1、1 醫(yī)院感染監(jiān)測相關1.1空氣培養(yǎng)檢測標準操作程序臨床意義：醫(yī)院是病原微生物聚集的場所，患者和病原攜帶者體內的微生物能以多種形式排出體外污染周圍環(huán)境，如不及時將其殺滅，可能導致醫(yī)院感染的發(fā)生，對其他患者甚至醫(yī)護人員造成危害。手術室空氣中細菌可能直接沉降到傷口上，或沉降到醫(yī)務人員的手和器械上，能引起傷口感染。監(jiān)護病房中病人抵抗力極差，易發(fā)生呼吸道和其他部位感染，定期監(jiān)測可及時發(fā)現消毒和通風系統存在的問題。原理：用9 直徑普通營養(yǎng)瓊脂平板在采樣點暴露5min 后送檢。置于37培養(yǎng)箱孵育，按照相應公式計數菌落總數（N）。采樣原則：1. 采樣時間：選擇消毒處理后與進行醫(yī)療活動之前期間采樣。2. 采樣高

2、度：與地面垂直高度80150cm。3. 布點方法：室內面積30 ，設一條對角線上取3 點，即中心一點、兩端各距墻1m處各取一點；室內面積>30m2，設東、西、南、北、中各5 點，各個點均距墻1m。4. 采樣方法：用9 直徑普通營養(yǎng)瓊脂平板在采樣點暴露5min 后送檢培養(yǎng)。檢查原則：采樣后必須盡快對樣品進行相應指標的檢測，送檢時間不得超過6h，若樣品保存于04條件時，送檢時間不得超過24 小時。菌落總數計算：空氣細菌菌落總數（cfu/m3）50000×N/AT式中：A-平板面積，cm2；T-平板暴露時間，min;N-平均菌落數，cfu/m3規(guī)定使用9cm 平板，暴露5min，所以

3、經換算，公式簡化為：空氣細菌菌落總數（cfu/m3）157.25×N報告結果和解釋：1. 有細菌生長：參照菌落總數計算公式進行計算。2. 無細菌生長：置于35溫箱繼續(xù)孵育24 小時后再觀察結果。3. 若培養(yǎng)48h 后仍無細菌生長，報告：無菌生長。注意事項：不得檢出乙型溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌及其他致病性微生物。1. 溶血性鏈球菌檢查：參照細菌鑒定的標準操作程序執(zhí)行。2. 沙門氏菌檢查：參照細菌鑒定的標準操作程序執(zhí)行。3. 銅綠假單胞菌檢查：參照細菌鑒定的標準操作程序執(zhí)行。4. 金黃色葡萄球菌檢查：參照細菌鑒定的標準操作程序執(zhí)行。各類環(huán)境下空氣培養(yǎng)衛(wèi)生標準：環(huán)境類別范圍空氣標準（c

4、fu/m3）I 類層流潔凈手術室、層流潔凈病房-10不得檢出金黃色葡萄球菌和溶血性鏈球菌II 類普通手術室、禪房、嬰兒室、早產兒室、普通保護性隔離室、供應室無菌區(qū)、燒傷病房、重癥監(jiān)護病房-200不得檢出金黃色葡萄球菌和溶血性鏈球菌III 類兒科病房、婦產科檢查室、注射室、換藥室、治療室、供應室清潔區(qū)、急診室、化驗室、各類普通病房和房間-500不得檢出金黃色葡萄球菌和溶血性鏈球菌1.2物體表面采樣及檢測標準操作程序臨床意義：醫(yī)院感染的主要對象是住院病人和醫(yī)院職工。住院病人抵抗力差，更易感染。醫(yī)院感染的監(jiān)測是預防醫(yī)院感染的前提，只有進行了深入細致的監(jiān)測，發(fā)現各個科室存在的問題才能有針對性和有效的防

5、治醫(yī)院感染。在某些情況下，物體表面作為傳播媒介和儲源，引起醫(yī)院感染的危險是存在的。因此，有目的和有選擇的對物體表面采樣進行培養(yǎng)很有必要。目的：1. 通過定性和定量檢查，了解物體表面的細菌污染情況。2. 評價物體表面的清潔和消毒結果標本采集要求：1. 采集時間：選擇消毒處理后的4h 內進行采樣。2. 采集面積：被采表面<100cm2, 取全部表面。被采表面100cm2，取100cm2。3. 采集方法：用浸有無菌生理鹽水采樣液的棉拭子1 支在物體表面來回涂抹，若被采表面<100cm2，取全部表面；若被采表面100cm2，取100cm2。1) 未用消毒劑的物體表面采集的標本接種在裝有5m

6、l 無菌生理鹽水的試管內送檢。2) 已使用消毒劑物體表面采集的標本接種在5ml 0.1%硫代硫酸鈉肉湯的試管內送檢。檢測步驟：從5ml 送檢標本中無菌條件下吸取100l 液體平鋪于血平板上，用接種環(huán)均勻劃線后置于35孵箱中培養(yǎng)2448h 后計數平板上菌落總數（N）。結果計算及解釋：物體表面細菌菌落總數（cfu/cm2）= 平皿上菌落總數（N）×采樣液稀釋倍數/采樣面積；經換算后，物體表面細菌菌落總數（cfu/cm2）=N×2。如在平板上發(fā)現致病菌（如：溶血性鏈球菌、沙門菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌），有明顯溶血的菌落或氧化酶陽性（+）菌落，或院內發(fā)生感染則要求作細菌鑒定

7、。細菌鑒定參見細菌鑒定操作規(guī)則。附：各類環(huán)境下物體表面衛(wèi)生標準環(huán)境類別范圍物體表面標準（cfu/cm2）I 類層流潔凈手術室、層流潔凈病房5II 類普通手術室、禪房、嬰兒室、早產兒室、普通保護性隔離室、供應室無菌區(qū)、燒傷病房、重癥監(jiān)護病房5III 類兒科病房、婦產科檢查室、注射室、換藥室、治療室、供應室清潔區(qū)、急診室、化驗室、各類普通病房和房間10IV 類傳染病科及病房151.3醫(yī)務人員手采樣及檢測標準操作程序臨床意義：醫(yī)務人員的手經常直接或間接地同污染物品或病人接觸，監(jiān)測手部細菌能了解手部細菌污染情況和評價手的清潔和消毒效果。目的：1. 通過定性和定量檢查，了解手部細菌污染情況。2. 評價手

8、的清潔和消毒效果。標本采集要求：1. 采樣時間：在接觸病人、從事醫(yī)療活動前進行采樣。2. 采樣操作：2.1 沒有用消毒液，清水沖洗的雙手：被檢人五指并攏，將浸有無菌生理鹽水采樣液的棉拭子一支在雙手指曲面從指根到指端來回涂擦各兩次（一只手涂擦面積約30cm2），并隨之轉動采樣棉拭子，剪去手接觸部位，將棉拭子放入裝有5ml 無菌生理鹽水管內送檢。2.2 用消毒液，并用清水沖洗干凈的雙手：被檢人五指并攏，將浸有無菌生理鹽水采樣液的棉拭子一支在雙手指曲面從指根到指端來回涂擦各兩次（一只手涂擦面積約30cm2），并隨之轉動采樣棉拭子，剪去手接觸部位，將棉拭子放入裝有5ml 無菌生理鹽水管內送檢。2.3

9、用消毒液，但沒有用清水沖洗干凈的雙手：被檢人五指并攏，將浸有無菌生理鹽水采樣液的棉拭子一支在雙手指曲面從指根到指端來回涂擦各兩次（一只手涂擦面積約30cm2），并隨之轉動采樣棉拭子，剪去手接觸部位，將棉拭子放入裝有5ml 含中和劑的肉湯管內送檢。操作步驟：從5ml 送檢標本中無菌條件下吸取25l 液體平鋪于血平板上，用接種環(huán)均勻劃線后置于35孵箱中培養(yǎng)2448h 后計數平板上菌落總數（N）結果計算及解釋：手細菌菌落總數（cfu/cm2）=平皿上菌落總數（N）×采樣液稀釋倍數/30×2經換算，公式簡化為：手細菌菌落總數（cfu/cm2）=N×3.33。如在平板上發(fā)現

10、致病菌（如：溶血性鏈球菌、沙門菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌），有明顯溶血的菌落或氧化酶陽性（+）菌落，或院內發(fā)生感染則要求作細菌鑒定。細菌鑒定參見細菌鑒定操作規(guī)則。各類環(huán)境下醫(yī)護人員手衛(wèi)生標準環(huán)境類別范圍手培養(yǎng)標準（cfu/cm2）I 類層流潔凈手術室、層流潔凈病房5II 類普通手術室、禪房、嬰兒室、早產兒室、普通保護性隔離室、供應室無菌區(qū)、燒傷病房、重癥監(jiān)護病房5III 類兒科病房、婦產科檢查室、注射室、換藥室、治療室、供應室清潔區(qū)、急診室、化驗室、各類普通病房和房間10IV 類傳染病科及病房11.4使用中消毒劑的微生物學監(jiān)測（1）采樣時間： 采取更換前使用中的消毒劑。（2）采樣量及方法

11、： 在無菌條件下，用無菌吸管吸取0.5ml被檢樣液，加入到4.5ml稀釋液中混勻。醇類和酚類消毒劑用普通營養(yǎng)肉湯作稀釋液。含氯消毒劑、含碘消毒劑、過氧化物消毒液需在檢驗地帶網肉湯內加入0.1%硫代硫酸鈉作稀釋液。季銨鹽類消毒液需在肉湯中加入3% Tween 80和0.3卵磷脂作稀釋液。含有表面活性劑的各種復方消毒劑需在肉湯中加入3Tween 80作稀釋液。（3）細菌菌落總數檢查：分別取200ul采樣液放入2只普通營養(yǎng)瓊脂滅菌平皿內，放37溫箱內培養(yǎng)48 h計數菌落。 平板上有菌生長，證明被檢樣液有殘存活菌，若每個平板菌落數在10個以下，仍可用于消毒處理（但不能用于滅菌）；若每個平板菌落數超過1

12、0個，說明每毫升被檢樣液含菌量已超過100個，不宜再用。（4）判斷標準：使用中消毒劑，細菌菌落總數10 cfu/ ml，病原微生物不得檢出；。1.5無菌物品縫合針、注射針頭、手術刀片、小棉球等小件醫(yī)療器械，用無菌方法各取3-5只盛入滅菌的培養(yǎng)瓶中，待檢。 無菌方法從無菌用具的不同部位如左上邊、中間、右下邊取23個盛入滅菌的培養(yǎng)瓶中，待檢。 敷料等較大塊的物品隨機用無菌方法采取23塊盛入較大滅菌的培養(yǎng)皿中，待檢。 （注射器隨機抽取23個連同包裝一起采集，待檢）。 各種包如：產包、胸穿包、骨穿包、導尿包等隨機抽取23個，待檢。1.6壓力蒸汽鍋滅菌效果監(jiān)測臨床意義：用于壓力蒸汽鍋（包括排氣鍋和預真空

13、鍋）滅菌效果的生物監(jiān)測。原理：培養(yǎng)指示劑由含菌紙片、培養(yǎng)基及塑料外殼組成，壓力蒸汽滅菌生物培養(yǎng)指示劑紙片上含嗜熱脂肪桿菌芽胞（ATCC 7953），選用標準抗力儀測試：121飽和蒸汽條件下，菌株存活時間5min，殺滅時間15min； 操作步驟：1. 壓力蒸汽滅菌生物培養(yǎng)指示劑1.1 將壓力蒸汽滅菌生物指示劑放于一標準測試包中；1.2 按照國家規(guī)范，分別將測試包放于鍋內不同位置，121，15 分鐘；1.3 滅菌完畢，取出該生物指示劑；1.4 擠破內含的安瓿，與一支對照管一起放于56培養(yǎng)鍋（棕色）內培養(yǎng)；1.5 培養(yǎng)48h 后，閱讀結果。注： 以上第1 至第3 步經各部門操作完成后，由各科護士負責送至微生物實驗室檢測。結果判斷：1. 壓力蒸汽滅菌生物培養(yǎng)指示劑培養(yǎng)后，