淋病實(shí)驗(yàn)室診斷河北省疾病預(yù)防控制中心性病中心實(shí)驗(yàn)室主要內(nèi)容淋球菌及致病性淋病實(shí)驗(yàn)室診斷淋病實(shí)驗(yàn)室診斷策略小結(jié)一、病原菌與致病性奈瑟氏淋球菌是淋病的病原菌，主要引起泌尿生殖系統(tǒng)化膿性炎癥。淋病的潛伏期平均3-5天,淋球菌主要侵犯上皮細(xì)胞,尤其是柱狀上皮細(xì)胞。一.病原菌（萘瑟氏淋球菌）1.形態(tài)

(1).形態(tài)呈腎形或蠶豆形，常成對排列，鄰近面扁平或略凹陷。無芽孢、無鞭毛。

(2).大小為0.6-0.8μm。

(3).革蘭氏染色陰性，呈粉紅色。美藍(lán)染色呈藍(lán)色。急性炎癥期病人，細(xì)菌多在患者分泌物的白細(xì)胞胞漿中。慢性炎癥期病人，細(xì)菌多在白細(xì)胞外。2、生物學(xué)特性(1).淋球菌適宜在潮濕、溫度為35-36℃、含5-7%二氧化碳的條件下生長。生長最適PH為7.2。

(2).淋球菌對外界理化因素抵抗力均差，在完全干燥環(huán)境中只存活1-2小時(shí)，室溫存活1-2天，50℃時(shí)存活5分鐘。附著于衣褲能存活18-24小時(shí)。

(3).淋球菌為需氧菌，對培養(yǎng)的要求較高，普通培養(yǎng)基不易生長，在含有動物蛋白的培養(yǎng)基上生長良好。

(4).能分解葡萄糖、產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。

(5).生長過程中產(chǎn)生氧化酶。還產(chǎn)生自溶酶。淋病的傳播途徑有以下二種：1)直接性接觸感染：成人淋病幾乎全部通過性接觸感染。2)間接接觸感染：新生兒可通過母親

產(chǎn)道分泌物間接感染。1、標(biāo)本的采集取材部位依據(jù)年齡性別性接觸方式

臨床表現(xiàn)取材拭子種類藻酸鈣拭子普通棉拭子滌綸拭子標(biāo)本的采集-取材部位(2)

幼女幼女和/或處女膜未破的感染者標(biāo)本：采集陰道分泌物

新生兒眼炎患者

采集眼結(jié)膜分泌物2、顯微鏡檢查1.染色涂片的制備：涂片方法在干凈玻片上預(yù)加一小滴生理鹽水。*用白金耳蘸取樣時(shí)，應(yīng)將白金耳半懸狀態(tài)使分泌物洗脫于鹽水；*用棉拭子取樣時(shí)，應(yīng)將棉拭子在鹽水處輕輕“滾動”，而不是涂抹。*自然干燥后,涂漠面朝上快速通過火焰三次固定。顯微鏡檢查注意事項(xiàng)：*涂片手法要輕，避免細(xì)胞破裂。薄厚得當(dāng)，以基本無細(xì)胞重疊為宜；*火焰固定以涂片在腕背皮膚接觸時(shí)僅感微熱為宜；*避免用加熱法使?jié)衿稍铮苊夤潭〞r(shí)過度加熱,以免扭曲細(xì)胞形態(tài)。

顯微鏡檢查染色方法:

革蘭染液

美蘭染液

姬姆薩染液

熒光抗體

革蘭染色為一傳統(tǒng)方法，因簡便、快捷及價(jià)廉、仍然為最廣泛采用的方法。革蘭染色將菌分為二大類，即染成紫色的革蘭陽性菌及染成紅色的革蘭陰性菌。

直接顯微鏡檢查革蘭染色:

涂片：將拭子在載玻片上輕輕滾動涂片。

固定：待涂片在室溫中空氣自然干燥，涂片經(jīng)火焰固定

革蘭染色：⑴第一液（結(jié)晶紫）染30~60秒，流水沖洗數(shù)秒；⑵第二液（碘液）染60秒，水洗；⑶第三液（95%乙醇）脫色30~60秒，水洗；⑷第四液（復(fù)紅）復(fù)染30秒，水洗。

革蘭染色：細(xì)胞內(nèi)革蘭陰性雙球菌3、淋球菌培養(yǎng)鑒定培養(yǎng)法為診斷淋病的金標(biāo)準(zhǔn).對女性淋病、直腸、咽部的確診應(yīng)做淋球菌培養(yǎng)培養(yǎng)的敏感性81~100%。培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)有：————特異性極高（100%）；可發(fā)現(xiàn)無癥狀淋球菌感染患者；可用于進(jìn)一步作藥敏試驗(yàn)；可用于治療后的判愈試驗(yàn)。3、淋球菌培養(yǎng)鑒定1、培養(yǎng)基淋球菌對營養(yǎng)要求較復(fù)雜,培養(yǎng)基中應(yīng)含有動物蛋白及細(xì)菌生長所需的各種因子。目前常用的選擇培養(yǎng)基有Thayer-Martin(T-M)培養(yǎng)基、血液瓊脂或巧克力瓊脂培養(yǎng)基。為抑制雜菌，在培養(yǎng)基中可加入少量抗菌物質(zhì)如多粘菌素Ｂ(25μg/ml)和萬古霉素(3.3μg/ml)等。目前淋球菌的成品培養(yǎng)基均有商品出售。接種標(biāo)本-四區(qū)劃分接種接種標(biāo)本-四區(qū)劃分接種淋球菌培養(yǎng)-培養(yǎng)條件淋球菌培養(yǎng)-觀察結(jié)果培養(yǎng)24小時(shí)后檢查平皿，此時(shí)沒有菌生長的平皿應(yīng)繼續(xù)培養(yǎng)至48小時(shí)，仍無菌生長才可丟棄，作出淋球菌培養(yǎng)陰性的報(bào)告。對選擇性培養(yǎng)基上分離的直徑在0.5～1mm，無色、灰白色的半透明菌落應(yīng)作進(jìn)一步鑒定。淋球菌培養(yǎng)-觀察結(jié)果培養(yǎng)24小時(shí)后的淋球菌菌落淋球菌培養(yǎng)-淋球菌的初步鑒定初步鑒定淋球菌的主要依據(jù)菌落特征氧化酶試驗(yàn)革蘭染色淋球菌氧化酶陽性淋球菌培養(yǎng)-淋球菌的確證試驗(yàn)來自泌尿生殖道符合初步鑒定標(biāo)準(zhǔn)的分離株，一般可診斷為淋球菌，準(zhǔn)確性達(dá)98%。對于菌落形態(tài)不典型的分離株，來自咽部、眼睛、或其他泌尿生殖道外部位的分離株，來自低危人群（如兒童）的分離株，以及涉及醫(yī)療法律案例的分離株，應(yīng)作確證試驗(yàn)。淋球菌培養(yǎng)-淋球菌的確證試驗(yàn)糖發(fā)酵試驗(yàn)DNA檢測全自動細(xì)菌檢定儀糖發(fā)酵試驗(yàn)糖發(fā)酵試驗(yàn)檢測奈瑟球菌分解特定糖類(葡萄糖、麥芽糖、乳糖及蔗糖)產(chǎn)酸的能力。根據(jù)淋球菌僅分解葡萄糖，腦膜炎球菌分解葡萄糖和麥芽糖，乳屑奈瑟球菌分解葡萄糖、麥芽糖、蔗糖或不分解這些糖類，可將淋球菌與可能在淋球菌選擇性培養(yǎng)基上分離出的其他奈瑟球菌加以鑒別。細(xì)菌葡萄糖麥芽糖乳糖蔗糖淋球菌+---腦膜炎球菌++--乳酰胺奈瑟菌+++-灰色奈瑟球菌----布蘭漢卡他球菌----糖發(fā)酵試驗(yàn)-奈瑟球菌屬的糖發(fā)酵特征菌落形態(tài)淋球菌樣革蘭染色革蘭陰性雙球菌氧化酶試驗(yàn)陽性快速糖發(fā)酵試驗(yàn)G+L-M-S-淋球菌的鑒定特征淋球菌種保存脫脂牛奶

-25℃

2個月

-70℃

1年液氮

長期凍干

長期

革蘭氏陰性細(xì)胞內(nèi)雙球菌男性確診

女性（其它樣本）

未見革蘭氏陰性

細(xì)胞內(nèi)雙球菌

分泌物培養(yǎng)初步診斷：菌落形態(tài)、陰性雙球菌

氧化酶陽性，

確證診斷：糖發(fā)酵三