1、本文格式為Word版，下載可任意編輯 藥典三部2022版通則1101微生物檢查法 1101 無菌檢查法 無菌檢查法系用于檢查藥典要求無菌的藥品、生物制品、醫療器具、原料、輔料及其他品種是否無菌的一種方法。若供試品符合無菌檢查法的規定，僅說明了供試品在該檢驗條件下未發現微生物污染。 無菌檢查應在無菌條件下進行，試驗環境務必達到無菌檢查的要求，檢驗全過程應嚴格遵守無菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影響供試品中微生物的檢出。單向流空氣區、工作臺面及環境應定期按醫藥工業清白室（區）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法的現行國家標準進行清白度確認。隔離系統應定期按相關的要求進行驗證，其內部環境的

2、清白度須符合無菌檢查的要求。日常檢驗還需對試驗環境進行監控。 培養基 硫乙醇酸鹽流體培養基主要用于厭氧菌的培養，也可用于需氧菌培養；胰酪大豆胨液體培養基用于真菌和需氧菌的培養。 培養基的制備及培養條件 培養基可按以下處方制備，亦可使用按該處方生產的符合規定的脫水培養基或成品培養基。配制后應采用驗證合格的滅菌程序滅菌。制備好的培養基應保存在225、避光的環境，若保存于非封閉容器中，一般在3周內使用；若保存于密閉容器中，一般可在一年內使用。 1. 硫乙醇酸鹽流體培養基 胰酪胨15.0g 氯化鈉 2.5g 酵母浸出粉 5.0g 新配制的0.1% 刃天青溶液 1 / 14 1.0ml 無水葡萄糖 5.

3、0g 瓊脂 0.75g L-胱氨酸0.5g 水 1000ml 硫乙醇酸鈉0.5g （或硫乙醇酸）(0.3ml) 除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微溫溶解，調理pH為弱堿性，煮沸，濾清，參與葡萄糖和刃天青溶液，搖勻，調理pH，使滅菌后在25的pH值為7.10.2。分裝至適合的容器中，其裝量與容器高度的比例應符合培養終止后培養基氧化層（粉紅色）不超過培養基深度的1/2。滅菌。在供試品接種前，培養基氧化層的高度不得超過培養基深度的1/5，否則，須經100水浴加熱至粉紅色消失（不超過20分鐘），迅速冷卻，只限加熱一次，并防止污染。 除另有規定外，硫乙醇酸鹽流體培養基置3035培養。 2. 胰酪

4、大豆胨液體培養基 胰酪胨 17.0g 氯化鈉 5.0g 大豆木瓜蛋白酶水解物 3.0g 磷酸氫二鉀 2.5g 葡萄糖/無水葡萄糖2.5g/2.3g 水1000ml 除葡萄糖外，取上述成分，混合，微溫溶解，濾過，調理pH使滅菌后在25的pH值為7.30.2，參與葡萄糖，分裝，滅菌。 胰酪大豆胨液體培養基置2025培養。 3. 中和或滅活用培養基 2 / 14 按上述硫乙醇酸鹽流體培養基或胰酪大豆胨液體培養基的處方及制法，在培養基滅菌或使用前參與適合的中和劑、滅活劑或表面活性劑，其用量同方法適用性試驗。 4. 0.5%葡萄糖肉湯培養基（用于硫酸鏈霉素等抗生素的無菌檢查） 胨10.0g 氯化鈉5.0

5、g 牛肉浸出粉3.0g 水1000ml 葡萄糖 5.0g 除葡萄糖外，取上述成分混合，微溫溶解，調理pH為弱堿性，煮沸，參與葡萄糖溶解后，搖勻，濾清，調理pH使滅菌后在25的pH值為7.20.2，分裝，滅菌。 5. 胰酪大豆胨瓊脂培養基 胰酪胨15.0g 瓊脂15.0g 大豆木瓜蛋白酶水解物5.0g 水1000ml 氯化鈉 5.0g 除瓊脂外，取上述成分，混合，微溫溶解，調理pH使滅菌后在25的pH值為7.30.2，參與瓊脂，加熱溶化后，搖勻，分裝，滅菌。 6. 沙氏葡萄糖液體培養基 動物組織胃蛋白酶水解物水 3 / 14 和胰酪胨等量混合物 10.0g 1000ml 葡萄糖 20.0g 除葡

6、萄糖外，取上述成分，混合，微溫溶解，調理pH使滅菌后在25的pH值為5.60.2，參與葡萄糖，搖勻，分裝，滅菌。 7. 沙氏葡萄糖瓊脂培養基 動物組織胃蛋白酶水解物和胰酪胨等量混合物10.0g 瓊脂15.0g 葡萄糖40.0g 水1000ml 除葡萄糖、瓊脂外，取上述成分，混合，微溫溶解，調理pH使滅菌后在25pH值為5.60.2，參與瓊脂，加熱溶化后，再參與葡萄糖，搖勻，分裝，滅菌。 培養基的適用性檢查 無菌檢查用的硫乙醇酸鹽流體培養基和胰酪大豆胨液體培養基等應符合培養基的無菌性檢查及靈敏度檢查要求。本檢查可在供試品的無菌檢查前或與供試品的無菌檢查同時進行。 無菌性檢查每批培養基隨機取不少于

7、5支（瓶），置各培養基規定的溫度培養14天，應無菌生長。 靈敏度檢查 菌種培養基靈敏度檢查所用的菌株傳代次數不得超過5代（從菌種保存中心獲得的枯燥菌種為第0代），并采用適合的菌種保存技術進行保存，以保證試驗菌株的生物學特性。 金黃色葡萄球菌（Staphylococcus）CMCC（B）26 003 4 / 14 銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）CMCC（B）10 104枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）CMCC（B）63 501 生孢梭菌（Clostridium sporogenes）CMCC（F）64 941 白色念珠菌（Candida albic

8、ans）CMCC（F）98 001 黑曲霉（Aspergillus niger）CMCC（F）98 003 菌液制備接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養物至胰酪大豆胨液體培養基中或胰酪大豆胨瓊脂培養基上，接種生孢梭菌的新鮮培養物至硫乙醇酸鹽流體培養基中，3035培養1824小時；接種白色念珠菌的新鮮培養物至沙氏葡萄糖液體培養基中或沙氏葡萄糖瓊脂培養基上，2025培養2448小時，上述培養物用pH7.0 無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9% 無菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數小于100cfu（菌落形成單位）的菌懸液。接種黑曲霉的新鮮培養物至沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養基上，2025培養

9、57天，參與35ml含0.05% （ml/ml）聚山梨酯80的pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫。然后，采用適合的方法吸出孢子懸液至無菌試管中，用含0.05% （ml/ml）聚山梨酯80的pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9% 無菌氯化鈉溶液制成每1ml 含孢子數小于100cfu的孢子懸液。 菌懸液若在室溫下放置，應在2小時內使用；若保存在28可在24小時內使用。黑曲霉孢子懸液可保存在28，在驗證過的貯存期內使用。 培養基接種取每管裝量為12ml 的硫乙醇酸鹽流體培養基7支，分別接種小于100cfu的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、生孢梭菌各2支，另1支

10、不接種作為空白對照，培養3天；取每管裝量為9ml的胰酪大豆胨液體培養基7支，分別接種小于100cfu的枯草芽孢 5 / 14 桿菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接種作為空白對照，培養5天。逐日觀測結果。 結果判定空白對照管應無菌生長，若加菌的培養基管均生長良好，判該培養基的靈敏度檢查符合規定。 稀釋液、沖洗液及其制備方法 稀釋液、沖洗液配置后應采用驗證合格的滅菌程序滅菌。 1. 0.1%無菌蛋白胨水溶液取蛋白胨1.0g，加水1000ml，微溫溶解，濾清，調理pH至7.10.2，分裝，滅菌。 2. pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液取磷酸二氫鉀 3.56g，無水磷酸氫二鈉5.77g，氯化鈉

11、 4.30g，蛋白胨1.00g，加水1000ml，微溫溶解，濾清，分裝，滅菌。 根據供試品的特性，可選用其他閱歷證過的適合的溶液作為稀釋液、沖洗液（如0.9% 無菌氯化鈉溶液）。 如需要，可在上述稀釋液或沖洗液的滅菌前或滅菌后參與表面活性劑或中和劑等。 方法適用性試驗 進行產品無菌檢查時，應進行方法適用性試驗，以確認所采用的方法適合于該產品的無菌檢查。若檢驗程序或產品發生變化可能影響檢驗結果時，應重新進行方法適用性試驗。 方法適用性試驗按“供試品的無菌檢查的規定及以下要求進行操作。對每一試驗菌應逐一進行方法確認。 菌種及菌液制備除大腸埃希菌（Escherichia coli）CMCC（B）44

12、 102外，金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌、白色念珠 6 / 14 菌、黑曲霉的菌株及菌液制備同培養基靈敏度檢查。大腸埃希菌的菌液制備同金黃色葡萄球菌。 薄膜過濾法取每種培養基規定接種的供試品總量按薄膜過濾 法過濾，沖洗，在結果一次的沖洗液中參與小于100cfu的試驗菌，過濾。加硫乙醇酸鹽流體培養基或胰酪大豆胨液體培養基至濾筒內。另取一裝有同體積培養基的容器，參與等量試驗菌，作為對照。置規定溫度培養，培養時間不得超過5天，各試驗菌同法操作。 直接接種法取符合直接接種法培養基用量要求的硫乙醇酸鹽 流體培養基6管，分別接入小于100cfu的金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、生孢梭菌各2管，取符合

13、直接接種法培養基用量要求的胰酪大豆胨液體培養基6管，分別接入小于100cfu的枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉各2管。其中1管接入每支培養基規定的供試品接種量，另1管作為對照，置規定的溫度培養，培養時間不得超過5天。 結果判定與對照管對比，如含供試品各容器中的試驗菌均生長良好，則說明供試品的該檢驗量在該檢驗條件下無抑菌作用或其抑菌作用可以忽視不計，照此檢查方法和檢查條件進行供試品的無菌檢查。如含供試品的任一容器中的試驗菌生長微弱、緩慢或不生長，則說明供試品的該檢驗量在該檢驗條件下有抑菌作用，應采用增加沖洗量、增加培養基的用量、使用中和劑或滅活劑、更換濾膜品種等方法，消除供試品的抑菌作用，并重新進行方法適用性試驗。 方法適用性試驗也可與供試品的無菌檢查同時進行。 供試品的無菌檢查 無菌檢查法包括薄膜過濾法和直接接種法。只要供試品性質