1、四種血虛小鼠模型制備方法的比擬【關鍵詞】血虛模型；,四物湯；,環磷酰胺；,乙酰苯肼摘要：目的挑選適宜的小鼠血虛模型的制造方法。方法采用環磷酰胺250g/kg腹腔注射；乙酰苯肼350g/kg皮下注射；環磷酰胺120g/kg+乙酰苯肼200g/kg腹腔注射及環磷酰胺160g/kg腹腔注射+乙酰苯肼60g/kg皮下注射四種方法制造小鼠血虛模型，取血測定小鼠外周血象、觀察小鼠一般情況的變化。結果4種方法可造成不同程度的小鼠血虛狀態,應用四物湯治療后,環磷酰胺160l/kg腹腔注射+乙酰苯肼60g/kg皮下注射所造模型組小鼠血虛狀態有顯著改善。結論環磷酰胺160g/kg腹腔注射+乙酰苯肼60g/kg皮下

2、注射所造模型小鼠最能反映中醫血虛證的主要特征。關鍵詞：血虛模型；四物湯；環磷酰胺；乙酰苯肼血虛證是中醫常見證，血虛模型是應用較廣的中醫動物模型，但目前制造模型的方法不一，作者首先采用環磷酰胺250g/kg腹腔注射；乙酰苯肼350g/kg皮下注射；環磷酰胺120g/kg+乙酰苯肼200g/kg腹腔注射三種方法制造小鼠血虛模型，并以四物湯對后兩組進展治療，效果不理想，后采用環磷酰胺160g/kg腹腔注射+乙酰苯肼60g/kg皮下注射制造小鼠血虛模型，以四物湯進展治療獲得成功。實驗中，局部結果與文獻不盡相符。現報道如下。1儀器和藥品1.1動物昆明種小鼠體重1822g，雌雄各半，河北醫科大學實驗動物中

3、心。1.2儀器SysexF800型全自動血液分析儀日本1.3藥物及試劑注射用環磷酰胺PA上海華聯制藥，批號020605；乙酰苯肼APH上海三愛思試劑，化學純，批號20010323；生理鹽水(石家莊四藥股份批號03021227)。四物湯湯劑于實驗前一天配制成高濃度藥液,生藥含量為1.25g/l，置4保存。臨用前用蒸餾水稀釋2倍得中濃度藥液，生藥含量為0.625g/l；稀釋4倍得低濃度藥液，生藥含量為0.313g/l(相當于臨床有效量)。2方法2.1三種造模方法的比擬實驗動物按體重隨機分為正常組、模型組、模型組、模型組，每組各10只。模型組于第4天腹腔注射PA250g/kg，第14天眼底靜脈叢采血

4、測血常規。模型組于1，4，7d皮下注射APH150，100，100g/kg，第9天眼底靜脈叢采血，測血常規。模型組于第4，8天腹腔注射PA60g/kg，第7、10天腹腔注射APH100g/kg，第14天眼底靜脈叢采血測血常規。正常組于4，7，8，10d腹腔注射生理鹽水，第14天眼底靜脈叢采血測血常規25。2.2四物湯對乙酰苯肼350g/kg及環磷酰胺120g/kg+乙酰苯肼200g/kg所致血虛小鼠的補血作用實驗動物按體重隨機分為9組，每組12只。1組為空白對照組，25組為PA+APH模I模型組，69組為APH模II)模型組，其中2，6組為模型對照組，其余為高、中、低劑量組，分別給予高、中、低

5、劑量的四物湯，35用藥組連續灌胃給藥13d，對照組給等容積煮沸消毒的自來水。79用藥組連續灌胃給藥9d。造模及采血方法同前1。2.3四物湯對環磷酰胺160g/kg+乙酰苯肼60g/kg所致小鼠血虛狀模型的補血作用實驗動物按體重隨機分為5組，每組12只。1組為空白對照組，2組為模型對照組，35組為給藥組，分別給予高、中、低劑量的四物湯。各用藥組連續灌胃給藥13d，對照組給等容積煮沸消毒的自來水。25組分別于2，5d皮下注射APH20，40g/kg，從第5天開場連續四日每日腹腔注射PA40g/kg，空白對照組小鼠同時注射等容量的生理鹽水。末次給藥后1.5h眼底靜脈叢采血測血常規。2.4統計處理本實

6、驗采用s表示實驗結果。統計分析使用SPSS11.5軟件。3結果3.1三種造模方法的比擬3.1.1小鼠一般情況動物于造模后，開場出現不同程度的懶動、毛色枯槁、少食、及尾、耳、眼蒼白，模型III組最為嚴重，第12天開場有動物死亡，共死亡2只，其他組沒有動物死亡。轉貼于論文聯盟.ll.3.1.2小鼠外周血象的變化各模型組小鼠的紅細胞、血紅蛋白、紅細胞壓積均有不同程度降低。模型組降低最為明顯。各組動物的血小板變化不大，只有模型III組血小板上升39%P0.05。除模型組白細胞下降外，其余二組白細胞上升模型組模型組結果見表1。表1三種造模方法的檢驗結果(略)3.2四物湯對乙酰苯肼350g/kg及環磷酰胺

7、120g/kg+乙酰苯肼200g/kg所致血虛小鼠的補血作用3.2.1小鼠一般情況PA+APH模型小鼠于造模后出現懶動、閉目，尾、耳、眼蒼白，各組有46只動物死亡，經x2檢驗無顯著性差異。APH模型小鼠尾、耳、眼蒼白，飲食、活動尚可，給藥組與模型組無明顯差異。3.2.2四物湯對環磷酰胺160g/kg+乙酰苯肼60g/kg所致血虛小鼠的補血作用小鼠外周血象的變化各模型組小鼠的紅細胞、血紅蛋白、紅細胞壓積均降低，與正常組相比有顯著差異P0.01，各用藥組與模型組差異不顯著P0.05。見表23。表2四物湯對PA120g/kg+APH200g/kg所致血虛小鼠模的作用(略)表3四物湯對APH350g/

8、kg所致血虛小鼠模)的作用(略)3.3四物湯對環磷酰胺160g/kg+乙酰苯肼60g/kg所致血虛小鼠的補血作用3.3.1小鼠一般情況模型組小鼠于造模后，出現懶動、毛色枯槁、少食、及尾、耳、眼蒼白。給藥孝中劑量組小鼠行動敏捷，毛色正常，眼、耳、尾呈粉紅色，與正常組無明顯差異。3.3.2小鼠外周血象的變化模型組小鼠的紅細胞、血紅蛋白、紅細胞壓積均降低，與正常組相比有顯著差異P0.01。給藥中、小劑量組與模型組比擬，各指標有顯著進步P0.01，用藥大劑量組各指標數值雖有進步但與模型組差異不顯著P0.05。表4四物湯對PA160g/kg+APH60g/kg所致血虛小鼠的補血作用(略)4討論有報道采用

9、PA+APH造成小鼠血虛狀態，實驗動物白細胞下降，分別應用當歸補血湯，四物湯治療后，白細胞上升，并與模型組有顯著差異13。本次實驗中嚴格按照文獻記載方法造模，但白細胞顯著增高，經人工計數驗證，結果一樣。大多數文獻報道單用APH造模可致白細胞升高，但也有報道白細胞下降6，提示可能與APH有關，實驗所用APH均為化學純，APH對實驗動物白細胞的影響有待進一步研究。本研究中以PA120g/kg+APH200g/kg造模時實驗動物死亡2只，與文獻報道一樣。用于研究四物湯的補血作用時，動物死亡近半，與文獻報道每組死亡只不符，經重復實驗，結果一樣，死亡動物解剖可見動物肝、脾、腎腫大，色黑，與文獻報道一樣2

10、。有報道指出四物湯可顯著改善以APH350g/kg，PA120g/kg+APH200g/kg所致小鼠的血虛狀態，本次實驗中采用一樣方法，各用藥組的各指標數值比模型組有所改善，但無統計學意義。以PA160g/kg+APH60g/kg造成小鼠血虛狀態時，除白細胞外其他與文獻報道相符。參考文獻：1金假設敏，寧煉，陳長勛，等血虛模型動物制備及當歸補血湯的作用研究J.中成藥，2001，23(4)：268.2袁久榮，盧兗偉，容蓉，等計算機輔助分析四物湯補血作用配伍機理的研究J.中國實驗方劑學雜志，2000，6(1)：37.3袁久榮，朱建偉，李成韶，等四物湯對兩種血虛動物模型補血作用的比擬J.山東中醫藥大學學報，1999，23(5)：238.4馬增春，高月，劉永學，等.四物湯對環磷酰