1、紫外分光光度法測(cè)定補(bǔ)骨脂藥材中總呋喃香豆素含量【關(guān)鍵詞】補(bǔ)骨脂藥材；,總呋喃香豆素；,紫外分光光度法摘要：目的建立紫外分光光度法測(cè)定補(bǔ)骨脂藥材中總呋喃香豆素的含量。方法補(bǔ)骨脂藥材粉末經(jīng)索氏提取2h，過聚酰胺柱后，采用紫外分光光度法，檢測(cè)波長(zhǎng)為245n對(duì)補(bǔ)骨脂藥材中的總呋喃香豆素進(jìn)展測(cè)定。結(jié)果采用該方法可準(zhǔn)確測(cè)定補(bǔ)骨脂藥材中總呋喃香豆素的含量，補(bǔ)骨脂素在1.00810.08l/l范圍內(nèi)吸光度與濃度的線性關(guān)系良好，樣品平均回收率為98.7%，精細(xì)度RSD為0.11%，重復(fù)性RSD為2.8%，穩(wěn)定性RSD為0.75%4h內(nèi)。結(jié)論該方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確，可用于補(bǔ)骨脂藥材中總呋喃香豆素的含量測(cè)定。關(guān)鍵詞：補(bǔ)骨

2、脂藥材；總呋喃香豆素；紫外分光光度法DeterinatinftheTtalFuranuarinsinFrutusPsraleaebyUVSpetrphtetryAbstrat：bjetiveTestablishaUVspetrphtetryfrdeterinatinfthettalfuranuarinsinFrutusPrsraleae.ethdsThepderfFrutusPsraleaeasextratedbyH3Hfrthursandpuerariaedbyplyaidelunhratgraphy;henitasdeterinedbyUVspetrphtetry,avelengthas2

3、45n.ResultsTheethdhadgdlinearrelatinshipfr1.008l/lt10.08l/l,andthereveryrateas98.7%Therelativestandarddeviatinfauratetestandstabilitytestere2.8%and0.75%respetively.nlusinTheethdissipleandaurate,andanbeusedfrdeterinatinfthettalfuranuarinsinFrutusPsraleae.Keyrds：FrutusPsraleae；Ttalfuranuarins；UVspetrp

4、htetry補(bǔ)骨脂為豆科植物補(bǔ)骨脂PsralearylifliaL.的枯燥成熟果實(shí)。補(bǔ)骨脂味辛，苦，歸腎、脾經(jīng)。具有溫腎補(bǔ)陽(yáng)、納氣、止瀉之成效1。用于陽(yáng)痿遺精，遺尿尿頻，腰膝冷痛，腎虛作喘，五更泄瀉；外用治白癜風(fēng)、斑禿。呋喃香豆素類為補(bǔ)骨脂的主要活性物質(zhì)，用于治療白癜風(fēng)、多種婦科出血、鼻、牙齦出血及類血友病出血等癥2；同時(shí)有一定的抗癌活性及對(duì)成骨細(xì)胞的增殖作用。由于補(bǔ)骨脂中呋喃香豆素類成分無(wú)酚羥基，而其他成分包括擬雌內(nèi)酯類，補(bǔ)骨脂黃酮類及單萜酚類成分均有酚羥基，故采用聚酰胺柱色譜對(duì)補(bǔ)骨脂藥材中的呋喃香豆素進(jìn)展富集，以補(bǔ)骨脂素為對(duì)照品，建立了用紫外分光光度法測(cè)定總呋喃香豆素含量的方法。結(jié)果說明該

5、方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，可用于補(bǔ)骨脂藥材中總呋喃香豆素含量測(cè)定。1儀器與試藥UV1601型可見紫外分光光度計(jì)日本島津，A220型電子天平日本島津，補(bǔ)骨脂素對(duì)照品、異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品中國(guó)藥品生物制品檢定所，聚酰胺粉3060目。2方法與結(jié)果2.1供試品溶液的制備2.1.1上柱樣品的制備取補(bǔ)骨脂藥材粉末過三號(hào)篩0.5g，精細(xì)稱定，置索氏提取器中，加甲醇適量，加熱回流提取2h，過濾，加0.5g聚酰胺粉3060目拌勻，即得。2.1.2乙醇洗脫濃度的考察將樣品上聚酰胺柱10l3060目聚酰胺，110，水洗脫至無(wú)色，再依次以30%,50%,70%乙醇各洗脫100l，洗脫液進(jìn)展紫外全波長(zhǎng)掃描，圖譜見圖15。由上圖可以看

6、出，30%乙醇洗脫液的紫外掃描圖最大吸收波長(zhǎng)為245n，與補(bǔ)骨脂素及異補(bǔ)骨脂素等呋喃香豆素的紫外掃描圖根本一致；50%乙醇洗脫液顯示為補(bǔ)骨脂酚的紫外吸收?qǐng)D；而70%洗脫液顯示為黃酮及擬雌內(nèi)酯類紫外吸收。圖130%乙醇洗脫液(略)圖250%乙醇洗脫液(略)圖370%乙醇洗脫液(略)圖4補(bǔ)骨脂素(略)圖5異補(bǔ)骨脂素(略)2.1.3乙醇洗脫用量的考察將樣品上聚酰胺柱，加水洗脫至無(wú)色，再加30%乙醇洗脫以10l/in洗脫，每25l為一流分，取1l稀釋至10l，在245n處測(cè)定吸光度。結(jié)果見表1。表1樣品30%乙醇洗脫液不同流分的紫外吸收(略)由上表可以看出，第10個(gè)流分所檢測(cè)到的吸光度已很低，故樣品上

7、聚酰胺柱后，加水洗脫至無(wú)色，用30%乙醇以10l/in洗脫250l即得。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.1.4結(jié)論根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，最終確定補(bǔ)骨脂藥材供試品制備方法為取補(bǔ)骨脂藥材粉末0.5g過三號(hào)篩，精細(xì)稱定，置索式提取器中，加甲醇適量，加熱回流提取2h，過濾，濾液加0.5g聚酰胺粉3060目拌勻，揮干，上聚酰胺柱，以30%乙醇洗脫250l。2.3對(duì)照品溶液的配置取補(bǔ)骨脂對(duì)照品12.6g精細(xì)稱定，加甲醇超聲，定容至50l，再精細(xì)汲取1l，加甲醇定容至25l即得標(biāo)準(zhǔn)品溶液。2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精細(xì)汲取上述對(duì)照品溶液1，3，5，7，10l，加甲醇定容至10l，于245n處測(cè)定吸收度,.并以吸光度與對(duì)照品濃度

8、進(jìn)展回歸,得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程y=0.1321x+0.0088，r=0.9997(n=5)。實(shí)驗(yàn)說明補(bǔ)骨脂素在1.00810.08g/l濃度范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系。2.5精細(xì)度實(shí)驗(yàn)精細(xì)汲取上述對(duì)照品溶液1l，加甲醇稀釋至10l，于245n處測(cè)定吸光度，連續(xù)測(cè)定5次，結(jié)果說明5次測(cè)定的RSD為0.11%，故儀器精細(xì)度良好。2.6穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)將精細(xì)度考察項(xiàng)下對(duì)照品溶液于0，6，12，24，48h在245n處測(cè)定吸光度，實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明RSD為0.75%，對(duì)照品溶液在4h內(nèi)穩(wěn)定性良好。2.7重復(fù)性實(shí)驗(yàn)按照擬定的含量測(cè)定方法，取同一批藥材5份，每份0.5g，分別制備樣品，測(cè)定吸光度，并計(jì)算其含量，實(shí)驗(yàn)結(jié)果

9、5個(gè)樣品含量RSD為2.9%，說明本法重復(fù)性良好。2.8回收率實(shí)驗(yàn)取含量的補(bǔ)骨脂藥材0.25g，精細(xì)稱定，分別精細(xì)參加補(bǔ)骨脂素對(duì)照品溶液適量3種不同程度，各2份，按供試品制備方法處理，進(jìn)展含量測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表2。表2回收率實(shí)驗(yàn)(略)由表2可知，3種程度6次實(shí)驗(yàn)的加樣回收率測(cè)定結(jié)果均在95%105%之間，其平均值為98.7%，RSD為1.00%。2.9樣品測(cè)定取6批補(bǔ)骨脂藥材，每批0.5g過三號(hào)挑選，按供試品制備方法制備，測(cè)定吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中總呋喃香豆素的含量。結(jié)果見表3。表36批補(bǔ)骨脂藥材含量測(cè)定結(jié)果(略)從表3可知，補(bǔ)骨脂藥材中總呋喃香豆素的含量在1%左右，各個(gè)批次藥材之間總呋喃香豆素的含量有較大的差異。3討論補(bǔ)骨脂中總呋喃香豆素是補(bǔ)骨脂中的主要活性物質(zhì)，補(bǔ)骨脂中呋喃香豆素沒有酚羥基，在聚酰胺柱上的吸附才能較補(bǔ)骨脂中的其他成分如黃酮類、擬雌內(nèi)酯類及單萜酚類為弱。根據(jù)這一特性，我們通過聚酰胺柱色譜對(duì)補(bǔ)骨脂藥材中的呋喃香豆素進(jìn)展了富集，并對(duì)乙醇洗脫的濃度與用量進(jìn)展了考察。結(jié)果以藥材提取液拌聚酰胺，上柱，水洗至無(wú)色，再以30%乙醇洗脫250l作為供試品溶液；以補(bǔ)骨脂素為對(duì)照品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定樣品中總呋喃香豆素含量，該方法靈敏度高，重復(fù)性好。根據(jù)擬定的方法