1、流式細胞術(shù)在臨床檢驗中應(yīng)用邁瑞企業(yè)譚偉峰 第1頁1342流式細胞術(shù)基本原理流式臨床應(yīng)用邁瑞流式介紹教授對邁瑞流式評價目錄 Mindray Confidential2第2頁1342流式細胞術(shù)基本原理流式臨床應(yīng)用邁瑞流式介紹教授對邁瑞流式評價目錄 Mindray Confidential3第3頁流式細胞術(shù)定義流式細胞術(shù)是以高能量激光照射高速流動狀態(tài)下經(jīng)熒光標(biāo)識單細胞（生物顆粒），經(jīng)過檢測產(chǎn)生散射光和熒光素發(fā)射熒光強度，從而對細胞進行定性或者定量檢測，實現(xiàn)對目標(biāo)細胞分析或分選技術(shù)。 Mindray Confidential4第4頁 Mindray Confidential傳統(tǒng)流式檢測流程圖Nat R

2、ev Immunol. ; 12(3): 191200.第5頁FL4FL6FL5(PE-cy7)FL3(PerCP)FL2(PE)FL1(FITC)SS488/10530/30FS488/10585/40670LP785/60491/LP550LP645LP660/20785/60740LP488/10反光鏡tvFL6(APC-cy7)FL4(APC)反光鏡tvtvtvtvtvtvtvFSCSSCFL1FL2FL3FL5流式細胞儀工作原理模擬圖 Mindray Confidential第6頁流式細胞儀與慣用檢驗儀器比較項目流式細胞儀血球儀生化分析儀免疫分析儀測試對象細胞，血清細胞(測量設(shè)置全部

3、固定化）血清血清測試目標(biāo)物理或化學(xué)性質(zhì)（如細胞大小、內(nèi)部復(fù)雜程度、DNA含量）；小分子物質(zhì)（如抗原，抗體）物理或化學(xué)性質(zhì)（如細胞大小、內(nèi)部復(fù)雜程度、DNA含量）化學(xué)成份和一些小分子物質(zhì)（如鉀、鈉、鈣、酶）小分子物質(zhì)（如抗原、抗體、激素）測試原理流式細胞術(shù)+抗原抗體反應(yīng)流式細胞術(shù)化學(xué)比色法抗原抗體反應(yīng)計量百分比或絕對計數(shù)（如 %、*個/uL）；物質(zhì)量或定性判定（L、UI/L、 陰性、陽pmol/m性）百分比和絕對計數(shù)（如 %、*個/L）物質(zhì)量（mol/L）物質(zhì)量或定性判定（L、UI/L、 陰性、陽pmol/m性）宏觀和微觀測量宏觀對象（細胞）上微觀物質(zhì)（抗原、看不見、摸不到）測定宏觀對象（細胞）

4、上宏觀物質(zhì)（物理、復(fù)雜度、含量，看得見、摸得到）測量微觀物質(zhì)（可溶性成份和一些小分子物質(zhì)，看不見、摸不到）測量微觀物質(zhì)（小分子物質(zhì)，看不見、摸不到）輸出 Mindray Confidential第7頁生命科學(xué)領(lǐng)域應(yīng)用制藥工業(yè)藥品篩選，疫苗研究生物學(xué)研究遺傳，生殖，微生物，細胞生物，毒理，分子生物環(huán)境研究湖泊、海洋生態(tài)研究臨床診療、研究血液，腫瘤，藥理，免疫農(nóng)業(yè)畜牧業(yè)選種，育種食品工業(yè)第8頁 Mindray Confidential9flow cytometry +tumorflow cytometry + Transplantflow cytometry + Autoimmune diseas

5、esflow cytometry+leukemiaflow cytometry總結(jié)能夠預(yù)計未來流式細胞儀在臨床上應(yīng)用一定會有更大發(fā)展！第9頁1342流式細胞術(shù)基本原理流式臨床應(yīng)用邁瑞流式介紹教授對邁瑞流式評價目錄第10頁流式細胞術(shù)在臨床檢驗中應(yīng)用 Mindray Confidential11淋巴細胞亞群分析HLA-B27檢測白血病免疫分型和MRD 急性白血病、 慢性淋巴增生性疾病（CLD) 淋巴瘤造血干細胞分析 造血干細胞絕對計數(shù)；陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥（PNH） CD55/CD59/FLAER檢測血小板相關(guān)分析 血小板計數(shù)、血小板免疫表型分析細胞周期與DNA倍體分析。全國三級醫(yī)院檢驗科流式

6、項目分布第11頁流式細胞術(shù)分析淋巴細胞亞群原理 Mindray Confidential12第12頁TBNK淋巴細胞檢測及臨床指導(dǎo)意義診療與判別診療疾病臨床分期治療效果評定指導(dǎo)臨床用藥。 Mindray Confidential13淋巴細胞分類百分比和絕對計數(shù)淋巴細胞種類特異性分子標(biāo)識T淋巴細胞CD3+T輔助/誘導(dǎo)淋巴細胞CD3 + CD4 + T抑制/細胞毒淋巴細胞CD3 + CD8 + B淋巴細胞CD3-CD19+NK淋巴細胞CD3-CD16+CD56+第13頁TBNK淋巴細胞檢測在臨床科室中應(yīng)用 Mindray Confidential14流式在風(fēng)濕免疫科應(yīng)用流式在腫瘤應(yīng)用流式在移植中心

7、應(yīng)用流式在血液科應(yīng)用流式在感染科應(yīng)用流式在心血管內(nèi)科應(yīng)用流式在其它科室應(yīng)用流式在健康體檢應(yīng)用第14頁15胃癌及其不一樣臨床分期淋巴細胞亞群改變 Mindray Confidential第15頁16腫瘤術(shù)后淋巴細胞亞群改變 Mindray Confidential第16頁17乙型肝炎患者體內(nèi)淋巴細胞亞群改變傳染病信息. . 24. 206-210 Mindray Confidential第17頁 Mindray Confidential18（World J Gastroenterol. ,14:3710-8.）乙型肝炎患者體內(nèi)淋巴細胞亞群改變第18頁HIV/AIDS病人診療與分期 Mindray

8、 Confidential19成人及15歲以上青少年HIV/AIDS臨床分期及其分期標(biāo)準(zhǔn)臨床分期CD4細胞計數(shù)（個數(shù)/mm3）HIV抗體檢測HIV核酸檢測主要臨床表現(xiàn)普通連續(xù)時間期6個月12個月A期500或一過性降低或急性HIV感染綜合征或無癥狀1周3周B期500血清陽轉(zhuǎn)或無癥狀或PGL6個月12個月期6年7.5年A期350無癥狀或A組臨床表現(xiàn)B期200349B組臨床表現(xiàn)期200C組臨床表現(xiàn)23年（WS 293- 艾滋病和艾滋病病毒感染診療標(biāo)準(zhǔn)）第19頁肺部疾病判別診療疾病類型例數(shù)BALF淋巴細胞亞群（%）CD3+CD4+CD8+CD4/CD8結(jié)節(jié)病1491.85.6270.611.214.5

9、8.46.93.12IPF1694.53.9114.73.1278.47.920.20.04肺結(jié)核674.35.6142.31.9232.11.211.30.05肺部腫瘤767.510.424.35.2435.19.620.70.13 Mindray Confidential20（中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志. , 23: 214-216） 第20頁利妥昔單抗治療效果監(jiān)測 Mindray Confidential21(Arthritis Research & Therapy ,11；R131)利妥昔單抗(美羅華)：針對B細胞特異性抗原CD20人-鼠嵌合單克隆抗體用于復(fù)發(fā)或耐藥CD20 陽性濾泡性淋巴瘤是首

10、個以B細胞為靶標(biāo)治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥品外周血B細胞百分比顯著下降而骨髓B細胞略下降第21頁移植病人免疫抑制劑治療指導(dǎo) Mindray Confidential22A移植前1-2天；B移植后1-2天；C移植后4-5天；D移植后6-8天；E移植后12-16天69例（50例沒有排斥，19例發(fā)生排斥）CD4在移植后有一個遲緩下降過程CD4假如升高，預(yù)示發(fā)生排斥反應(yīng)，需要調(diào)整免疫抑制藥治療方案第22頁（ Neuroimmunomodulation. , 214:206-12.） 老年人身體情況評定 Mindray Confidential23第23頁（ Clinical and Applied Immu

11、nology Reviews. , 2:129139. ）慢性疲勞綜合征與淋巴亞群分析 Mindray Confidential24第24頁（ Mechanisms of Ageing and De6elopment. 1998, 100: 121132.） 體育鍛煉對淋巴亞群影響 Mindray Confidential25第25頁臨床需要監(jiān)測免疫功效常見疾病 Mindray Confidential26疾病類別內(nèi)容原發(fā)性免疫缺點B細胞免疫缺點、T細胞免疫缺點、聯(lián)合免疫缺點繼發(fā)性免疫缺點感染（HIV、CMV）免疫抑制劑使用腫瘤代謝性疾病、營養(yǎng)不良、衰老本身免疫病SLE、RA血液腫瘤白血病/淋

12、巴瘤其它手術(shù)（Kuby Immunology, 7th,）第26頁TBNK淋巴細胞亞群檢測 Mindray Confidential27CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP/CD4-APCCD3-FITC/CD16+56-PE/CD45-PerCP/CD19-APC第27頁HLA-B27檢測與脊柱關(guān)節(jié)病 Mindray Confidential28脊柱關(guān)節(jié)病（Spondyloarthritis, SpA）疾病HLA-B27陽性率(%)強直性脊椎炎90Reiters綜合癥7090銀屑病性關(guān)節(jié)炎 5060急性前葡萄膜炎4050潰瘍性結(jié)腸炎伴關(guān)節(jié)病510正常人群 27第28頁 Min

13、dray Confidential29強直性脊柱炎強直性脊柱炎（AS）定義：一個慢性、進行性和炎性疾病，也是血清陰性脊柱關(guān)節(jié)病（SpA）中最具代表性疾病。主要累計骶髂關(guān)節(jié)、脊柱、脊柱軟組織及四肢關(guān)節(jié)，表現(xiàn)為椎間盤纖維環(huán)和纖維環(huán)結(jié)締組織骨化，椎間動關(guān)節(jié)和四肢關(guān)節(jié)滑膜炎癥和增生，嚴(yán)重者可失去勞動能力。試驗室檢驗： CRP升高血沉加緊HLA-B27陽性類風(fēng)濕因子陰性第29頁HLA-B27檢測與AS輔助診療 Mindray Confidential301984年修訂紐約標(biāo)準(zhǔn)；1991年歐洲脊柱關(guān)節(jié)病研究組（ESSG）標(biāo)準(zhǔn)；國際脊柱關(guān)節(jié)病評定工作組（ASAS）SpA診療標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)增加HLA-B27作為主要

14、診療指標(biāo) Rudwaleit M. Curr Opin Rheumatol.,22:375-380）第30頁 Mindray Confidential31HLA-B27檢測在AS中診療價值臨床意義：1.輔助疾病早期確診,早期治療;2.判別診療癥狀相同疾病;3.對高危人群進行預(yù)測;HLA-B27+HLA-B27+ ASHLA-B27- AS約5-10%AS患者為HLA-B27- HLA-B27陽性率在我國為27%，AS患病率為0.1%，所以大部分HLA-B27+并不患AS AS患者中HLA-B27+達9095% 第31頁不一樣HLA-B27檢測方法比較 Mindray Confidential3

15、2方法檢測伎倆優(yōu)點缺點MLCT顯微鏡人工觀察經(jīng)濟，無需昂貴設(shè)備 操作步驟繁瑣、費時，且易受血清、補體、單抗品質(zhì)以及操作者主觀原因影響，常出現(xiàn)誤判漏判。靈敏度、特異性和重復(fù)性均較差。當(dāng)前，僅少數(shù)試驗室使用。ELISA酶標(biāo)儀測定吸光度敏感性較高，設(shè)備簡單，可進行高通量檢測操作步驟較多，洗滌步驟復(fù)雜、要求嚴(yán)格，易污染造成假陽性，重復(fù)性普通。PCRDNA擴增后，電泳紫外分析敏感性、特異性高試驗室慣用方法，耗時長，需要提取DNA、PCR擴增后還需要電泳分析；輕易污染，假陽性率高：空氣中DNA氣溶膠極易污染擴增產(chǎn)物，對環(huán)境要求高。FCM計算機數(shù)據(jù)分析操作步驟簡單、快捷，敏感性和特異性高 試驗室慣用方法，需

16、配置流式細胞儀；注意抗原/抗體交叉反應(yīng)。第32頁HLA-B27檢測敏感性和特異性 Mindray Confidential33（ Rudwaleit M,Sieper J. Nat Rev Rheumatol.,8:262-268 ）與其它指標(biāo)相比，HLA-B27在SpA判別和診療上具更高敏感性、特異性ParameterSensitivity%SpecificityInflammatory back pain38-9576-100Heel pain (enthesitis)16-5289-96Peripheral arthritis26-6291-100Dactylitis12-2796-99

17、Anterior uveitis10-2297-100Psoriasis1-1796IBD2-799Positive family history for AS, reactive arthritis, IBD, psoriasis, anterior uveitis7-3693-100Response to NSAIDs64-7775-85Elevated acute phase reactants (CRP)38-6967-100HLA-B2783-9691-96MRI of sacroiliac joints54-9383-100第33頁HLA-B27檢測配套試劑 Mindray Con

18、fidential34健康人（左）和強直性脊柱炎患者（右）HLA-B27檢測結(jié)果（上：同型對照，下：測試樣本）FITC-HLA-B27/PE-HLA-B7雙色第34頁1342流式細胞術(shù)基本原理流式臨床應(yīng)用邁瑞流式介紹教授對邁瑞流式評價目錄 Mindray Confidential35第35頁邁瑞流式細胞儀及配套試劑 Mindray Confidential36BriCyte E6流式細胞儀及配套試劑第36頁人性化設(shè)計降低臨床操作難度臨床常規(guī)項目全自動軟件雙向LIS連接全漢字操作界面 Mindray Confidential37第37頁1.選擇檢測項目2.自動進樣3.匯報智能化自動設(shè)計自動分析軟

19、件第38頁智能化自動檢測設(shè)計 Mindray Confidential39自動調(diào)整-準(zhǔn)確、可靠臨床軟件TBNK淋巴細胞分析HLA-B27檢測電壓賠償質(zhì)控第39頁自動電壓調(diào)整 Mindray Confidential40第40頁自動賠償調(diào)整 Mindray Confidential418.00第41頁單平臺絕對計數(shù)無需內(nèi)標(biāo)微球內(nèi)置高精度流量傳感器，準(zhǔn)確測定樣本流體積，直接計算絕對計數(shù)；采取陶瓷泵負壓吸樣形成有效“雙閉環(huán)”，穩(wěn)定控制樣本流； Mindray Confidential42第42頁智能溫度控制 15到32無需調(diào)整光路全封閉防塵設(shè)計簡練穩(wěn)定-光學(xué)系統(tǒng)第43頁1275 mm試管1275 m

20、m試管1.5mL、2mL微量離心管方便快捷-各種進樣方式手動上樣系統(tǒng)自動進樣系統(tǒng) Mindray Confidential44第44頁機型BriCyte E6FC500Canto II外形尺寸*(mm，寬高深)500500550610978889910630610重量*(Kg)5585146自動進樣器重量(Kg)15-22氣源不需要需要需要穩(wěn)壓電源不需要需要需要簡練穩(wěn)定第45頁儀器性能：高分辨率 Mindray Confidential46BriCyte E6 檢測305A八峰粒子PE50 MESF BD FACSCanto II檢測305A八峰粒子PE50 MESF第46頁淋巴細胞亞群分析臨

21、床評定 Mindray Confidential47北京協(xié)和醫(yī)院北醫(yī)三院四川省人民醫(yī)院臨床評定病人；42例對照儀器：BCI FC500臨床評定病人；30例對照儀器：BD FACSCanto II臨床評定病人；34例對照儀器：BCI FC500第47頁 Mindray Confidential48HLA-B27檢測臨床評定試驗儀器對照儀器累計陰性陽性陰性23023陽性077小計23730結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn)結(jié)論陽性符合率100.00%95%Pass陰性符合率100.00%95%Pass總體符合率100.00%95%PassKappa10.8Pass試驗儀器對照儀器累計陰性陽性陰性16016陽性01717小計161733結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn)結(jié)論陽性符合率100.00%95%Pass陰性符合率100.00%95%Pass總體符合率100.00%95%PassKappa10.8Pass北醫(yī)三院四川省人民醫(yī)院臨床評定病人：30例對照儀器：BD FACSCanto II臨床評定病人；33例對照儀器：BCI FC500第48頁 Mindray Confidential49項目BriCyte E6傳統(tǒng)流式細胞儀軟件界面全漢字操作軟件，模塊化設(shè)計，可見即所得，兩小時掌握儀器操作英文界面，菜單式設(shè)計，需要長時間熟悉菜