1、組織胚胎學(xué)緒論 人衛(wèi)7版一、組織學(xué)的研究?jī)?nèi)容 組織學(xué)（histology）：研究機(jī)體微細(xì)結(jié)構(gòu)及其 相關(guān)功能的科學(xué)。組織上皮組織結(jié)締組織肌肉組織神經(jīng)組織細(xì)胞細(xì)胞間質(zhì)器官和系統(tǒng)（細(xì)胞外基質(zhì)）2細(xì)胞：是機(jī)體形態(tài)結(jié)構(gòu)與功能的基本單位。組織：由細(xì)胞和細(xì)胞間質(zhì)(又稱(chēng)細(xì)胞外基質(zhì)) 組成的群體結(jié)構(gòu)，是構(gòu)成機(jī)體器官的 基本成分。 器官：具有一定的形態(tài)結(jié)構(gòu)，并執(zhí)行特定的 生理功能。系統(tǒng)：由一些結(jié)構(gòu)連續(xù)、功能相關(guān)的器官組合而 成，完成連續(xù)的生理活動(dòng)。 細(xì)胞-組織-器官-系統(tǒng)3人體器官分類(lèi)組織學(xué)特征實(shí)質(zhì)性器官中空性中央：大空腔表面：被模如：消化腺、淋巴器官 、 內(nèi)分泌腺、腎臟等。如：心血管、消化管、呼吸道等內(nèi)部：實(shí)質(zhì)

2、行使功能管壁：分34層4組織學(xué)結(jié)構(gòu)觀察組織學(xué) 結(jié)構(gòu)光鏡結(jié)構(gòu)用光學(xué)顯微鏡觀察的結(jié)構(gòu)（LM）(light microscope ,LM 簡(jiǎn)稱(chēng)光鏡)電鏡結(jié)構(gòu)電子顯微鏡下觀察的結(jié)構(gòu)（EM）(electron microscope, EM簡(jiǎn)稱(chēng)電鏡） 又稱(chēng)超微結(jié)構(gòu)(ultrastructure) 5二、組織學(xué)的研究方法和常用技術(shù) (一)光學(xué)顯微鏡技術(shù) 1、常用組織切片標(biāo)本制備技術(shù) 石蠟切片術(shù) 取材和固定; 脫水和包埋; 切片和染色; 封片。 其他；火棉膠包埋, 冰凍切片, 涂片,鋪片,磨片等 6 蘇木精 伊紅 堿性染料酸性染料 染成紅色 （嗜酸性）細(xì)胞核中的染色質(zhì)、細(xì)胞質(zhì)中的核糖體 細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞間質(zhì)成份 染

3、成藍(lán)色（嗜堿性）常用染色方法：HE染色（Hematoxylin）（Eosin）HE染色7嗜堿性：可使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì) 及細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的核糖體等 結(jié)構(gòu)染成藍(lán)紫色。嗜酸性：可使多數(shù)細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì) 染成粉紅色。 中性： 與兩種染液親合力都不強(qiáng)。組織結(jié)構(gòu)的嗜色性嗜堿性嗜酸性8 A 嗜銀性 B 嗜鉻性 C 異染性其它染色方法9普通光學(xué)顯微鏡是觀察組織細(xì)胞微細(xì)結(jié)構(gòu)最常用的工具，分為光學(xué)部分機(jī)械部分起放大作用光鏡的分辨率約為可放大1500倍左右（light microscope ，LM ）10幾種特殊顯微鏡術(shù) （1）相差顯微鏡 (phase contrast microscope)用于觀察生活細(xì)胞和末經(jīng)染色細(xì)胞的

4、形態(tài)結(jié)構(gòu)。 神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)11(2) 熒光顯微鏡 (fluorescence micrscope) 是用以觀察 細(xì)胞、組織內(nèi) 熒光物質(zhì)的分布。 神經(jīng)球12 (二) 共焦激光掃描顯微鏡 共焦激光掃描顯微鏡 (confocal laser scanning microscope，CLSM) 由激光光源、共焦成像掃描 系統(tǒng)、電子光學(xué)系統(tǒng)和微機(jī) 圖象分析系統(tǒng)四部份構(gòu)成。 可對(duì)樣品進(jìn)行斷層掃描重建 三維圖像，進(jìn)行體視學(xué)分析； 測(cè)定細(xì)胞內(nèi)pH、鈣濃度等； 更精確地檢測(cè)、識(shí)別， 組織細(xì)胞的微細(xì)結(jié)構(gòu)及其變 化。CLSM又稱(chēng)細(xì)胞CT。CLSM13CLSM 圖像Human neuronal precursor c

5、ellsCLSM海馬MR、GR共存14 (三)電子顯微鏡技術(shù) （electron microscope, EM） 透射電鏡 (transmission electron microscope,TEM) 觀察細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu) 分辨率為0.1-0.2nm,可放大幾萬(wàn)幾十萬(wàn)倍 掃描電鏡（scanning electron microscope,SEM) 觀察組織或細(xì)胞表面的立體結(jié)構(gòu) 冰凍蝕刻（freeze etching method） 觀察細(xì)胞斷裂表面形態(tài)結(jié)構(gòu) 分析電鏡 X射線顯微分析術(shù)（Xray microanalysis） 研究細(xì)胞、組織內(nèi)元素種類(lèi)分布和含量15透射電鏡與照片TEM淋巴細(xì)胞16掃描

6、電鏡與照片SEMSEM 1.纖毛 2.微絨毛17冰凍蝕刻細(xì)胞 冷凍斷裂腎小球右下線粒體 冰凍蝕刻照片18分析電鏡X線微區(qū)分析圖片分析電鏡X線微區(qū)分析19糖類(lèi)顯示法PAS反應(yīng)： 過(guò)碘酸希夫反應(yīng)(periodic acid Schiff reaction，PAS)： 檢測(cè)組織或細(xì)胞中有無(wú)多糖存在。 原理：多糖PA氧化醛Schiff試劑紫紅色沉淀(四)組織化學(xué)和細(xì)胞化學(xué)技術(shù) PAS反應(yīng)陽(yáng)性部位即表示多糖和蛋白多糖的存在 PAS陽(yáng)性小腸上皮20組織細(xì)胞化學(xué)染色圖片酶細(xì)胞化學(xué)神經(jīng)元ACP酶陽(yáng)性 脂類(lèi)顯示法蘇丹 脂類(lèi)顯示法蘇丹 鋨酸髓鞘染色 核酸顯示法21 利用抗原（antigen, Ag），抗體（ant

7、ibody）特異結(jié)合的原理，用已知抗體檢測(cè)未知抗原的一種方法。免疫細(xì)胞化學(xué)原理22免疫細(xì)胞化學(xué)標(biāo)記物23免疫細(xì)胞化學(xué)PAP法24免疫細(xì)胞化學(xué)ABC法25(五)免疫組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)技術(shù)免疫組織化學(xué)術(shù)(immunohistochemistry) 是將免疫學(xué)原理與組織化學(xué)技術(shù)相結(jié)合建立的新技術(shù)，根據(jù)抗原與抗體特異性結(jié)合的特點(diǎn)，檢測(cè)組織細(xì)胞內(nèi)某種多肽、蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)的存在與分布。 人鼻粘膜上皮棘細(xì)胞細(xì)胞間橋TM陽(yáng)性26(六)原位雜交術(shù)原位雜交(in situ hybridization)是一種敏感性高、特異性強(qiáng)的，能在組織細(xì)胞原位進(jìn)行的核酸分子雜交技術(shù)。常用的標(biāo)記物有兩種：1、放射性同位素， 如

8、3H、14C、 32P、35S、125I，2、為非放射性物質(zhì)， 如地高辛等。 非放射性原位雜交 海馬GAP43 mRNA27(七)放射自顯影術(shù)放射自顯影術(shù)(autoradiograph)旨在追蹤某些物質(zhì)在體內(nèi)、組織或細(xì)胞中的分布與代謝徑路。 放射自顯影甲狀腺125I同位素注入取材制標(biāo)本涂核乳膠暗室曝光顯影、定影染色LM觀察28(八)組織培養(yǎng)和組織工程組織工程基本方法示意圖A獲取組織 B分離、培養(yǎng)種子細(xì)胞C制備三維支架D將種子細(xì)胞種植于支架 E將細(xì)胞-支架復(fù)合物植入組織缺損處細(xì)胞培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)29 (九)組織細(xì)胞定量術(shù)1顯微分光光度術(shù) 應(yīng)用顯微分光光度計(jì)(microspectrophotometer)對(duì)組織和細(xì)胞內(nèi)化學(xué)成分進(jìn)行定量分析。 2形態(tài)計(jì)量術(shù) 運(yùn)用數(shù)學(xué)和統(tǒng)計(jì)學(xué)原理對(duì)組織細(xì)胞內(nèi)各種成分的數(shù)