1、結核感染T細胞檢測及意義PPT課件結核感染T細胞檢測及意義PPT課件contents目錄1. 結核病的診斷現狀2. TB-IGRA產品介紹3. TB-IGRA的臨床應用4. TB-IGRA檢測方法及結果解釋contents目錄1. 結核病的診斷現狀2. TB-IGR結核感染T細胞檢測及意義課件結核感染T細胞檢測及意義課件發病人群前五位的國家India(2.0 million2.5 million) (26%) China (0.9 million1.2 million)South Africa (0.40 million0.59 million)Indonesia (0.37million0.

2、54 million) Pakistan (0.33 million0.48million).38%發病人群前五位的國家India(2.0 million2.結核病現狀及危害-傳播范圍廣結核病現狀及危害-傳播范圍廣World Health Organization.Multidrug and extensively drug-resistant TB (M/XDR-TB): 2010 global report on surveillance and response. WHO/HTM/TB/2010.3.逐年增加全球27個MDR-TB流行嚴重的國家之一，中國尤其嚴重World Health

3、Organization.Mult HIV 感染和艾滋病破壞了機體的免疫系統，加劇了結核的發病， 1/3HIV病人死于結核 多菌耐藥的結核菌感染率增加 貧困、移民等 細菌學涂片率低，2/3TB病人菌陰性原 因 HIV 感染和艾滋病破壞了機體的免疫系統，加劇了結核的結核發病機理LTBI結核分枝桿菌（MTB）暴露感染自愈90%不發展為結核病Latency 2-5%疾病進展1%活動性結核病細菌全部被清除一直存在活菌需預防性服藥不需要預防性服藥Latency 潛伏9%復燃注：感染后發病與否和機體易感性有關！5-10%HIV10%活動性結核： 發病狀態潛伏性結核感染（LTBI）：是宿主感染結核桿菌后尚未

4、發病的一種特殊狀態未根治結核發病機理LTBI結核分枝桿菌（MTB）暴露感染自愈90%結核病的免疫主要是細胞免疫Dheda K, et al.The immunology of tuberculoisis:From bench to beside.Respirogy,2010,15:433-450結核病的免疫主要是細胞免疫Dheda K, et al.Th11耗時長4-8周檢出率低50%涂陰檢出低22%-38%肺外結核難結核檢測的方法比較結核診斷X射線分子診斷涂片鏡檢細菌培養特異性差誤診肺炎、肺癌肺外結核難 操作復雜技術要求高涂陰檢出低34%肺外結核難 不能區分NTM檢出率低20%肺外結核難假陽

5、/假陰多；（涂陰45%/35%）WHO建議禁用抗體檢測TST（結核菌素皮試）不能區分卡介苗接種者不能區分NTM48-72小時復診取樣操作簡便檢出率高（活動結核和潛伏結核）區分BCG、NTM檢測肺外結核IGRA方法接觸史臨床癥狀病原/病理11耗時長4-8周結核檢測的方法比較結核X射線分子診斷涂片細12TB-IGRATuberculosis（結核TB）Interferon（干擾素）Gamma（ ）Release（釋放）Assay（測定）原理: 感染者體內被結核菌（TB）抗原致敏的效應T細胞，在體外受到相同抗原的刺激（在APC輔助下）后，會分泌大量IFN- (細胞因子)。通過IFN- 的檢測，判斷結

6、核感染情況。12TB-IGRATuberculosis（結核TB）contents目錄1. 結核病的診斷現狀2. TB-IGRA介紹3. TB-IGRA的臨床應用4. TB-IGRA檢測方法及結果解釋contents目錄1. 結核病的診斷現狀2. TB-IGRAPCT cellTB-IGRA方法介紹細胞因子活化/細胞因子細胞因子ELISAELISPOT流式細胞術細胞因子活化標志物IGRAsIFN-g release assayTNFaIFNgCK體外刺激：RD1抗原 原理: 機體內被結核菌抗原致敏的效應T細胞，在體外受到相同抗原的刺激（在APC輔助下）后，會分泌大量IFN- (細胞因子)。通過

7、IFN- 的檢測，判斷結核感染情況。APCT cellTB-IGRA方法介紹細胞因子活化/細胞因兩種TB-IGRA比較高孟秋,劉菲,紀濱英等.兩種-干擾素釋放分析在結核病臨床診斷中的比較研究.中華結核和呼吸雜志，2012，35（10）：762-765兩種TB-IGRA比較高孟秋,劉菲,紀濱英等.兩種-干擾素TB-IGRA 產品特性高靈敏度，檢出率85%以上高特異性RD1區編碼的ESAT-6和CFP-10兩個特異性抗原該抗原具 有較強的Thl細胞免疫原性，且在所有制備卡介 苗的菌株及環境中絕大多數非結核分枝桿菌中均不存在該抗原，不受卡介苗和非分支桿菌影響TNFaIFNgCKTB-IGRA 產品特

8、性高靈敏度，檢出率85%以上TNFaI國內外相關研究TB-IGRA快速簡便，是一種值得推廣的檢測方法：張華，黃圣文，羅振元.結核分枝桿菌r-干擾素體外釋放定量試驗診斷結核感染的臨床應用.中華醫學院感染學雜志 2009年第19卷第14期國內外相關研究TB-IGRA快速簡便，是一種值得推廣的檢測方國內外相關研究國內文章sensitivity結核分枝桿菌-干擾素體外釋放定量試驗診斷結核感染的臨床應用90.24%（74/82）TB-IGRA與TST檢測菌培陽性肺結核患者比較80.3%（118/147)-干擾素釋放試驗診斷結核分枝桿菌感染的臨床意義88.64%（39/45）結核分枝桿菌相關-干擾素體外釋

9、放試驗在結核病診斷中的應用價值90.7%（243/268）兩種結核分枝桿菌相關-干擾素定量檢測試劑盒檢測結核分枝桿菌感染結果比較研究90.9%（290/319）體外釋放酶聯免疫法檢測結核桿菌-干擾素的實驗研究89.11%（90/101）干擾素釋放酶聯免疫法（TB-IGRA）用于檢測結核分枝桿菌的優越性96.12%(99/103)體外-干擾素檢測結核分枝桿菌不同方法的應用價值比較90.1%(308/342干擾素體外釋放酶聯免疫法在結核潛伏感染診斷中的價值88.6%(39/44)國外同類試劑優勢A Three-Way Comparison of Tuberculin Skin Testing, Q

10、uantiFERON-TB Gold and T-SPOT.TB in ChildrenLatent TB檢出高Positive Tuberculin Skin Test or Interferon-Gamma Release Assay in Patients with Radiographic Lesions Suggesting Old Healed TuberculosisLatent TB檢出高Estimating diagnostic accuracy of tests for latent tuberculosis infection without a gold standar

11、d among healthcare workers特異性93.6%Clinical Utility of Interferon Gamma Assay in the Diagnosis of Tuberculosis靈敏度90%,特異性97%國內外相關研究國內文章sensitivity結核分枝桿菌-contents目錄1. 結核病的診斷現狀2. TB-IGRA介紹3. TB-IGRA的臨床應用4. TB-IGRA檢測方法及結果解釋contents目錄1. 結核病的診斷現狀2. TB-IGR臨床應用案例肺結核輔助診斷：某院呼吸科病人，男臨床癥狀：發熱1周，咳嗽檢測結果：TB-IgG(-)，TB

12、-IGRA（+）T-N的值是21.5pg/ml結果分析：TB-IgG靈敏度低，易漏檢。臨床診斷：肺結核備注：2011年，WHO建議不再使用結核抗體檢測結核感染臨床應用案例肺結核輔助診斷：臨床應用案例肺外結核輔助診斷：某院感染科，女，75歲 臨床癥狀：發熱數日，胸痛，干咳檢測結果：X射線胸腔積液影像，積液涂片（-）、積液培養（-）、TB-IGRA T-N 350pg/ml，積液單核細胞增多，血沉快結果分析：對于肺外結核的診斷，涂片與培養的陽性率極低，TB-IGRA（+），結合其他非特異輔助指標可明確診斷肺外結核。臨床診斷：結核性胸膜炎臨床應用案例肺外結核輔助診斷：臨床應用案例肺炎與肺結核的鑒別診

13、斷：某醫院呼吸內科，男，59歲臨床癥狀：肺部有胸水，高燒發熱，初步認定肺炎，抗生素治療1周不見效果，高度懷疑結核。檢測結果：痰涂片（-），結核抗體（-），TB-IGRA（-）結果分析：傳統結核檢測檢出率在20%-40%，靈敏度低。IGRA檢出率在90以上，陰性排除意義高于涂片和抗體。患者繼續用藥3周，病情好轉。臨床診斷：肺炎臨床應用案例肺炎與肺結核的鑒別診斷：23MTB與其他桿菌感染的鑒別診斷：某院呼吸內科病人，男臨床癥狀：發熱、咳嗽、咳痰、呼吸困難，乏力，多汗，關節疼痛檢測結果：痰涂片（-），菌培（-），肺部X射線可見肺結節，胸腔積液診斷過程：該院診斷為結核但治療無好轉，患者轉院檢測IGRA

14、s（-），試管凝集實驗+，布病抗體+，確診布氏桿菌感染，與該院打官司勝訴。結果分析：由于痰涂片和菌培檢出率低，陰性也未能引起重視，只憑X片和癥狀診斷為結核并治療。治療無效后，病人轉院，檢測IGRAs陰性，考慮排除結核，且病人為牧民，確診布氏桿菌病。官司敗訴后，該院才開始重視IGRAs檢測。最終確診：布氏桿菌病臨床應用案例23MTB與其他桿菌感染的鑒別診斷：臨床應用案例MTB與NTM的鑒別診斷：某院感染科病人，男臨床癥狀：發熱1周，咳嗽，少量痰檢測結果：兩次痰涂片（+），兩次TB-IGRA（-），肺部X射線無異常，后經菌培鑒定為菌培（-）結果分析：痰涂片不能區分非結核分枝桿菌，造成假陽性，而TB

15、-IGRA與菌培結果相符，對結核分枝桿菌有很好的特異性。臨床診斷：鳥型分枝桿菌感染臨床應用案例MTB與NTM的鑒別診斷：臨床應用案例NTM（非結核分枝桿菌）比例增高2000 年全國流調分離的抗酸桿菌菌株中，NTM 菌株占11. 1% ，其中90% 為非結核分枝桿菌肺病。NTM 肺病的臨床表現與結核病相似， 既可有全身中毒癥狀，亦有局部損害表現。但癥狀和體征缺乏特異性，20%-50% 的病人無明顯癥狀，除非做菌型鑒定，憑臨床表現難與肺結核病相鑒別。PPD 試驗：弱陽性多見，但不能鑒別MTB和NTM感染。 細菌學檢查：常規痰涂片無法鑒別MTB和NTM。培養特性：固體培養基上，NTM菌落常光滑，部分

16、菌落有色素產生，生長迅速，且在含PNB(對硝基苯甲酸)和含TCH (噻吩二羧酸肼)選擇性培養基上均可生長，而結核分枝桿菌只在TCH選擇性培養基上生長。NTM（非結核分枝桿菌）比例增高2000 年全國流調分離的抗 使用抗TNF藥物前排查結核的意義06.16.201126發病率 /100.000 患者/年Dixon W G et al. Ann Rheum Dis 2010;69:522528.Tubach et al. Arthritis & Rheum 2009; 60: 1884-1894發病率 /100.000 患者/年 使用抗TNF藥物前排查結核的意義06.16.201潛伏性感染監控某中

17、學高三年級小規模結核爆發初始病例1例（7班）6月初第一批疫情5例（7班）8-9月第二批疫情10例（8例7班）9月對師生采血進行IGRA檢測IGRA陽性者進行預防性服藥疫情控制自行住院全年級師生胸透，胸透陰影預防性服藥全年級師生PPD試驗疫情發展階段結核病例及分布疫情時間疫情初處理一起小規模結核暴發流行的調查與控制潛伏性感染監控某中學高三年級小規模結核爆發初始病例1例（7班潛伏性感染、抗結核治療監控定量檢測干擾素釋放強度，可用于持續監控：潛伏性感染、抗結核治療監控定量檢測干擾素釋放強度，可用于持抗結核治療效果輔助評估Kobashi等利用IGRA對50例結核患者的治療進行追蹤檢測：治療開始后，結核

18、患者中IGRA的敏感性和反應強度均有明顯的下降趨勢抗結核治療效果輔助評估Kobashi等利用IGRA對50例結綜上，TB-IGRA： 高特異性，高靈敏性，體外，全血，定量檢測應用方向：肺結核輔助診斷肺外結核輔助診斷結核感染排查潛伏性感染監控，抗結核治療追蹤TB-IGRA的臨床應用綜上，TB-IGRA：TB-IGRA的臨床應用TB-IGRA應用匯總肺結核的輔助診斷，尤其是細菌學檢測陰性的肺結核的輔助診斷：TB-IGRA從細胞水平上檢測結核感染，檢出率高，早期感染即可檢出，實現早診斷早治療。肺外結核的輔助診斷：TB-IGRA取靜脈血進行檢測，克服肺外結核患者痰樣找不到結核菌，病灶部位取樣難的問題。

19、呼吸系統疾病與結核的鑒別診斷：發熱、咳嗽、咳痰2周；咯血；胸痛等癥狀疑似結核，胸片/CT不能明確診斷者；抗炎治療治療效果不佳患者的結核排查，陰性結果在很大程度上可以排除結核。TB-IGRA應用匯總肺結核的輔助診斷，尤其是細菌學檢測陰性2周以上不明原因發熱病人的結核感染排查：有研究發現其中20%是結核引起的，大部分是肺外結核。高危人群的結核感染篩查：如使用生物制劑/免疫抑制劑、大劑量激素患者，HIV患者，糖尿病患者，血液病和癌癥放化療之前患者進行結核篩查，以防陳舊性結核、潛伏性結核爆發以及近期結核感染。抗結核治療效果跟蹤以及潛伏性結核定期監控：TB-IGRA結果是一個定量值，活動性結核患者隨治療

20、進行陽性強度降低甚至轉陰；潛伏感染患者若發生陽性強度明顯升高，有發展成活動性結核風險。流調顯示有85%90%新診斷的活動性肺結核由潛伏性結核演變而來。2周以上不明原因發熱病人的結核感染排查：有研究發現其中20%已有25個國家發布了IGRAs 應用指南： 美國、加拿大、英國、巴西、法國、西班牙、意大利、德國、澳大利亞、葡萄牙、愛爾蘭、瑞士、丹麥、挪威、芬蘭、捷克、斯洛伐克、波蘭、保加利亞、克羅地亞、沙特、 奧地利、南韓、日本、中國潛伏性感染和活動性結核的輔助診斷（美國CDC，英國NICE ，中國） 疑似結核的輔助診斷，陰性結果排除感染（中國）在所有人群中可以完全代替PPD試驗（美國CDC，日本厚

21、生省） 接受抗TNF-a治療前必須用IGRA進行結核桿菌感染的篩查，PPD篩查不再使用（瑞士衛生署和肺科協會） 兩個國際組織WHO、ECDC也發布了應用指南。萬泰TB-IGRA試劑是“中華人民共和國出入境檢驗檢疫行業標準結核分枝桿菌-干擾素體外檢測方法”中唯一提到的結核檢測試劑。已有25個國家發布了IGRAs 應用指南： 美國結核感染T細胞檢測及意義課件contents目錄1. 結核病的診斷現狀2. TB-IGRA產品介紹3. TB-IGRA的臨床應用4. TB-IGRA檢測方法及結果解釋contents目錄1. 結核病的診斷現狀2. TB-IGR萬泰TB-IGRA北京萬泰生物藥業股份有限公司

22、國家傳染病診斷試劑與疫苗工程技術研究中心廈門大學研制歷經6年，2012年4月獲得SFDA認證國食藥監械（準）字2012第3400557號萬泰TB-IGRA北京萬泰生物藥業股份有限公司國家傳染病診斷TB-IGRA檢測方法TB-IGRA檢測方法陰性對照管N陽性對照管P檢測管T培養液無刺激原培養液刺激抗原培養液PHATB特異性刺激抗原（RD1區：ESAT-6、CFP-10）無刺激效應非特異性刺激抗原（PHA）評估-IFN升高水平評估-IFN本底水平評估T淋巴細胞活性ELISA定量分析陰性對照管N陽性對照管P檢測管T培養液培養液培養液TB特異性TB-IGRA結果判定T：測試培養管（T）含量值N：本底對照培養管（N）含量值P：陽性對照培養管（P）含量值 NP-NT-N結果判定結果解釋400任何值14 且 N/4陽性感染結核分枝桿菌（結核活動期感染、潛伏感染）2014 或 N/4陰性未感染結核分枝桿菌2014 或 400任何值任何值不確定TB-IGRA結果判定T：測試培養管（T）含量值NP-NT-TB-IGRA結果判定TB-IGRA結果判定全自動酶免平臺系統全自動酶免平臺系統結核感染T細胞檢測及意義課件TB-IGRA注意事項采血管推薦使用BD或Greiner Bio-One肝素鋰采血管，內毒素最少，對結果影響最小采血到分裝不超過4小時，避免混血激烈/溶血等病人情況 免疫系統異