ICS11.220CCSB41DB3212泰州市地方標準DB3212/T2035—2022鵝星狀病毒病綜合防控技術(shù)規(guī)范2022-05-10發(fā)布2022-05-10實施泰州市市場監(jiān)督管理局發(fā)布DB3212/T2035—2022前言本文件按照GB/T1.1—2020《化工作導(dǎo)則第1部分:化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院提出。本文件由泰州市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局歸口。本文件起草單位：江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院、國家水禽基因庫（江蘇）。本文件主要起草人：吳植、王安平、謝軍、吳雙、朱善元、王健、孫國波、袁敬知、紀榮超、呂海玲。IDB3212/T2035—2022鵝星狀病毒病綜合防控技術(shù)規(guī)范1范圍本文件規(guī)定了鵝星狀病毒病診斷、預(yù)防和控制措施。本文件適用于泰州市內(nèi)的鵝場星狀病毒病的診斷、預(yù)防和控制。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB13078飼料衛(wèi)生GB18596畜禽養(yǎng)殖業(yè)污染物排放NY/T682畜禽場場區(qū)設(shè)計技術(shù)規(guī)范NY/T1168畜禽糞便無害化處理技術(shù)規(guī)范NY5027無公害食品畜禽飲用水水質(zhì)NY/T5038無公害食品家禽養(yǎng)殖生產(chǎn)管理規(guī)范NY/T5339無公害農(nóng)產(chǎn)品畜禽防疫準則3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1鵝星狀病毒病gooseastrovirusdisease又稱“鵝痛風”，是由鵝星狀病毒引起的一種以雛鵝的腎臟、心包和肝臟等內(nèi)臟器官及關(guān)節(jié)出現(xiàn)大量尿酸鹽沉積為主要特征的急性傳染病。鵝星狀病毒分為鵝星狀病毒1型和鵝星狀病毒2型。4診斷4.1流行病學(xué)主要感染雛鵝，以5日齡~20日齡的雛鵝最為易感，日齡越小，發(fā)病率和死亡率越高，最高分別可達80%和50%。病鵝、隱性帶毒鵝、帶毒種蛋是主要傳染源。傳播途徑以消化道為主。本病的發(fā)生無明顯季節(jié)性，一年四季均可發(fā)生，常呈地方流行性。4.2臨床癥狀本病病程持續(xù)3d~7d，發(fā)病初期會出現(xiàn)精神不振，羽毛松亂，行動遲緩，排灰白色水樣糞便，消瘦但食欲相對正常；發(fā)病后期食欲減退至廢絕，關(guān)節(jié)腫大，跛行，臥地不起，不愿走動，部分病鵝出現(xiàn)單腳站立或呈現(xiàn)蹲姿，喙和蹼呈蒼白色，最終衰竭死亡。4.3病理變化本病可引起雛鵝體內(nèi)多種組織器官發(fā)生病變，剖檢可見心包和肝臟表面被大量白色尿酸鹽沉積覆蓋，肝臟淤血腫大，心包和氣囊有碎渣樣尿酸鹽滲出物，腎臟腫大、色澤變淡、表面沉積白色斑塊狀尿酸鹽，輸尿管內(nèi)可見大量白色滲出物。部分病死鵝的頸部皮下、腿部肌肉及關(guān)節(jié)腔中出現(xiàn)尿酸鹽沉積。病理組織學(xué)變化主要表現(xiàn)為腎小管上皮細胞壞死、間質(zhì)出血，腎小球腫脹，脾臟有大量紅細胞浸潤，肝細胞空泡變性、尿酸鹽沉積。4.4分子生物學(xué)診斷1DB3212/T2035—20224.4.1病料采集與處理采集疑似鵝星狀病毒感染死亡鵝的肝臟、脾臟和腎臟等組織樣品。采集病料時，用無菌手術(shù)剪取組織樣品，置于樣品保存管中，密封、編號；活禽泄殖腔/喉拭子樣品，置于樣品保存管中；所有樣品應(yīng)置于密閉容器中冷藏運輸，保存溫度在-15℃以下，時間不超過24h。按RNA提取試劑盒提取RNA，提取的RNA應(yīng)立即檢測，否則應(yīng)置于-70℃凍存?zhèn)溆谩?.4.2雙重實時熒光定量PCR檢測4.4.2.1引物及探針的設(shè)計4.4.2.1.1鵝星狀病毒1型引物及探針的設(shè)計——上游引物F：5’-CTGGTTTCGCTGAGACTCCT-3’；——下游引物R：5’-GGCCCAACTTCTGGTAGCTT-3’；——探針P：5’FAM-ACGCAGTGGAGTGTTATGCCTACCAG-BHQ3’4.4.2.1.2鵝星狀病毒2型引物及探針的設(shè)計——上游引物F：5’-GCGAGTATCTAGGCTCATTGG-3’；——下游引物R：5’-ATGATGGTTGGACAGGAAAAA-3’；——探針P：5’FAM-VIC-TTTTTGTAGAGACGGACTGGACGCGTTAT-BHQ3’4.4.2.2反應(yīng)體系與反應(yīng)條件雙重熒光定量PCR反應(yīng)體系25μL：2PremixExTaq（ProbeqPCR）12.5μL，50ROXReferenceDye0.4μL，DNA模板1μL，上、下游引物（1.0pmol/μLeach）各0.4μL，探針（1.0pmol/μLeach）為0.3μL，滅菌超純水補足25μL。反應(yīng)條件：95℃30s，95℃5s，60℃31s；40個循環(huán)。4.4.2.3PCR檢測結(jié)果的判定當陽性對照樣品GAstV1和GAstV2均出現(xiàn)典型的S型擴增曲線，空白對照樣品和陰性對照樣品均無擴增曲線出現(xiàn)，本次實驗結(jié)果有效。若Ct值小于或等于35，且具有典型S型擴增曲線則判定為檢測陽性；若Ct值大于35，或無典型S型擴增曲線則判定為檢測陰性。4.5結(jié)果判斷4.5.1符合4.1、4.2和4.3的，臨床診斷為疑似鵝星狀病毒病。4.5.2符合結(jié)果判定4.5.1，且符合4.4.2時，可確診為鵝星狀病毒病。5預(yù)防5.1環(huán)境控制鵝的飼養(yǎng)場所選址、布局及設(shè)施要求應(yīng)符合《動物防疫條件審查辦法》和NY/T682的要求。5.2引種檢疫按照NY/T5339的要求。5.3飼養(yǎng)管理5.3.1根據(jù)不同飼養(yǎng)方式和生長階段鵝的飼養(yǎng)要求，合理安排飼養(yǎng)密度，應(yīng)符合NY/T5038的要求。5.3.2生產(chǎn)用水水源，應(yīng)取用符合衛(wèi)生的自來水廠水、井水，飲用水水質(zhì)應(yīng)符合NY5027要求。5.3.3根據(jù)鵝的不同生長階段的營養(yǎng)需求配置飼料，飼料應(yīng)無霉變、無雜質(zhì)，應(yīng)符合GB13078的要求，防止營養(yǎng)過剩導(dǎo)致的營養(yǎng)性痛風和碳酸鈣成分過多導(dǎo)致的鈣鹽性痛風。5.4生物安全管理5.4.1全進全出飼養(yǎng)2

DB3212/T2035—2022舍養(yǎng)或放養(yǎng)，鵝清空后，空舍或者空場兩周以上，可飼養(yǎng)下一批新鵝。非流動的活動水域應(yīng)全部更換新水或進行有效消毒后，可飼養(yǎng)下一批新鵝。5.4.2消毒5.4.2.1空舍消毒已經(jīng)清場空舍的，對墻裙、地面、籠具等非易燃物品用火焰噴射器進行火焰消毒，對水泥地面和墻壁可用2%氫氧化噴灑消毒，籠具等工具及屋頂可用過氧乙酸、碘制劑等進行清洗消毒。清洗消毒2次~3次，每次間隔24h。清洗消毒后，再用甲醛密閉熏蒸消毒24h以上。5.4.2.2帶鵝消毒選用0.2%~0.3%的過氧乙酸進行帶鵝噴霧消毒，消毒時間宜選擇在有陽光、相對溫暖的中午時分。平時預(yù)防一周消毒1次~2次，發(fā)病時可2d~3d消毒1次。5.4.2.3鵝舍用具消毒使用無腐蝕性、無刺激性消毒劑定期對食槽、飼料車、飲水器等進行消毒。5.4.2.4人員消毒人員進入鵝場或生產(chǎn)區(qū)，必須經(jīng)過洗澡、更衣和紫外線消毒。5.4.2.5車輛工具消毒進入生產(chǎn)區(qū)的車輛用腐蝕性小的消毒藥進行噴灑消毒，車輛通過裝有有效消毒液的消毒池進入。日常生產(chǎn)過程中常用工具應(yīng)定期采用日曬、消毒液噴灑或浸泡等方式進行消毒。5.5預(yù)防接種針對該病，市場暫無合格可供疫苗使用。該病未發(fā)生時，可飼喂提高鵝機體免疫力的藥物等。6控制6.1隔離患病鵝群在確診鵝星狀病毒病后，應(yīng)立即將未出現(xiàn)癥狀的鵝群隔離出飼養(yǎng)場地，放于清潔無污染場地飼養(yǎng)，對患病的鵝群由單獨人員進行隔離飼養(yǎng)，飼養(yǎng)人員進出飼養(yǎng)場地是要注意換衣?lián)Q鞋，避免交叉感染。6.2全場緊急消毒對于可能接觸的用具、設(shè)備、鵝舍、道路及其它建筑進行徹底的消毒清洗，盡可能地消滅或隔離蒼蠅、蚊蟲等傳播媒介，用具需要天天清洗消毒。6.3緊急預(yù)防治療本病可用合適的高免血清或高免卵黃抗體進行緊急預(yù)防接種。6.4無害化處理病死鵝按照《病死動物無害化處理技術(shù)規(guī)范》（農(nóng)醫(yī)發(fā)〔2013〕34號）規(guī)定采取深埋或焚燒方式進行無害化處理。對糞便及其它被污染物品，按NY/T1168進行無害化處理。按GB1859