1、會計(jì)學(xué)1醋酸纖維薄膜電泳分離血清蛋白醋酸纖維薄膜電泳分離血清蛋白第1頁/共33頁血清中含有清蛋白，血清中含有清蛋白，-球蛋白、球蛋白、-球蛋白、球蛋白、-球蛋白和各種脂蛋白等。各種蛋白質(zhì)由于氨基酸組球蛋白和各種脂蛋白等。各種蛋白質(zhì)由于氨基酸組分、立體構(gòu)象、分子量、等電點(diǎn)及形狀不同，在電分、立體構(gòu)象、分子量、等電點(diǎn)及形狀不同，在電場中遷移速度不同。分子量小、等電點(diǎn)低、在相同場中遷移速度不同。分子量小、等電點(diǎn)低、在相同堿性堿性PHPH值緩沖體系中，帶負(fù)荷電荷多的蛋白質(zhì)顆粒值緩沖體系中，帶負(fù)荷電荷多的蛋白質(zhì)顆粒在電場中遷移速度快。在電場中遷移速度快。例如，以醋酸纖維素薄膜為例如，以醋酸纖維素薄膜為支

2、持物，正常人血清在支持物，正常人血清在的緩沖體系中電泳的緩沖體系中電泳1h1h左右，染色后可顯示左右，染色后可顯示5 5條區(qū)帶條區(qū)帶。清蛋白泳動最快，其余依次為。清蛋白泳動最快，其余依次為1 1- -、2 2- -、-及及-球蛋白（如圖球蛋白（如圖3-53-5）。）。第2頁/共33頁圖圖3-53-5正常人血清醋酸纖維素薄膜電泳示意圖正常人血清醋酸纖維素薄膜電泳示意圖1 1為清蛋白，為清蛋白，2 2，3 3，4 4，5 5分別分別1 1- -，2 2- -，-及及-球蛋白，球蛋白，6 6為點(diǎn)樣原點(diǎn)為點(diǎn)樣原點(diǎn) 第3頁/共33頁這些區(qū)帶經(jīng)洗脫后可用分光光度法定量這些區(qū)帶經(jīng)洗脫后可用分光光度法定量，也

3、可直接進(jìn)行光吸收掃描自動繪出區(qū)，也可直接進(jìn)行光吸收掃描自動繪出區(qū)帶吸收峰及相對百分比。帶吸收峰及相對百分比。此法由于操作簡單，快速，分辨率高及此法由于操作簡單，快速，分辨率高及重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)。它不僅可用于分離血重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)。它不僅可用于分離血清蛋白，還可用于分離脂蛋白、血紅蛋清蛋白，還可用于分離脂蛋白、血紅蛋白及同工酶的分離測定。白及同工酶的分離測定。第4頁/共33頁第5頁/共33頁4 4 試劑試劑 巴比妥巴比妥- -巴比妥鈉緩沖液巴比妥鈉緩沖液(pH8.6, 0.07mol/L, (pH8.6, 0.07mol/L, 離子強(qiáng)度離子強(qiáng)度0.06)0.06)稱取巴比妥（稱取巴比妥（ARAR）和

4、巴比妥鈉（）和巴比妥鈉（ARAR），置于三角燒瓶中，加蒸餾水約），置于三角燒瓶中，加蒸餾水約600mL600mL，稍，稍加熱溶解，冷卻后用蒸餾水定容至加熱溶解，冷卻后用蒸餾水定容至1000mL1000mL。置。置40C40C保存，備用。保存，備用。 血清蛋白染色血清蛋白染色染色液（染色液（0.5%0.5%氨基黑氨基黑10B10B）：稱取氨基黑）：稱取氨基黑10B10B，加蒸餾水加蒸餾水40mL40mL，甲醇（，甲醇（ARAR）50mL50mL，冰乙酸（，冰乙酸（ARAR）10mL10mL，混勻溶解后置具寒試劑瓶內(nèi)貯存。，混勻溶解后置具寒試劑瓶內(nèi)貯存。漂洗液：取漂洗液：取95%95%乙醇（乙醇（

5、ARAR）45mL45mL，冰乙酸（，冰乙酸（ARAR）5mL5mL和蒸餾水和蒸餾水50mL50mL，混勻置具塞試劑瓶中貯存。，混勻置具塞試劑瓶中貯存。第6頁/共33頁透明液：臨用前配制。透明液：臨用前配制。甲液：取冰乙酸（甲液：取冰乙酸（ARAR）15mL15mL，無水乙醇（，無水乙醇（ARAR）85mL85mL，混勻置試劑瓶內(nèi)，塞緊瓶塞，備用。，混勻置試劑瓶內(nèi)，塞緊瓶塞，備用。乙液：取冰乙酸（乙液：取冰乙酸（ARAR）25mL25mL，無水乙醇（，無水乙醇（ARAR）75mL75mL，混勻置試劑瓶內(nèi)，塞緊瓶塞，備用。，混勻置試劑瓶內(nèi)，塞緊瓶塞，備用。保存液：液體石蠟。保存液：液體石蠟。定量

6、洗脫液（溶液）：定量洗脫液（溶液）：稱取稱取16g16g氫氧化鈉（氫氧化鈉（ARAR）用少量蒸餾水溶解后定容）用少量蒸餾水溶解后定容至至1000ml1000ml。第7頁/共33頁【 實(shí)驗(yàn)方法與步驟】實(shí)驗(yàn)方法與步驟】1 1、儀器與薄膜的準(zhǔn)備、儀器與薄膜的準(zhǔn)備 醋酸纖維素薄膜的潤濕與選擇醋酸纖維素薄膜的潤濕與選擇用竹夾子取一片薄膜，小心地平放在盛有緩沖用竹夾子取一片薄膜，小心地平放在盛有緩沖液的平皿中，若漂浮于液面的薄膜在液的平皿中，若漂浮于液面的薄膜在15-30s15-30s內(nèi)內(nèi)迅速潤濕，整條薄膜色澤深淺一致，則此膜均迅速潤濕，整條薄膜色澤深淺一致，則此膜均勻可用于電泳；若薄膜潤濕緩慢，色澤深淺

7、不勻可用于電泳；若薄膜潤濕緩慢，色澤深淺不一或有條紋及斑點(diǎn)等，則表示薄膜厚薄不均勻一或有條紋及斑點(diǎn)等，則表示薄膜厚薄不均勻應(yīng)棄去，以免影響電泳結(jié)果。應(yīng)棄去，以免影響電泳結(jié)果。將選好的薄膜用竹子輕壓，使其完全浸泡于緩將選好的薄膜用竹子輕壓，使其完全浸泡于緩沖液中約沖液中約30min30min后，方可用于電泳。后，方可用于電泳。 第8頁/共33頁 電泳槽的準(zhǔn)備電泳槽的準(zhǔn)備根據(jù)電泳槽膜支架的寬度，剪裁尺寸合適的濾紙條。根據(jù)電泳槽膜支架的寬度，剪裁尺寸合適的濾紙條。在兩個(gè)電極槽中，各倒入等體積的電極緩沖液，在電泳槽的在兩個(gè)電極槽中，各倒入等體積的電極緩沖液，在電泳槽的兩個(gè)膜支架上，各放兩層濾紙條，使濾

8、紙一端的長邊與支架兩個(gè)膜支架上，各放兩層濾紙條，使濾紙一端的長邊與支架前沿對齊，另一端浸入電極緩沖液內(nèi)。當(dāng)濾紙條全部潤濕后前沿對齊，另一端浸入電極緩沖液內(nèi)。當(dāng)濾紙條全部潤濕后，用玻璃棒輕輕擠壓在膜支架上的濾紙以驅(qū)趕氣泡，使濾紙，用玻璃棒輕輕擠壓在膜支架上的濾紙以驅(qū)趕氣泡，使濾紙的一端能緊貼在膜支架上。的一端能緊貼在膜支架上。濾紙條是兩個(gè)電極槽聯(lián)系醋酸纖維素薄膜的橋梁，因而稱為濾紙條是兩個(gè)電極槽聯(lián)系醋酸纖維素薄膜的橋梁，因而稱為濾紙橋。濾紙橋。 電極槽的平衡電極槽的平衡用平衡裝置（或自制平衡管）連接兩個(gè)電泳槽，使兩個(gè)電極用平衡裝置（或自制平衡管）連接兩個(gè)電泳槽，使兩個(gè)電極槽內(nèi)的緩沖液彼此處于同一

9、水平狀態(tài)，一般需平衡槽內(nèi)的緩沖液彼此處于同一水平狀態(tài)，一般需平衡15-20min15-20min。注意，取出平衡裝置時(shí)應(yīng)將活塞關(guān)緊。注意，取出平衡裝置時(shí)應(yīng)將活塞關(guān)緊。第9頁/共33頁2 2、點(diǎn)樣、點(diǎn)樣取一張干凈濾紙（取一張干凈濾紙（101010cm10cm），在距紙邊處用鉛筆），在距紙邊處用鉛筆劃一平行線，此線為點(diǎn)樣標(biāo)志區(qū)。劃一平行線，此線為點(diǎn)樣標(biāo)志區(qū)。用竹夾子取出浸透的薄膜，夾在兩層濾紙間以吸去用竹夾子取出浸透的薄膜，夾在兩層濾紙間以吸去多余的緩沖液。無光澤面向上平放在點(diǎn)樣模板上，多余的緩沖液。無光澤面向上平放在點(diǎn)樣模板上，使其底邊與模板底邊對齊。點(diǎn)樣區(qū)距陰極端處。點(diǎn)使其底邊與模板底邊對齊。

10、點(diǎn)樣區(qū)距陰極端處。點(diǎn)樣時(shí)，先用玻璃棒或血色素吸管取樣時(shí)，先用玻璃棒或血色素吸管取2-3L2-3L血清，均血清，均勻涂在加樣器上，再將點(diǎn)樣器輕輕印在點(diǎn)樣區(qū)內(nèi)，勻涂在加樣器上，再將點(diǎn)樣器輕輕印在點(diǎn)樣區(qū)內(nèi)，如圖如圖3-63-6所示，使血清完全滲透至薄膜內(nèi)，形成一所示，使血清完全滲透至薄膜內(nèi)，形成一定寬度、粗細(xì)均勻的直線。定寬度、粗細(xì)均勻的直線。此步是實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵，點(diǎn)樣前應(yīng)在濾紙上反復(fù)練習(xí)，此步是實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵，點(diǎn)樣前應(yīng)在濾紙上反復(fù)練習(xí)，掌握點(diǎn)樣技術(shù)后再正式點(diǎn)樣。掌握點(diǎn)樣技術(shù)后再正式點(diǎn)樣。第10頁/共33頁 圖圖3-6 3-6 醋酸纖維素薄膜規(guī)格及點(diǎn)樣位置示意圖（醋酸纖維素薄膜規(guī)格及點(diǎn)樣位置示意圖（虛線處為

11、點(diǎn)樣位置）虛線處為點(diǎn)樣位置）第11頁/共33頁3 3、 電泳電泳用竹夾子將點(diǎn)樣端的薄膜平貼在陰極電泳槽支架的用竹夾子將點(diǎn)樣端的薄膜平貼在陰極電泳槽支架的濾紙橋上（點(diǎn)樣面朝下），另一端平貼在陽極端支濾紙橋上（點(diǎn)樣面朝下），另一端平貼在陽極端支架上，如圖架上，如圖3-73-7所示，要求薄膜緊貼濾紙橋并繃直所示，要求薄膜緊貼濾紙橋并繃直，中間不能下垂。如一電泳槽中同時(shí)安放幾張薄膜，中間不能下垂。如一電泳槽中同時(shí)安放幾張薄膜，則薄膜之間應(yīng)相隔幾毫米。蓋上電泳槽蓋，使薄，則薄膜之間應(yīng)相隔幾毫米。蓋上電泳槽蓋，使薄膜平衡膜平衡10min10min。用導(dǎo)線將電泳槽的正、負(fù)極與電泳儀的正、負(fù)極分用導(dǎo)線將電泳槽

12、的正、負(fù)極與電泳儀的正、負(fù)極分別連接，注意不要接錯(cuò)。在室溫下電泳，打開電源別連接，注意不要接錯(cuò)。在室溫下電泳，打開電源開關(guān)，用電泳儀上細(xì)調(diào)節(jié)旋扭調(diào)到每厘米膜寬電流開關(guān)，用電泳儀上細(xì)調(diào)節(jié)旋扭調(diào)到每厘米膜寬電流強(qiáng)度為（強(qiáng)度為（8 8片薄膜則為）。通電片薄膜則為）。通電10-15min10-15min后，將電后，將電流調(diào)節(jié)到每厘米膜寬電流強(qiáng)度為（流調(diào)節(jié)到每厘米膜寬電流強(qiáng)度為（8 8片共片共8mA8mA），電），電泳時(shí)間約泳時(shí)間約50-80min50-80min。電泳后調(diào)節(jié)旋扭使電流為零，。電泳后調(diào)節(jié)旋扭使電流為零，關(guān)閉電泳儀切斷電源。關(guān)閉電泳儀切斷電源。第12頁/共33頁 圖圖3-7 3-7 電泳裝

13、置剖視示意圖電泳裝置剖視示意圖 1.1.紙橋紙橋 2.2.電泳槽電泳槽 3.3.醋酸纖維素薄膜醋酸纖維素薄膜 4.4.電泳槽膜支架電泳槽膜支架 5.5.電極室中央隔板電極室中央隔板第13頁/共33頁4 4、染色與漂洗（血清蛋白染色與漂洗脫色）、染色與漂洗（血清蛋白染色與漂洗脫色）用解剖鑷子取出電泳后的薄膜，放在含用解剖鑷子取出電泳后的薄膜，放在含0.5%0.5%氨氨基黑基黑10B10B染色液的培養(yǎng)皿中，浸染染色液的培養(yǎng)皿中，浸染5min5min，取出，取出后再用漂洗液浸洗脫色，每隔后再用漂洗液浸洗脫色，每隔10min10min 換漂洗液換漂洗液一次，連續(xù)數(shù)次，直至背景藍(lán)色脫盡。一次，連續(xù)數(shù)次，

14、直至背景藍(lán)色脫盡。取出薄膜放在濾紙上，用吹風(fēng)機(jī)的冷風(fēng)將薄膜取出薄膜放在濾紙上，用吹風(fēng)機(jī)的冷風(fēng)將薄膜吹干。吹干。第14頁/共33頁圖圖 3-8 3-8 血清蛋白與脂蛋白醋酸纖維素薄膜電泳血清蛋白與脂蛋白醋酸纖維素薄膜電泳圖譜比較示意圖圖譜比較示意圖a.a.蛋白染色蛋白染色 b.b.脂蛋白染色脂蛋白染色第15頁/共33頁6 6、結(jié)果判斷與定量、結(jié)果判斷與定量一般血清蛋白電泳經(jīng)蛋白染色后，可顯示一般血清蛋白電泳經(jīng)蛋白染色后，可顯示5 5條條區(qū)帶，其排列順序見圖區(qū)帶，其排列順序見圖3-8a3-8a，未經(jīng)透明處理的，未經(jīng)透明處理的電泳圖譜可直接用于定量測定。電泳圖譜可直接用于定量測定?？刹捎孟疵摲ɑ蚬馕?/p>

15、收掃描法，測定各蛋白組可采用洗脫法或光吸收掃描法，測定各蛋白組分相對百分含量。分相對百分含量。第16頁/共33頁 本實(shí)驗(yàn)不要求進(jìn)行定量分析，如有需要，可采用薄層掃本實(shí)驗(yàn)不要求進(jìn)行定量分析，如有需要，可采用薄層掃描儀進(jìn)行掃描定量，或采用洗脫后再進(jìn)行比色的方法進(jìn)描儀進(jìn)行掃描定量，或采用洗脫后再進(jìn)行比色的方法進(jìn)行定量。下面為后者的具體操作步驟：行定量。下面為后者的具體操作步驟： 取試管取試管6 6支，編好號碼，分別用吸管取支，編好號碼，分別用吸管取0.4N0.4N氫氧化氫氧化鈉鈉4ml4ml，剪開薄膜上各條蛋白色帶，另于空白部位剪一，剪開薄膜上各條蛋白色帶，另于空白部位剪一平均大小的薄膜條，將各條分

16、別浸于上述試管內(nèi)，不時(shí)平均大小的薄膜條，將各條分別浸于上述試管內(nèi)，不時(shí)搖動，使藍(lán)色洗出。約半小時(shí)后，用分光光度計(jì)進(jìn)行比搖動，使藍(lán)色洗出。約半小時(shí)后，用分光光度計(jì)進(jìn)行比色，波長用色，波長用650nm650nm，以空白薄膜條洗出液為空白對照，以空白薄膜條洗出液為空白對照，讀取白蛋白讀取白蛋白A A、11、22、球蛋白各管的光密度球蛋白各管的光密度。 第17頁/共33頁光密度總和光密度總和T TA+A+1 12 2各部分蛋白質(zhì)的分?jǐn)?shù)為：各部分蛋白質(zhì)的分?jǐn)?shù)為： A A（清蛋白）（清蛋白）% = A / T% = A / T100100 1 1- -球蛋白球蛋白 % = % = 1 1 / T / T1

17、00100 2 2- -球蛋白球蛋白 % =% =2 2 / T/ T100100 - -球蛋白球蛋白 % = % = / T / T100100 - -球蛋白球蛋白 % =% = / T / T100100附：遷移率是膠體顆粒的一個(gè)物理常數(shù)，可用來鑒定蛋白質(zhì)附：遷移率是膠體顆粒的一個(gè)物理常數(shù)，可用來鑒定蛋白質(zhì)等物質(zhì)以及研究它們的某些理化性質(zhì)現(xiàn)將人血漿蛋白等物質(zhì)以及研究它們的某些理化性質(zhì)現(xiàn)將人血漿蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)，遷移率等列于下表，供分析參考。質(zhì)的等電點(diǎn)，遷移率等列于下表，供分析參考。第18頁/共33頁蛋白質(zhì)名稱蛋白質(zhì)名稱等電點(diǎn)等電點(diǎn)泳動脈泳動脈/(cm/(cm2 2V V-1-1S S-1-1

18、) ) 分子量分子量清蛋白清蛋白4.884.88-5.9-5.910-510-569000690001-1-球蛋白球蛋白 5.065.06-5.1-5.110-510-52000002000002-2-球蛋白球蛋白5.065.06-4.1-4.110-510-5300000300000-球蛋白球蛋白5.125.12-2.8-2.810-510-59000-1500009000-150000-球蛋白球蛋白6.85-7.506.85-7.50 -1.0-1.010-510-5156000-300000156000-300000纖維蛋白元纖維蛋白元5.405.40-3.1-3.110-510-5 正

19、常值：白蛋白正常值：白蛋白575772% 72% 1 1球蛋白球蛋白2 25 5 2 2球蛋白球蛋白4 49 9 球蛋白球蛋白6.56.51212 球蛋白球蛋白12122020表表3-12 3-12 人血漿蛋白質(zhì)的等電及遷移率人血漿蛋白質(zhì)的等電及遷移率第19頁/共33頁 備注：備注：醋酸纖維薄膜電泳分析血清蛋白的正常結(jié)果不同于紙醋酸纖維薄膜電泳分析血清蛋白的正常結(jié)果不同于紙上電泳，主要是白蛋白偏高，個(gè)別正常人白蛋白僅超上電泳，主要是白蛋白偏高，個(gè)別正常人白蛋白僅超過過7070。-，-，和，和，都偏低，個(gè)別正常人都偏低，個(gè)別正常人球蛋臼可低到球蛋臼可低到1212左右。上述正常值僅供參考。左右。上

20、述正常值僅供參考。經(jīng)電泳，染色之干燥膜浸于冰醋酸：經(jīng)電泳，染色之干燥膜浸于冰醋酸：9595乙醇（乙醇（2:82:8）溶液中溶液中2020分鐘，取出后將薄膜平貼于玻璃板上。干燥分鐘，取出后將薄膜平貼于玻璃板上。干燥過程中，薄膜漸變透明。此透明薄膜可用掃描光密度過程中，薄膜漸變透明。此透明薄膜可用掃描光密度計(jì)繪出電泳曲線，并可根據(jù)曲線的面積計(jì)算各組分的計(jì)繪出電泳曲線，并可根據(jù)曲線的面積計(jì)算各組分的百分?jǐn)?shù)。目前國內(nèi)已有自動定量的光密度計(jì)生產(chǎn)。此百分?jǐn)?shù)。目前國內(nèi)已有自動定量的光密度計(jì)生產(chǎn)。此透明薄膜可長期保存，供教學(xué)示教用。透明薄膜可長期保存，供教學(xué)示教用。第20頁/共33頁【 注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)】 醋

21、酸纖維素薄膜的預(yù)處理醋酸纖維素薄膜的預(yù)處理薄膜的浸潤與選膜是電泳成敗的重要關(guān)鍵之一。將干膜片薄膜的浸潤與選膜是電泳成敗的重要關(guān)鍵之一。將干膜片漂浮于電極緩沖液表面，其目的是選擇膜片厚薄及均勻度漂浮于電極緩沖液表面，其目的是選擇膜片厚薄及均勻度，如漂浮，如漂浮15-30s15-30s時(shí)，膜片吸水不均勻，則有白色斑點(diǎn)或條時(shí)，膜片吸水不均勻，則有白色斑點(diǎn)或條紋，這提示膜片厚薄不均，應(yīng)棄去不用，以免造成電泳后紋，這提示膜片厚薄不均，應(yīng)棄去不用，以免造成電泳后區(qū)帶扭曲，界線不清，背景脫色困難，結(jié)果難以重復(fù)。區(qū)帶扭曲，界線不清，背景脫色困難，結(jié)果難以重復(fù)。點(diǎn)樣時(shí)，應(yīng)將膜片表面多余的緩沖液用濾紙吸去，以免緩

22、點(diǎn)樣時(shí)，應(yīng)將膜片表面多余的緩沖液用濾紙吸去，以免緩沖液太多引起樣品擴(kuò)散。但也不能吸得太干，太干則樣品沖液太多引起樣品擴(kuò)散。但也不能吸得太干，太干則樣品不易進(jìn)入薄膜的網(wǎng)孔內(nèi)，而造成電泳起始點(diǎn)參差不齊，影不易進(jìn)入薄膜的網(wǎng)孔內(nèi)，而造成電泳起始點(diǎn)參差不齊，影響分離效果。吸水量以不干不濕為宜。為防止指紋污染，響分離效果。吸水量以不干不濕為宜。為防止指紋污染，取膜時(shí)，應(yīng)戴指套或用夾子。取膜時(shí)，應(yīng)戴指套或用夾子。第21頁/共33頁 緩沖液的選擇緩沖液的選擇醋酸纖維素薄膜電泳常選用巴比妥緩沖液，其濃度為。醋酸纖維素薄膜電泳常選用巴比妥緩沖液，其濃度為。選擇何種濃度與樣品及薄膜的厚薄有關(guān)。在選擇時(shí)，先選擇何種濃

23、度與樣品及薄膜的厚薄有關(guān)。在選擇時(shí)，先初步定下某一濃度，如電泳槽兩極之間的膜長度為初步定下某一濃度，如電泳槽兩極之間的膜長度為8-8-10cm10cm，則需電壓，則需電壓25V/cm25V/cm膜長，電流強(qiáng)度為膜寬。膜長，電流強(qiáng)度為膜寬。當(dāng)電泳時(shí)達(dá)不到或超過這個(gè)值時(shí)，則應(yīng)增加緩沖液濃度當(dāng)電泳時(shí)達(dá)不到或超過這個(gè)值時(shí)，則應(yīng)增加緩沖液濃度或進(jìn)行稀釋。緩沖液濃度過低，則區(qū)帶泳動速度快，并或進(jìn)行稀釋。緩沖液濃度過低，則區(qū)帶泳動速度快，并由于擴(kuò)散變寬；緩沖液濃度過高，則區(qū)帶泳動速度慢，由于擴(kuò)散變寬；緩沖液濃度過高，則區(qū)帶泳動速度慢，區(qū)帶分布過于集中，不易分辨。區(qū)帶分布過于集中，不易分辨。第22頁/共33頁

24、 加樣量加樣量加樣品量的多少與電泳條件、樣品的性質(zhì)、染色方法與加樣品量的多少與電泳條件、樣品的性質(zhì)、染色方法與檢測手段靈敏度密切相關(guān)。作為一般原則，檢測方法越檢測手段靈敏度密切相關(guān)。作為一般原則，檢測方法越靈敏，加樣量則越少，對分離更有利。如加樣量過大，靈敏，加樣量則越少，對分離更有利。如加樣量過大，則電泳后區(qū)帶分離不清楚，甚至互相干擾，染色也較費(fèi)則電泳后區(qū)帶分離不清楚，甚至互相干擾，染色也較費(fèi)時(shí)。時(shí)。 如電泳后用洗脫法定量時(shí)，每厘米加樣線上需加樣品，如電泳后用洗脫法定量時(shí)，每厘米加樣線上需加樣品，相當(dāng)于相當(dāng)于5-1000g5-1000g的蛋白，血清蛋白常規(guī)電泳分離時(shí)，每的蛋白，血清蛋白常規(guī)電

25、泳分離時(shí)，每厘米加樣線加樣量不超過厘米加樣線加樣量不超過1L1L，相當(dāng)于，相當(dāng)于6080g6080g的蛋白的蛋白質(zhì)。但糖蛋白和脂蛋白電泳時(shí)，加樣量則應(yīng)多些。對每質(zhì)。但糖蛋白和脂蛋白電泳時(shí)，加樣量則應(yīng)多些。對每種樣品加樣量均應(yīng)先作預(yù)實(shí)驗(yàn)加以選擇。種樣品加樣量均應(yīng)先作預(yù)實(shí)驗(yàn)加以選擇。點(diǎn)樣好壞是獲得理想圖譜的重要環(huán)節(jié)之一，以印章法加點(diǎn)樣好壞是獲得理想圖譜的重要環(huán)節(jié)之一，以印章法加樣時(shí)，動作應(yīng)輕、穩(wěn)，用力不能太重，以免將薄膜弄破樣時(shí)，動作應(yīng)輕、穩(wěn)，用力不能太重，以免將薄膜弄破或印出凹陷而影響電泳區(qū)帶分離效果。或印出凹陷而影響電泳區(qū)帶分離效果。第23頁/共33頁 電量的選擇電量的選擇電泳過程應(yīng)選擇合適的電流強(qiáng)度，一般電流強(qiáng)電泳過程應(yīng)選擇合適的電流強(qiáng)度，一般電流強(qiáng)度為寬膜為宜。度為寬