1、氯霉素類藥物在獸醫(yī)臨床上應(yīng)用及其殘留研究進(jìn)展于文剛2021/9/301氯霉素類抗生素的介紹及應(yīng)用氯霉素的殘留標(biāo)準(zhǔn)氯霉素殘留檢測方法2021/9/302氯霉素類抗生素的介紹及應(yīng)用氯霉素類(Chloramphenicols，簡稱CAPs)包括氯霉素及其衍生物，又稱為酰胺醇類（Amphemicols）。獸醫(yī)臨床應(yīng)用的主要有氯霉素（Chloramphenicol），甲砜霉素（Thiamphnicol,TAP）、氟甲砜霉素（Florfenicol,FF）2021/9/303氯霉素類抗生素的化學(xué)結(jié)構(gòu)2021/9/304作用機(jī)制與70s核蛋白體的50s亞基上的A位緊密結(jié)合，阻礙了肽?；D(zhuǎn)移酶的轉(zhuǎn)肽反應(yīng)，使肽

2、鏈不能延伸，而抑制蛋白質(zhì)的合成。2021/9/305氯霉素（Chloramphenicol） 理化性質(zhì)為左旋體，在水中微溶，在弱酸性和中性溶液中較穩(wěn)定，能耐煮沸，遇堿易失效。為廣譜抑菌劑,主要抑制細(xì)菌肽鏈形成,使蛋白合成受阻,高濃度也能殺菌。一般對革蘭氏陰性菌的作用比陽性菌強(qiáng),對厭氧菌也有相當(dāng)作用,但對綠膿桿菌、結(jié)核桿菌、病毒、真菌等無效。2021/9/306 內(nèi)服易吸收(馬、牛、羊例外),肌肉注射吸收緩慢(琥珀氯霉素的水溶性強(qiáng),吸收也迅速)。體內(nèi)廣泛分布,肝、腎中濃度最高,亦易透過血腦屏障進(jìn)入腦脊液。在肝內(nèi)大部分被失活,僅10%原藥從尿中排出。用于防治畜禽的沙門氏菌病和大腸桿菌感染。對牛巴氏

3、桿菌病、禽霍亂及敏感菌引起的泌尿道、呼吸道感染也有效。2021/9/307不良反應(yīng)：抑制骨髓造血機(jī)能可逆性地抑制骨髓(與使用劑量和療程有關(guān))臨床表現(xiàn)為使用劑量或頻率依賴性的血細(xì)胞減少，一般在停藥后12d內(nèi)恢復(fù)正常。不可逆的再生障礙性貧血（與CAP的使用劑量和療程無關(guān)，與個(gè)體特異性反應(yīng)有關(guān)） 即使與藥物停止接觸，骨髓抑制仍將長期存在，骨髓造血功能極少恢復(fù)。臨床表現(xiàn)為全血細(xì)胞下降，死亡率高達(dá)5070，存活者也容易發(fā)生粒細(xì)胞性白血病，發(fā)生CAP再生障礙性貧血的幾率為1：30000，雖然幾率不高，卻是致命性的。 2021/9/308不良反應(yīng)由于氯霉素能夠抑制記憶性的免疫應(yīng)答反應(yīng)，故動(dòng)物接種疫苗期禁用。

4、氯霉素亦可產(chǎn)生胃腸道反應(yīng)和四環(huán)素類相似的二重感染。氯霉素為肝微粒體藥酶的抑制劑，能明顯減慢其他藥物的代謝，從而延長其他藥物的效果，或增強(qiáng)其毒性。2021/9/309本品是第一個(gè)用于臨床的廣譜抗生素(1949年),因50年代發(fā)生致死性再生障礙性貧血和灰嬰綜合征,80年代又出現(xiàn)耐氯霉素菌株,加上其他廣譜抗菌藥的陸續(xù)出現(xiàn),使在國內(nèi)外的應(yīng)用普遍減少。1984年FDA禁止氯霉素用于所有食品動(dòng)物。2021/9/3010甲砜霉素thiamphenicol是氯霉素的同類物,水溶性略大于氯霉素,性更穩(wěn)定。抗菌譜與抗菌作用近似氯霉素,對多數(shù)腸桿菌科細(xì)菌、金葡菌及肺炎球菌的作用略遜于氯霉素。與氯霉素可完全交叉耐藥。

5、內(nèi)服吸收迅速而完全,體內(nèi)廣泛分布,在肝內(nèi)不被失活,組織中含量高于同劑量氯霉素(腎、肺、肝中約高34倍),因而體內(nèi)抗菌活性也較強(qiáng)。以原型經(jīng)腎排泄。適應(yīng)癥同氯霉素。在呼吸道、膽汁和尿液中含量高,故主要用于呼吸道、腸道和尿路感染。本品仍有血液系統(tǒng)毒性(可逆性紅細(xì)胞生成抑制),對免疫也有較強(qiáng)的抑制作用(約比氯霉素強(qiáng)6倍)。但不產(chǎn)生再生性障礙性貧血。2021/9/3011氟苯尼考 Florfenicol動(dòng)物專用氯霉素類的廣譜抗菌藥1990年首次在日本上市，用于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)1993年挪威批準(zhǔn)該藥治療鮭的癤病1995年法國、英國、奧地利、墨西哥及西班牙批準(zhǔn)用于治療牛呼吸系統(tǒng)細(xì)菌性疾病。在日本和墨西哥還批準(zhǔn)用作

6、豬的飼料添加劑，預(yù)防和治療豬的細(xì)菌性疾病.我國目前已通過了該藥的審批。2021/9/3012氟苯尼考 Florfenicol具有抗菌廣譜，吸收好，體內(nèi)分布廣，安全高效等特點(diǎn)1.廣譜 對革蘭氏陽性菌及陰性菌皆有強(qiáng)大的殺滅作用，對厭氧革蘭氏陽性菌及陰性菌、立克次氏體、支原體均有較強(qiáng)的抗菌作用。2.速效 口服或肌注1小時(shí)后血液中可達(dá)治療濃度。1.53小時(shí)即可達(dá)藥峰濃度；有效血藥濃度可維持20小時(shí)以上。3.穿透力強(qiáng)，組織藥物濃度高，可透過血腦屏障，特別適用于控制腦部和呼吸道感染。2021/9/30134.毒性小 安全，在規(guī)定休藥期（28天）停藥無殘留能保證人，畜安全。5.安全范圍大，用推薦劑量的十倍，

7、不會產(chǎn)生不良反應(yīng)和中毒。6.不易產(chǎn)生耐藥性。F原子取代了氯霉素、甲砜霉素中丙烷鏈3碳位置上的-OH，阻止了細(xì)菌乙酰轉(zhuǎn)移酶在此位置上的乙?；饔?。 對氯霉素、喹諾酮類及其他抗菌藥物耐藥的細(xì)菌仍敏感。2021/9/3014適應(yīng)癥動(dòng)物專用廣譜抗生素特別適用于對氯霉素、喹諾酮類及其他抗菌藥物有耐藥性的細(xì)菌感染主用于牛、豬、雞和魚類的細(xì)菌性病，如牛：呼吸系統(tǒng)疾病、巴氏桿菌病、沙門氏菌病、大腸桿菌病、葡萄球菌感染、鏈球菌感染、乳房炎(干乳期)、棒狀桿菌病等。豬：傳染性胸膜病、豬喘氣病、沙門氏菌病、大腸桿菌性下痢、萎縮性鼻炎，豬丹毒、豬肺疫、無乳綜合癥等。 雞：大腸桿菌病、沙門氏菌、傳染性、 慢性呼吸道病及

8、葡萄球菌病等。注：有胚胎毒性，故妊娠動(dòng)物禁用。2021/9/3015用量： im/iv:20mk/kg 雞內(nèi)服：20-30 mk/kg 豬混飼50ppm用法： 注射液：畜：每個(gè)注射部位不超過10ml，1次/48h，連用2次；禽：1次/日，連用3次。 溶液/可溶性粉：飲水給藥 預(yù)混劑（500 ppm）：拌料2021/9/3016氯霉素對人的危害1、骨髓造血機(jī)能紊亂: 氯霉素對骨髓造血機(jī)能有抑制作用，可引起血小板減少、粒細(xì)胞缺乏、再生障礙性貧血、溶血性等，多數(shù)在長期或多次用藥的過程中發(fā)生。發(fā)生率約為1/100000-1/5000。骨髓的毒性分為兩類：一是可逆性抑制。主要影響紅細(xì)胞、血小板和白細(xì)胞的

9、形成。二是再生障礙性貧血。前者與劑量有關(guān)，藥物的血濃度超過5ug/ml即可出現(xiàn)；后者少見，發(fā)生較晚而極為嚴(yán)重，與氯霉素的每日用量和總量均無直接關(guān)系。 2、灰嬰綜合癥: 在早產(chǎn)兒和新生兒肝內(nèi)有些酶系統(tǒng)發(fā)育尚不完全，葡萄糖醛酸結(jié)合的能力較差，因此影響氯霉素在肝中的解毒過程；此外，腎臟排泄能力亦較弱，能招致藥物蓄積中毒。 3、 胃腸道癥狀、口部癥狀：胃腸道反應(yīng)主要有腹脹、腹瀉、食欲減退惡心、嘔吐則少見?？诓堪Y狀如口腔粘膜充血、疼痛、糜爛、口角炎和舌炎等。 4、 其它不良反應(yīng): 可引起視神經(jīng)炎、視力障礙、多發(fā)性神經(jīng)炎、神經(jīng)性耳聾以及嚴(yán)重失眠。有時(shí)發(fā)生中毒性精神病，主要表現(xiàn)為幻視、幻聽、定向力喪失、精神

10、失常等。 2021/9/3017氯霉素的殘留標(biāo)準(zhǔn)氯霉素(Chloramphenicol，CAP)是一種廣譜抗生素，雖然是國家規(guī)定的食品動(dòng)物禁用藥品，但是由于其具有療效好、價(jià)格低廉等優(yōu)點(diǎn)，目前仍有小部分人不顧國家規(guī)定，將其應(yīng)用于各類家禽、家畜及水產(chǎn)品的各種傳染性疾病的治療。氯霉素有其嚴(yán)重的副作用，它會抑制人體骨髓的造血功能，從而引起再生障礙性貧血和粒細(xì)胞缺乏癥。因此，近年來，世界各國特別是歐盟、美國等發(fā)達(dá)國家對動(dòng)物性食品中氯霉素殘留的檢測要求日趨嚴(yán)格，分析方法的檢測限不得超過0.1ug/kg2021/9/3018部分國家檢驗(yàn)檢疫要求 1999年9月13日中華人民共和國農(nóng)業(yè)部發(fā)布了動(dòng)物性食品中獸藥

11、最高殘留限量的通知，規(guī)定了氯霉素在所有食品動(dòng)物的可食用組織中不得檢出。 中國農(nóng)業(yè)部已將氯霉素從2000年版中國獸藥典中刪除列為禁藥。 2002年1月，美國食品與藥品管理局（FDA）公布了禁止在進(jìn)口動(dòng)物源性食品中使用氯霉素 歐盟的進(jìn)口食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定“氯霉素含量標(biāo)準(zhǔn)為不得檢出?！逼洹安坏脵z出”的含義是氯霉素含量在1ppb以下，即含量在十億分之一以下。2002 年，歐盟提出氯霉素的最低檢測限為0.3g/kg。德國部分州的特殊檢測標(biāo)準(zhǔn)為0.2ppb。日本對中國的動(dòng)物源性食品中氯霉素的檢測最高限量為0.05mg/kg。我國方法檢測限量值： 牛奶 0.25ng/ml 肉類1.5ng/g 尿液1.0ng/

12、ml 血清0.5ng/ml 蜂蜜 (快檢)1.5ng/g 蜂蜜 (18柱) 0.1ng/g 2021/9/3019U.S. Residue Limits for Veterinary Drugs and Unavoidable Contaminates in Meat, Poultry, and Egg Products Appendix provides information on the residue limits (tolerances and action levels) for animal drugs, food additives, and unavoidable conta

13、minants in meat, poultry, and egg products. The Food Safety and Inspection Service in its regulatory programs apply chemical residue limits, which are set by the Food and Drug Administration (FDA). The official source of these tolerances is Title 21 of the Code of Federal Regulations (CFR). Those fo

14、r animal drugs are found in CFR, Title 21, Part 556, those for food additives are found in Title 21, Part 172, Section 172.140, and those for unavoidable contaminants are found in, Title 21 Part 109, Section 109.30. In addition, FDA may establish action levels that are published in the Federal Regis

15、ter (FR). FSIS does not permit concentrations of chemical residues in meat, poultry, and egg products to exceed the tolerances or action levels published in the CFR or FR. 2021/9/3020Compound Production Class Fat (ppm) Meat (ppm) Meatbyproduct (ppm) Liver (ppm) Kidney (ppm) Edible Tissue (ppm) Chlor

16、hexidine Cattle Goats Hogs Horses Poultry Sheep Eggs Reference:21 CFR 556.20(the Code of Federal Regulations) 2021/9/3021Compound Production Class Fat (ppm) Meat (ppm) Meatbyproduct (ppm) Liver (ppm) Kidney (ppm) Edible Tissue (ppm) Florfenicol Cattle 0.33.7Goats Hogs 0.22.5Horses Poultry Sheep Eggs

17、 Reference:21 CFR 556.283(the Code of Federal Regulations) 2021/9/3022 CONSOLIDATED VERSION of the Annexes I to IV of Council Regulation n2377/90 Updated on 01.12.2000 List of pharmacologically active substances for which maximum residue limits have been fixed).2021/9/3023Florfenicol Bovine 200 g/kg

18、 Muscle 3000 g/kg Liver 300 g/kg KidneyPorcine 300 g/kg Muscle 500 g/kg Skin + fat 2000 g/kg Liver 500 g/kg KidneyChicken 100 g/kg Muscle 200 g/kg Skin + fat 2500 g/kg Liver 750 g/kg KidneyNot for use in animals from whicheggs are produced for human2021/9/3024Thiamphenicol Bovine 50 g/kg Muscle 50 g

19、/kg Fat 50 g/kg Liver 50 g/kg Kidney 50 g/kg Milk Chicken 50 g/kg Muscle 50 g/kg Skin + fat 50 g/kg Liver 50 g/kg KidneyNot for use in animals from whicheggs are produced for human2021/9/3025List of pharmacologically active substances for which no maximum levels can be fixedPharmacologically active

20、substance(s)Aristolochia spp. and preparations thereofChloramphenicolChloroform(氯仿）Chlorpromazine（氯丙嗪）Colchicine（秋水仙堿）DapsoneDimetridazole（地美硝唑）Metronidazole（甲硝唑）甲硝唑Nitrofurans (including furazolidone)（呋喃類藥物）Ronidazole（洛硝噠唑）2021/9/3026VETERINARY DRUGS DIRECTORATEFlorfenicol Cattle Muscle 0.2 Liver 2

21、.0 Swine Muscle 0.25 Liver 1.4 Salmonids（鮭魚） Muscle 0.8 （The units are in ppm for tissues and ug/ml for milk unless otherwise noted in the table）2021/9/3027氯霉素殘留檢測方法 對于氯霉素殘留，由于存在多種檢測方法，因此各種方法的檢出限問題已成為關(guān)注的焦點(diǎn)。發(fā)達(dá)國家對檢出限的要求越來越嚴(yán)格。歐盟由原來的10g/kg改為1g/kg，繼而又降至0.1g/kg，比原標(biāo)準(zhǔn)要求提高了100倍；美國FDA規(guī)定的檢出限也由原來的5g/kg降為0.3g/kg

22、，且目前正在研究應(yīng)用更為靈敏的方法，可使檢出限值達(dá)0.1g/kg。2021/9/3028氯霉素殘留的檢測方法氯霉素在動(dòng)物性食品中殘留分析方法的研究始于20世紀(jì)80年代，至今已建立起許多方法，主要以微生物學(xué)、免疫學(xué)的方法作為篩選法，液相色譜法（Liquid Chromatographic Method,LC)和氣相色譜法(Gas Chromatographic Method,GC)進(jìn)行定量測定,液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用分析法(Liquid Chromatography/Mass Spectrometry Method,LC/MS) 或氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用分析法(Gas Chromatography/Ma

23、ss Spectrometry Method,GC/MS) ) 進(jìn)行確證。2021/9/3029篩選法主要包括以氯霉素抑菌作用為基礎(chǔ)的微生物學(xué)法，以氯霉素抗原抗體特異性免疫反應(yīng)為基礎(chǔ)的免疫學(xué)法，以氯霉素衍生偶合反應(yīng)為基礎(chǔ)的化學(xué)顯色法，薄層色譜法等（Thin Layer Chromatographic Method,TLC)其中微生物學(xué)法和免疫學(xué)法較為常用。2021/9/3030微生物學(xué)法微生物學(xué)法的原理是利用特定菌株與藥物的作用來檢測樣品中CAP的種類和含量。常用方法有棉簽法(Swab Test On Premises，STOP)和杯碟法(Cylinder Plate Method，CPM)。

24、2021/9/3031STOP 用棉簽蘸取動(dòng)物組織液，置于涂滿枯草桿菌的培養(yǎng)基中保存過夜，以棉簽周圍是否出現(xiàn)抑菌環(huán)及其直徑大小來判斷結(jié)果，STOP以前在美國、加拿大等國家肉類獸藥殘留篩選中廣泛應(yīng)用，檢出限為1mgkg，優(yōu)點(diǎn)是設(shè)備簡單，操作簡便，缺點(diǎn)是特異性差，靈敏度低。CPM 是將處理后的樣品注入牛津杯，與含菌液的檢測平板貼合，培養(yǎng)后根據(jù)抑菌圈直徑的大小來判定結(jié)果，CPM 的檢出限為0.12mgkg，比STOP靈敏度高，并可在樣品的處理中加入其他抗生素以消除干擾影響。微生物學(xué)法簡便，費(fèi)用低，但敏感性和專一性低，易漏檢，也會出現(xiàn)假陽性，引起誤判，但對于高殘留樣品進(jìn)行殘留篩選仍不失為一種好的方法。

25、2021/9/3032免疫分析法氯霉素免疫測定法包括放射免疫測定法（RIA）、酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA) 。RIA 的基本原理是用同位素標(biāo)記藥物樣品，和非標(biāo)記待測藥物與CAP抗體結(jié)合競爭，樣品中的被測物含量與測定的放射性活度成反比，常用的標(biāo)記物是同位素H、C、I等，RIA的優(yōu)點(diǎn)在于靈敏、特異、簡便，但標(biāo)記物易衰變，影響了其準(zhǔn)確性。2021/9/3033ELISA是基于抗原和抗體反應(yīng)而建立的。由于氯霉素是半抗原，不能刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體。要使半抗原性物質(zhì)具有免疫原性，就需使其與大分子載體物質(zhì)（蛋白質(zhì)）相結(jié)合制備人工抗原，而后將其作為抗原進(jìn)行使用，動(dòng)物體內(nèi)即可產(chǎn)生相應(yīng)特異性的抗氯霉素的抗體。在此

26、基礎(chǔ)上建立酶聯(lián)免疫競爭法測定氯霉素含量。 ELISA避免了RIA存在的穩(wěn)定性問題，更加簡便、靈敏，檢測限達(dá)到pg級，且同時(shí)可檢測多數(shù)樣品，是十分理想的快速篩選手段，缺點(diǎn)在于出現(xiàn)假陽性的概率較大，易引起誤判。2021/9/3034因ELISA 具有快速、靈敏度高、專一性強(qiáng)的優(yōu)勢，在肉制品、水產(chǎn)品與環(huán)境中應(yīng)用相當(dāng)廣泛。目前國內(nèi)、外研制的氯霉素ELISA 檢測試劑盒，廣泛用于氯霉素的檢測。如Randox公司提供的氯霉素檢測試劑盒對組織中氯霉素的檢測限可達(dá)0.02ng/kg，尿液中氯霉素的檢測限可達(dá)0.01ng/kg，回收率為84% 以下，且與四環(huán)素、慶大霉素，氨芐青霉素?zé)o交叉反應(yīng)，檢測時(shí)間不到1.5 小時(shí)2021/9/3035定量測定法目前國際公認(rèn)的氯霉素的定量測定方法是氣相色譜法(GC)和高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography,HPLC)2021/9/3036氣相色譜法GC是1974年在美國官方分析化學(xué)家協(xié)會（AOAC）年會上提出的，原理是氯霉素均含有電子親和性強(qiáng)的化學(xué)基團(tuán)，可用電子俘獲檢測器進(jìn)行測定。G