1、病理檢驗(yàn)技術(shù)12級(jí)檢驗(yàn)（1）班01號(hào)學(xué)號(hào)：2012130801001姓名：蔡枝奇第六章 組織制片技術(shù) 第一節(jié) 組織塊的處理 第二節(jié) 切片機(jī)具與切片一、取材 一、切片機(jī)二、固定和固定液 二、切片刀三、洗滌、脫水、透明 三、磨刀與被刀四、浸蠟、包埋 四、切片學(xué) 習(xí) 目 標(biāo)1.了解常用組織切片的種類2.熟悉組織切片制作的基本程序3.掌握常用固定液的配置和應(yīng)用4.熟練進(jìn)行洗滌、脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、封片等操作第一節(jié) 組織塊的處理一、取材定義：按照病理檢查的目的和要求，切取適當(dāng)大小和數(shù)量的組織塊，用于制作組織切片的過程，稱為取材（一）取材的配合 病理檢驗(yàn)技術(shù)員取材時(shí)的職責(zé)是：配合病理醫(yī)師對(duì)病變組

2、織進(jìn)行肉眼檢查，準(zhǔn)確記錄病理醫(yī)生檢查時(shí)描述的病理改變，按照病理檢驗(yàn)的需要，選擇和確定取材的部位和塊數(shù)。病理檢驗(yàn)技術(shù)人員要及時(shí)對(duì)切取的組織進(jìn)行編號(hào)或標(biāo)記，并在病理檢單上做好記錄，以便病理醫(yī)生鏡檢時(shí)查對(duì)。取材后的標(biāo)本應(yīng)加足固定液，按編號(hào)存放，以備復(fù)查之用。（二）注意事項(xiàng)1.避免組織結(jié)構(gòu)變形切取組織的刀、剪應(yīng)鋒利，刀體宜薄，并有足夠的長(zhǎng)度。2.組織塊大小適當(dāng)通常切取的組織塊厚約0.20.3cm，大小以1.01.5cm1.01.5cm為宜。3.及時(shí)取材4.標(biāo)明包埋方向5.染色、包裹小標(biāo)本6.充分暴露病灶取材應(yīng)避免過多的壞死組織或凝血塊7.確定取材部位8.清除多余組織9.重復(fù)取材10.認(rèn)真核對(duì)（二）固定

3、方法細(xì)胞的主要組成成分是蛋白質(zhì)、脂類及糖類，應(yīng)根據(jù)觀察目的和診斷要求，選用相應(yīng)的固定液和固定方法，使其凝固或沉淀。常用的固定方法有以下幾種： 1.浸泡固定法2.注射、灌注固定法3.微波固定法4.蒸氣固定法（三）常用固定液1.單純固定液是指有一種化學(xué)物質(zhì)組成的固定液。此類固定液包括：重鉻酸鉀、苦味酸、丙酮、氯化汞、鉻酸、鋨酸等。常用的有：甲醛（福爾馬林）、乙醇、乙酸（冰醋酸、醋酸)（3）乙醇-甲醛液（AF液）適用于皮下組織中肥大細(xì)胞的固定。固定后的組織不必經(jīng)低濃度逐級(jí)乙醇脫水，可直接移入95%乙醇脫水，也不用水洗，縮短了脫水時(shí)間。配方： 95%或乙醇脫色 90mL 40%甲醛 10mL（4）Bo

4、uin液是一種常規(guī)用于活檢標(biāo)本固定的良好固定液，適用于大多數(shù)組織的固定，尤其適用于結(jié)締組織染色。（5）Zenker液適用于一般組織固定，胞核和胞質(zhì)染色均清晰，對(duì)免疫球蛋白染色最好，也可用于病毒包涵體、某些腫瘤標(biāo)本的固定。（四）固定的注意事項(xiàng)1.及時(shí)固定取材后立即將組織塊放入固定液中2.固定容器宜大3.固定液應(yīng)足量4.防止組織變形5.確定恰當(dāng)?shù)墓潭〞r(shí)間固定時(shí)間應(yīng)依據(jù)組織塊的大小、厚度以及固定液的種類、環(huán)境溫度而定。組織塊大小為（1.01.5cm）1cm（0.20.3cm）時(shí)，固定時(shí)間以1224h為宜。三、洗滌、脫水、透明（一）洗滌定義：用水或乙醇等將組織經(jīng)過固定處理后，與組織結(jié)合的固定液及沉淀物

5、清洗掉的過程，稱為洗滌。1.洗滌目的除去未與組織結(jié)合的固定液及沉淀物。2.洗滌的方法（1）含水固定液的洗滌方法：常用的含水固定液是甲醇溶液，用自來水沖洗即可。（2）含乙醇固定液的洗滌方法：一般不需要洗滌，如果需要洗滌，應(yīng)使用與固定液中的乙醇濃度相近或略低的乙醇洗滌。（3）特殊固定液的洗滌方法:略2.常用的脫水劑脫水劑能同時(shí)以任何比例雨水和頭，透明劑混合。常用的有：乙醇、正丁醇、丙酮等，其中乙醇最常用。3.脫水的方法一般把脫水劑配成各種濃度，自低到高濃度依次進(jìn)行使組織中所含水分依次減少直致被脫水劑取代。4.自動(dòng)脫水機(jī)（三）透明定義：用某些化學(xué)試劑（如二甲苯等）將組織中的脫水劑置換出來，以利于浸蠟

6、和包埋，因組織塊浸入這些試劑后常呈半透明狀，故稱透明（或煤浸）。所使用的化學(xué)試劑稱為透明劑。1.透明目的2.常用的透明劑可使用的較多，有苯、甲苯、二甲苯（最常用）、三氯甲烷、汽油、香柏油（透明時(shí)間長(zhǎng)達(dá)24h，所以不常用）等，多數(shù)透明劑對(duì)人體有害，使用時(shí)應(yīng)注意防護(hù)。3.常用透明方法將脫水后的組織塊先用乙醇-二甲苯混合液處理或直接浸入透明劑中，置換透明劑23次既能達(dá)到透明目的。石蠟浸蠟方法石蠟有高熔點(diǎn)和低熔點(diǎn)之分，一般使用的是熔點(diǎn)為56以上的石蠟。要顯示酶和保存抗原活性性時(shí)，則需使用熔點(diǎn)為54以下的石蠟。常規(guī)制片普通用熔點(diǎn)為5658旳石蠟。（二）包埋定義：用石蠟或其他包埋劑將組織包成一定形狀，使其

7、具有一定的硬度和韌度，便于切成薄片的過程，稱為包埋。（1）石蠟包埋法常用的有：常規(guī)石蠟包埋、胃鏡標(biāo)本的包埋、液體標(biāo)本的包埋、快速石蠟包埋法。（2）火棉膠包埋法常用于大塊組織的制片（如整個(gè)眼球或神經(jīng)組織等），用火棉膠包埋可避免纖維組織和肌肉組織的過度硬化，減少纖維組織的收縮和扭轉(zhuǎn)，有利于保存原有的組織結(jié)構(gòu)。（3）碳蠟包埋法（4）明膠包埋法包埋的注意事項(xiàng)（1）確定包埋面（2）同一蠟塊內(nèi)包埋多個(gè)組織塊時(shí)組織塊的性質(zhì)應(yīng)相同（如同屬軟組織），組織塊的大小、厚薄要相近，且包埋方向要一致，組織塊間的距離不能過大。（3）難切的組織（如皮膚、骨等）以及需切連片的組織均應(yīng)單獨(dú)包埋。（4）神經(jīng)、脊髓及需要定向包埋的

8、組織應(yīng)注意組織塊的相互關(guān)系。（5）操作應(yīng)迅速（6）若將管腔或空洞標(biāo)本與小標(biāo)本包埋在一個(gè)蠟塊內(nèi)時(shí)，不能將小標(biāo)本放入官腔或空洞標(biāo)本內(nèi)。扭轉(zhuǎn)式石蠟切片機(jī)冰凍切片機(jī)適用于病理組織石蠟切片的刀片切片機(jī)與刀片的認(rèn)識(shí)實(shí)驗(yàn)室照的圖石蠟切片機(jī)切的切片冰凍包埋機(jī)總結(jié)組織制片的過程收集標(biāo)本（活檢、尸檢、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)）取材固定切塊（110.3自來水沖洗12h）組織脫水（75乙醇、85乙醇、95乙醇I、95乙醇II、100乙醇I、100乙醇II，低溶度乙醇24h,高溶度乙醇1h）組織透明（二甲苯30s）浸蠟（軟、硬蠟、大組織416h,組織24h）包埋冷卻修蠟塊焊蠟塊切片貼片烤片切片脫蠟切片染色（常規(guī)染色HE）第一節(jié) 常 規(guī)

9、 染 色回腸HE染色圖片人脾臟HE染色圖片備注：常規(guī)染色或普通染色簡(jiǎn)稱HE染色。HE染色法 ，石蠟切片技術(shù)里常用的染色法之一。大腸癌異變掀窩病灶HE染色宮頸液基HE染色HE染色43歲宮頸刮片染色中常見問題及注意事項(xiàng)：一、固定不當(dāng)二、脫蠟不凈三、染色與分化不當(dāng)四、脫水不徹底或過度五、封固及封固劑使用不當(dāng)六、切片脫落網(wǎng)狀纖維染色圖片網(wǎng)狀纖維染色：用浸銀法可將纖維染成黑色，故又稱嗜銀纖維網(wǎng)狀纖維染液網(wǎng)狀纖維染色顯示瘤組織被網(wǎng)狀橫紋肌染色圖片橫紋肌的染色方法：有PTAH法、Masson氏液染色法、Uan Gieson氏法等。可見橫紋肌母細(xì)胞及梭形帶橫紋肌染色鋨酸組織塊染色備注：鋨酸與脂質(zhì)結(jié)合成黑色。電鏡下的鋨酸染色在鋨酸染色的切片上有髓神經(jīng)糖原染色圖片備注：用于鑒別淋巴系統(tǒng)細(xì)胞增生的性質(zhì)，鑒別紅細(xì)胞系統(tǒng)增生的性質(zhì)。染色肝細(xì)胞 肝糖原累積病糖原染色第三節(jié) 染色前