溶雜質(zhì)高鹽溶液溶解DNA，去除不溶于高鹽溶液的雜質(zhì)2.實驗流程步驟具體措施分析選材、制備雞血＋檸檬酸鈉用離心雞血紅細(xì)胞、白步驟具體措施分析析出含DNA 的黏稠物溶液＋蒸餾水，輕輕攪拌，析出絲狀物(直至不再增加為止)NaCl溶液相當(dāng)于被稀釋到0.14mol/L，這一濃度下DNA的溶解度最低，所以DNA析出過濾多層紗布過濾得到含DNA的黏稠物DNA黏稠 物再溶解2mol/LNaCl溶液20mL＋上述黏稠物→溶解高鹽溶液溶解DNA，再次去除不溶于高鹽溶液的雜質(zhì)過濾用2層紗布過濾濾液中含DNA，去除不溶雜質(zhì)

提取含雜質(zhì)較少的DNA上述濾液＋冷卻的95%酒精50mL析出DNA，去除溶于95%冷酒精的雜質(zhì)DNA鑒定絲狀物＋0.015mol/LNaCl溶液5mL＋二苯胺(現(xiàn)配)4mL，沸水浴5min，對照組不加絲狀物①試管1和試管2的自變量是有無絲狀物，因變量為有無淺藍(lán)色出現(xiàn)②0.015mol/LNaCl溶液溶解DNA續(xù)表步驟具體措施分析析出含DNA溶液＋蒸餾水，輕輕攪NaCl3.實驗關(guān)鍵(1)取材不能用哺乳動物的血細(xì)胞(由于其成熟紅細(xì)胞無細(xì)胞核)。(2)獲取DNA時要向雞血細(xì)胞液加入足量的蒸餾水，以便使細(xì)胞膜和核膜破裂，把核內(nèi)物質(zhì)釋放出來。

(3)實驗中有6次攪拌，除最后一次攪拌外，前5次攪拌均要朝一個方向。并且在析出DNA、DNA再溶解和提取DNA中，各步驟攪拌都要輕緩，玻璃棒不要直插燒杯底部，防止DNA分子斷裂。3.實驗關(guān)鍵(1)取材不能用哺乳動物的血細(xì)胞(由于其成熟紅細(xì)(4)2次加蒸餾水①第一次加蒸餾水是為了使血細(xì)胞吸水膨脹破裂(注：植物細(xì)胞是用洗滌劑溶解細(xì)胞膜)。②第二次加蒸餾水是為了稀釋NaCl溶液，析出DNA。(5)3個濃度的NaCl溶液①2mol/LNaCl溶液，為了溶解DNA，使DNA與蛋白質(zhì)分離。②一個是0.14mol/LNaCl溶液，為了析出DNA。③0.015mol/LNaCl溶液，目的是為了溶解DNA。(6)DNA易吸附在玻璃容器上，所以實驗中最好使用塑料燒杯、試管、容器，以減少DNA的損失。(4)2次加蒸餾水①第一次加蒸餾水是為了使血細(xì)胞吸水膨脹破4.去除濾液中的雜質(zhì)的其他方案(1)方案一：用嫩肉粉(蛋白酶)，它能水解蛋白質(zhì)，但對DNA沒有影響。(2)方案二：加熱至60～75℃，大多數(shù)蛋白質(zhì)不能忍受60～75℃的高溫而變性，但DNA不變性。4.去除濾液中的雜質(zhì)的其他方案(1)方案一：用嫩肉粉(蛋白酶【典例2】下列關(guān)于DNA粗提取與鑒定的說法正確的是()

A.析出DNA時要緩慢地加蒸餾水，當(dāng)析出黏稠物時即不再加水 B.在探究洗滌劑對植物細(xì)胞DNA提取的影響實驗中，自變量是洗滌劑和食鹽 C.提取的DNA溶解后加入二苯胺試劑即可染成藍(lán)色 D.將含有DNA的濾液放在60℃～75℃的恒溫水浴箱中保溫后過濾，能去除蛋白質(zhì)雜質(zhì)【典例2】下列關(guān)于DNA粗提取與鑒定的說法正確的是() A

[解題思路]DNA在0.14mol/L

的NaCl溶液中溶解度最低而析出，方法是用蒸餾水進(jìn)行稀釋，直至DNA析出量不再增加為止；探究洗滌劑對植物細(xì)胞DNA提取的影響實驗中，自變量是洗滌劑；提取的DNA溶解后加入二苯胺試劑后要進(jìn)行加熱和分設(shè)對照組。[答案]D [解題思路]DNA在0.14mol/L的NaCl?考點對應(yīng)練

2．在DNA粗提取過程中，先后兩次向燒杯中加入蒸餾水的作用分別是()B

A．稀釋血液、沖洗樣品 B．使血細(xì)胞破裂、降低NaCl濃度使DNA析出 C．使血細(xì)胞破裂、增大DNA溶解量 D．使血細(xì)胞破裂、提取含雜質(zhì)較少的DNA

解析：第一次是使血細(xì)胞破裂；第二次是降低NaCl濃度使DNA析出。?考點對應(yīng)練的作用分別是()B A．稀釋血液、沖洗樣品考點蛋白質(zhì)的提取和分離(以血紅蛋白的提取和分離為例)

1.樣品處理

(1)紅細(xì)胞的洗滌：目的是去除雜蛋白，分離時采用低速短時間離心，直至上清液不再呈現(xiàn)黃色，表明紅細(xì)胞已洗滌干凈。 (2)血紅蛋白的釋放：在蒸餾水和甲苯(溶解細(xì)胞膜)的作用下，紅細(xì)胞破裂，釋放出血紅蛋白。 2.粗分離

(1)分離血紅蛋白溶液：將攪拌好的混合溶液離心后，將試管中的液體用濾紙過濾，除去脂溶性沉淀層，于分液漏斗中靜置片刻后，分離下層的紅色透明液體。考點蛋白質(zhì)的提取和分離(以血紅蛋白的提取和分離為例) 1.樣分離的 種類相對分子質(zhì)量直徑大小運(yùn)動方式運(yùn)動速度運(yùn)動路程洗脫次序大分子 物質(zhì)大大于凝膠顆粒空隙垂直向下 的運(yùn)動較快較短先小分子 物質(zhì)小小于凝膠顆粒空隙垂直向下、 無規(guī)則擴(kuò) 散的運(yùn)動較慢較長后

(2)透析：取1mL的血紅蛋白溶液裝入透析袋中，將透析袋放入盛有300mL、物質(zhì)的量濃度為20mmol/L的磷酸緩沖液中，透析12h，去除樣品中分子量較小的雜質(zhì)。3.純化：利用凝膠色譜柱可對血紅蛋白進(jìn)行純化。凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)的原理，見下表：4.純度鑒定：使用最多的是SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳(可測定蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量)。分離的相對分直徑大小運(yùn)動方式運(yùn)動運(yùn)動洗脫大分子大大于凝膠垂直項目DNA粗提取與鑒定血紅蛋白的提取與分離材料選擇雞血細(xì)胞等含DNA豐富的生物組織哺乳動物成熟的紅細(xì)胞破碎細(xì)胞方式①動物細(xì)胞：吸水漲破②植物細(xì)胞：洗滌劑、食鹽攪拌研磨等加蒸餾水和甲苯攪拌去除雜質(zhì)方式①用不同濃度的NaCl溶液處理②用酒精處理③用蛋白酶處理等①透析處理②純化處理鑒定方式二苯胺，沸水浴SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳法測定相對分子質(zhì)量DNA與血紅蛋白的提取和分離過程比較項目DNA粗提取與鑒定血紅蛋白的提取與分離材料選擇雞血細(xì)胞【典例3】(2011

年南京一模)下列關(guān)于DNA和血紅蛋白的提取與分離實驗的敘述中，錯誤的是()

A．可用蒸餾水漲破細(xì)胞的方法從豬紅細(xì)胞中提取到DNA和蛋白質(zhì) B．用不同濃度的NaCl溶液反復(fù)溶解與析出DNA可去部分雜質(zhì) C．透析法分離蛋白質(zhì)的依據(jù)是利用蛋白質(zhì)不能通過半透膜的特性 D．進(jìn)一步分離與純化血紅蛋白可用凝膠色譜法、離心法、電泳法等【典例3】(2011年南京一模)下列關(guān)于DNA和血紅蛋

[解題思路]豬紅細(xì)胞中沒有細(xì)胞核，只能用于蛋白質(zhì)的提取和分離實驗中；DNA在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同，低濃度和高濃度都可使DNA溶解，但在0.14mol/L的NaCl溶液中，溶解度最小，可析出DNA，從而去除部分雜質(zhì)；透析法分離蛋白質(zhì)的依據(jù)是蛋白質(zhì)是大分子物質(zhì)，不能通過半透膜，從而去除樣品中分子量較小的雜質(zhì)。[答案]A [解題思路]豬紅細(xì)胞中沒有細(xì)胞核，只能用于蛋白質(zhì)的提取[答?考點對應(yīng)練

3．在血紅蛋白的整個提取過程中，不斷用磷酸緩沖液處理的目的是()D

A.防止血紅蛋白被O2

氧化 B.血紅蛋白是一種堿性物質(zhì)，需要酸中和 C.磷酸緩沖液會加速血紅蛋白的提取過程 D.讓血紅蛋白處在穩(wěn)定的pH范圍內(nèi)，維持其結(jié)構(gòu)和功能

解析：利用磷酸緩沖液模擬細(xì)胞內(nèi)的pH環(huán)境，保證血紅蛋白的正常結(jié)構(gòu)和功能，便于分離觀察和研究。?考點對應(yīng)練的目的是()D A.防止血紅蛋白被O2氧化考點PCR反應(yīng)的過程及結(jié)果

1．過程

(1)變性：當(dāng)溫度上升到90℃以上時，雙鏈DNA解聚為單鏈。 (2)復(fù)性：系統(tǒng)溫度下降至50℃左右時，兩種引物通過堿基互補(bǔ)配對與兩條單鏈DNA結(jié)合。 (3)延伸：當(dāng)系統(tǒng)溫度上升至72℃左右，溶液中的四種脫氧核苷酸(A、T、G、C)在DNA聚合酶的作用下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則合成新的DNA鏈。考點PCR反應(yīng)的過程及結(jié)果 1．過程2.結(jié)果(1)PCR一般要經(jīng)歷三十多次循環(huán)，每次循環(huán)都包括變性、復(fù)性、延伸。(2)兩引物之間的固定長度的DNA序列呈指數(shù)擴(kuò)增。2.結(jié)果(1)PCR一般要經(jīng)歷三十多次循環(huán)，每次循環(huán)都包括細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制PCR不同點解旋在解旋酶作用下邊解旋邊復(fù)制80℃～100℃高溫解旋，雙鏈完全分開酶DNA解旋酶、DNA聚合酶TaqDNA聚合酶引物RNADNA或RNA溫度體內(nèi)溫和條件高溫相同點①需提供DNA復(fù)制的模板②四種脫氧核苷酸作原料③子鏈延伸的方向都是從5′端到3′端3.細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制與PCR技術(shù)的比較細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制PCR不解旋在解旋酶作用下邊解旋邊80

【典例4】(2011

年韶關(guān)模擬)多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)是一種體外迅速擴(kuò)增DNA片段的技術(shù)。PCR過程一般經(jīng)歷下述三十多次循環(huán)：使模板DNA變性、解鏈