1、12（1）能夠在宿主細胞中存在并繁殖，有功能良好的復制子和啟動子，使插入基因復制和表達；（2）具有多個限制性內(nèi)切酶的切點，且切點是單一的，這樣可將多個外源DNA片段插入其中；（3）具有容易檢測的篩選標記；（4）載體DNA的分子量適當，可容納較大的外源DNA片段，又可在受體細胞內(nèi)擴增較多的拷貝；（5）在細胞內(nèi)穩(wěn)定性高，這樣可以使重組體可以穩(wěn)定傳代而不易丟失。 31. 克隆載體（cloning vector）：主要是對目的基因克隆，建立DNA文庫和cDNA文庫，其上有復制子即可；2. 表達載體（expression vector）：能使目的基因在宿主細胞中表達的一類載體。這類載體既有復制子，更要有

2、強啟動子；3. 穿梭載體（shuttle vector）：這類載體可以在原核細胞中復制，也可在真核細胞中擴增和表達。4567891011121314重要的大腸桿菌質(zhì)粒載體重要的大腸桿菌質(zhì)粒載體松弛型復制松弛型復制 pBR3224363 bpOrigin of ReplicationROPROISal IBamH ITcrPvu IPst IPst IEcoR ICla IHind IIIHind IIBal IAprpBR322： 氯霉素可擴增氯霉素可擴增拷貝數(shù)拷貝數(shù) 50 - 100 / cell用于基因克隆用于基因克隆 15pUC質(zhì)粒載體 (1)來自pBR322質(zhì)粒的復制起點(ori)；

3、(2)氨卞青霉素抗性基因(Ampr)，但它的DNA核苷酸序列已經(jīng)發(fā)生了變化，不再含有原來的限制酶的單識別位點； (3)大腸桿菌-半乳糖苷酶(lacZ)的啟動子及其編碼該基因氨基端-肽鏈的DNA序列,此結(jié)構(gòu)特稱為lacZ1基因； (4)多克隆位點(MCS)區(qū)段：位于lacZ 基因中的靠近5端，內(nèi)含十幾個單一的限制性內(nèi)切酶識別切割位點，使含有不同粘端的目的DNA片段可方便地定向插入載體中。但它并不破壞lacZ 基因的功能。pBR3224363 bpOrigin of ReplicationROPROISal IBamH ITcrPvu IPst IPst IEcoR ICla IHind IIIH

4、ind IIBal IApr16pUC18 pUC18 / 19/ 19： 拷貝數(shù)拷貝數(shù) 2000 - 3000 / 2000 - 3000 / cellcell用于基因克隆和測序用于基因克隆和測序 裝有多克隆位點（裝有多克隆位點（MCSMCS）正選擇顏色標記正選擇顏色標記 lacZlacZBamHIpUC182686 bpAprlacZoriGAATTCGAGCTCGGTACCCGGGGATCCTCTAGAGTCGACCTGCAGGCATGCAAGCTT396452EcoRISstIKpnISmaIXbaISalIPstISphIHindIII1718(2)表達載體19202122該載體具有

5、以下優(yōu)點：該載體具有以下優(yōu)點：可誘導，能高效表達所需基因或基因片段。IPTG可誘導tac啟動子進行高效表達。融合蛋白極易純化。GST分子量為25kDa，作為一種酶在大腸桿菌表達或與外源基因融合表達時，與自然界存在的酶具有相同的酶活性，用親和層析法(G1utathione Sepharose 4B)極易從裂解液中分離純化出融合蛋白，也可用顯色法或免疫學方法方便地檢測外源蛋白的表達量。可方便地從融合蛋白中獲取單一外源蛋白。23QIAexpress 6His表達系統(tǒng)n該系統(tǒng)為Ni-NTA基質(zhì)對帶6個組氨酸殘基的重組蛋白質(zhì)具有親和層析的高效原核表達系統(tǒng)，n優(yōu)點：6His比其它標記更小，可用于任何表達系

6、統(tǒng)，包括酵母、桿狀病毒和哺乳動物細胞表達系統(tǒng)，不影響蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能，無需蛋白酶把6His切除。生理pH條件下6His不帶電荷，所以不影響蛋白質(zhì)的分泌。因5His免疫原性差，所以無需去除6His, 重組蛋白可直接用作抗原產(chǎn)生所需抗體。2425GGGCGGCGACCTCCCGCCGCTGGATACG環(huán)化作用環(huán)化作用2627基因組分為幾個不連續(xù)的區(qū)域，三個片段組成：282930調(diào)節(jié)元件或調(diào)節(jié)基因產(chǎn)物及功能PL,OL, PR,OR左右向轉(zhuǎn)錄的啟動子和操縱子tR (1,2,3,4,5)右向轉(zhuǎn)錄的終止子tL(1,2)左向轉(zhuǎn)錄的終止子PRE C蛋白建立啟動子，受C蛋白調(diào)控PIint基因啟動子，受C蛋白調(diào)

7、控PaQQ蛋白反義RNA啟動子，受C蛋白調(diào)控PRMC蛋白基因維持啟動子，受C濃度調(diào)控PR晚期轉(zhuǎn)錄的啟動子nutnutL, , nutnutRN蛋白左右兩個反終止結(jié)合位點qutQ蛋白反終止結(jié)合位點croPL和PR的阻遏蛋白，并可阻遏PE，抑制 CI 表達cIPL 和PR 的主要的阻遏物，并可自主調(diào)控PRMc可以啟動PRE 、PI 和PAQ，使進入溶原化途徑31c和C組成復合物，啟動PE產(chǎn)生c及cro的反義RNANtR1, tR2及tL1的反終止蛋白QtR4的反終止蛋白. O, PDNA復制所需的蛋白S, R, R2裂解宿主所需的裂解酶int整合酶，使整合到宿主的染色體中xis切除酶，幫助在att

8、位點和宿主連接bet, exo重組蛋白，幫助和宿主進行重組W, B, N u3, C, D, E, F, F,Z頭部蛋白基因U, V, G, T, H, M, L, K, I, J尾部蛋白基因cos (cohesive)12bp的回文序列，由線狀連接成環(huán)狀的連接點，A蛋白切割位點A末端酶，識別cos位點，包裝時將環(huán)連體切成單個的基因組32 基因組太大（基因組太大（49kb）；）； 酶切點太多，它有酶切點太多，它有5個個BamH1位點（位點（GGATCC），），6個個Bg位點位點（AGATCT），），5個個EcoR位點（位點（GAATTC）。）。 野生型只能接納一定長度的野生型只能接納一定長度的

9、DNA。若相當于若相當于噬菌體的噬菌體的75-105%，那么只能接納那么只能接納49kb5%=2.45kb的的DNA。 切去非必須區(qū)段，在切去的同時，加載目的基因（切去非必須區(qū)段，在切去的同時，加載目的基因（2.5kb或更大）；或更大）； 去處太多的酶位點，每種酶只留去處太多的酶位點，每種酶只留1-2個切口；個切口； 增加標記基因（增加標記基因（remarke gene）。）。(4)(4) 引入無義突變引入無義突變噬菌體的缺陷：噬菌體的缺陷：33341.噬菌體載體的類型置換型載體：可被外源DNA置換的噬菌體非必需區(qū)兩側(cè)有一對限制性酶切位點的載體，稱為置換型載體。 插入型載體：有一類只含一個限制

10、性位點可供插入外源DNA的載體，這類噬菌體載體稱插入型載體。 35注意：噬菌載體作為載體，其重組噬菌體DNA大小只能： 38kb 52kb。體外包裝：噬菌載體 + 尾部蛋白 + 頭部蛋白 36371.1.粘粒的組成及性質(zhì)：粘粒的組成及性質(zhì)：n它的大小一般 5-7kb 左右，用來克隆大片段 DNA 克隆的最大 DNA 片段可達45kbn質(zhì)粒復制起點（colE1） 象質(zhì)粒一樣轉(zhuǎn)化和增殖n抗性標記amprn cos位點n有的粘粒載體含有兩個cos位點38pHC79pHC796400 6400 bpbpTcTcrl l fragment fragmentcoscosorioriApAprPstIPst

11、IBamHIBamHISalISalIl l-DNA -DNA coscos序列和序列和質(zhì)粒復制子的質(zhì)粒復制子的coscos site - carrying plasmid site - carrying plasmid 1.8 1.8 kbkb的的l l-DNA-DNA片段片段 + + pBR322pBR322片段片段 裝載范圍為裝載范圍為31 - 45 31 - 45 kbkb392.柯斯質(zhì)粒pHC79系403.柯斯質(zhì)粒有以下優(yōu)越性：41424.采用柯斯質(zhì)粒作載體的困難43四、M13 噬菌體載體n單鏈DNA噬菌體是一類絲狀的大腸桿菌噬菌體，由單鏈環(huán)狀DNA分子外面包裹上一層蛋白質(zhì)外殼而成。

12、nM13噬菌體是單鏈DNA噬菌體中的一個典型的代表。441.M13噬菌體的組成和結(jié)構(gòu)nM13噬菌體顆粒是絲狀的，只感染雄性大腸桿菌。感染宿主后不裂解宿主細胞，而是從感染的細胞中分泌出噬菌體顆粒，宿主細胞仍能繼續(xù)生長和分裂。45n單鏈DNA，由6407堿基組成。n90%以上的序列可編碼蛋白質(zhì)，共有11個編碼基因n基因之間的間隔區(qū)多為幾個堿基。較大的間隔位于基因和基因以及基因和基因之間，其間有調(diào)節(jié)基因表達和DNA合成的元件。2.M13噬菌體的基因組的基因組n編碼3類蛋白質(zhì)：復制蛋白（基因，和）形態(tài)發(fā)生蛋白（基因，和）結(jié)構(gòu)蛋白（基因、和）463. M13噬菌體載體的構(gòu)建 M13噬菌體作為載體具有幾個

13、重要的特點：M13噬菌體的感染與釋放不會殺死宿主菌，僅導致宿主菌生長緩慢；M13噬菌體DNA在宿主菌內(nèi)既可以是單鏈也可以是雙鏈，通過感染或轉(zhuǎn)化的方法能將M13噬菌體DNA導人宿主菌中；M13噬菌體的包裝不受DNA大小的限制，其噬菌體顆粒的大小可隨DNA的大小而改變，即使DNA的大小比本身DNA的大小超出6倍，仍能進行包裝。M13噬菌體在用作載體時是利用其雙鏈狀態(tài)的RF DNA：單鏈DNA的酶切和連接是比較困難的。外源片段插入位點在基因和基因之間的508bp間隔區(qū)-M13不像噬菌體基因組那樣含有較大的可替代區(qū)。它的基因組中絕大多數(shù)為必需基因，只有兩個間隔區(qū)可用來插入外源DNA（基因/和基因/之間

14、）。4748M13mp18 和 M13mp19n這兩個載體含有 13 個不同的酶切位點，可供插入由多種各不相同的限制酶切割而成的 DNA 片段，這兩種載體只是在 lacZ 區(qū)內(nèi)不對稱的多克隆區(qū)的方向上有所不同。n當RF DNA被兩種不同的限制酶切割以后， M13mp18 和 M13mp19 輕易不能重新環(huán)化。僅當連接混合液中含有帶匹配末端的外源雙鏈DNA片段時，方可閉合成環(huán)。49n這一片段在 M13mp18 和 M13mp19 中將以兩個互為相反的方向插入。這樣一來，在 M13mp18 的正鏈中含有外源 DNA 雙鏈的其中一條鏈，而在 M13mp19 正鏈中則含有外源 DNA 的另一條鏈，即

15、M13mp18 重組體的子代噬菌體內(nèi)含有外源 DNA 的一條鏈，M13mp19重組體的子代噬菌體內(nèi)則含有它的互補鏈。n故用 M13mp18 和 M13mp19 作為一對載體，就可能用一個引物（通用引物），從所插入 DNA 片段的任一端開始，測定互為相反的兩條鏈的 DNA 序列，并可制備只與外源DNA的任意一條鏈互補的DNA探針。50M13噬菌體產(chǎn)生單雙鏈DNA的機制：1、以（+）鏈DNA為摸板，合成互補（）鏈，該雙鏈稱復制型DNA（RFDNA）。2、RFDNA在宿主細胞內(nèi)能快速增殖，可增加到每個細胞約200個拷貝。3、單鏈特異的DNA結(jié)合蛋白結(jié)合在（+）鏈上，從而阻斷了其互補鏈，即（）鏈的合成

16、，這樣，細胞就會不斷的合成（+）鏈DNA 。4、游離出來的（+）鏈DNA先與基因V的編碼產(chǎn)物形成特異的DNA-蛋白質(zhì)復合物，然后轉(zhuǎn)移到寄主細胞膜，同時基因V的蛋白質(zhì)從（+）DNA鏈上脫落下來，余下的M13（+）鏈DNA則是從其感染的寄主細胞的細胞膜溢出的過程中，被外殼蛋白包裝成病毒顆粒的。 51病毒載體概述（病毒載體概述（1）要求：要求：1 1、攜帶外源基因并能包裝成感染性病毒顆粒、攜帶外源基因并能包裝成感染性病毒顆粒 2 2、介導外源基因轉(zhuǎn)移和表達、介導外源基因轉(zhuǎn)移和表達 3 3、對機體不致病、對機體不致病容量：容量：自身基因組大小的自身基因組大小的105%110105%110% 類型：類型

17、：1 1、重組型病毒載體、重組型病毒載體 2 2、無病毒基因的病毒載體、無病毒基因的病毒載體 復制缺陷型復制缺陷型 可復制型可復制型 復制缺陷型復制缺陷型組成：組成：1 1、病毒復制和包裝元件、病毒復制和包裝元件 2 2、病毒基因、病毒基因 3 3、插入的外源基因或元件、插入的外源基因或元件 4 4、病毒外殼、病毒外殼/ /外膜外膜 用途：基因轉(zhuǎn)移和表達用途：基因轉(zhuǎn)移和表達 1、基因治療、基因治療 2、疫苗、疫苗 3、器官移植、器官移植 4、組織工程、組織工程 5、轉(zhuǎn)基因動物、轉(zhuǎn)基因動物 6、基因功能研究、基因功能研究 五、病毒載體五、病毒載體52病毒載體概述（病毒載體概述（2）優(yōu)點：優(yōu)點：1

18、 1、利用病毒天然的感染性進入細胞，轉(zhuǎn)導效率高；、利用病毒天然的感染性進入細胞，轉(zhuǎn)導效率高； 2 2、復雜的裝配過程由細胞完成；、復雜的裝配過程由細胞完成； 3 3、不同的病毒載體具有不同的表達特點、不同的病毒載體具有不同的表達特點。存在的問題：存在的問題：1 1、安全性、安全性2 2、靶向性、靶向性3 3、有效性、有效性細胞毒性細胞毒性染色體毒性染色體毒性免疫毒性免疫毒性轉(zhuǎn)導靶向性轉(zhuǎn)導靶向性轉(zhuǎn)錄靶向性轉(zhuǎn)錄靶向性轉(zhuǎn)導效率轉(zhuǎn)導效率靶向性靶向性基因表達水平和持續(xù)時間基因表達水平和持續(xù)時間表達的可調(diào)控性表達的可調(diào)控性53病病 毒毒 載載 體體生生 物物 學學 特特 性性適適 用用 范范 圍圍反反 轉(zhuǎn)

19、轉(zhuǎn) 錄錄 病病 毒毒 載載 體體 單單 鏈鏈R N A 病病 毒毒 8 1 0 k b可可 感感 染染 分分 裂裂 細細 胞胞 ；整整 合合 到到 染染 色色 體體 中中 ；表表 達達 時時 間間 較較 長長 ；有有 致致 癌癌 的的 危危 險險 ；E x v iv o 基基 因因 治治 療療 ；腫腫 瘤瘤 基基 因因 治治 療療 。腺腺 病病 毒毒 載載 體體 雙雙 鏈鏈D N A 病病 毒毒 3 6 k b可可 感感 染染 分分 裂裂 和和 非非 分分 裂裂 細細 胞胞 ；不不 整整 合合 到到 染染 色色 體體 中中 ；外外 源源 基基 因因 表表 達達 水水 平平 高高 ；表表 達達

20、時時 間間 較較 短短 ；免免 疫疫 原原 性性 強強 ；In v iv o 基基 因因 治治 療療 ；腫腫 瘤瘤 基基 因因 治治 療療 ；疫疫 苗苗 。A AV 病病 毒毒 載載 體體 單單 鏈鏈D N A 病病 毒毒 5 k b可可 感感 染染 分分 裂裂 和和 非非 分分 裂裂 細細 胞胞 ；整整 合合 到到 染染 色色 體體 中中 ；無無 致致 病病 性性 ； 免免 疫疫 原原 性性 弱弱 ；可可 長長 期期 表表 達達 外外 源源 基基 因因 ；在在 骨骨 骼骼 肌肌 、 心心 肌肌 、 肝肝 臟臟 、 視視網(wǎng)網(wǎng) 膜膜 等等 組組 織織 中中 表表 達達 較較 高高 ；In v i

21、v o 基基因因治治療療 ；E x v iv o 基基 因因 治治 療療 ；遺遺 傳傳 病病 基基 因因 治治 療療 ；獲獲 得得 性性 慢慢 性性 疾疾 病病 的的基基 因因 治治 療療 。H S V 病病 毒毒 載載 體體 雙雙 鏈鏈D N A 病病 毒毒 1 5 2 k b具具 有有 嗜嗜 神神 經(jīng)經(jīng) 性性 ； 可可 逆逆 軸軸 突突 傳傳遞遞 ；可可 潛潛 伏伏 感感 染染 ；容容 量量 大大 ；可可 感感 染染 分分 裂裂 和和 非非 分分 裂裂 細細 胞胞 ；神神 經(jīng)經(jīng) 系系 統(tǒng)統(tǒng) 疾疾 病病 的的 基基因因 治治 療療 ；腫腫 瘤瘤 的的 基基 因因 治治 療療 。常用的病毒載體

22、的特點：常用的病毒載體的特點：54 Ti質(zhì)粒質(zhì)粒是一種細菌質(zhì)粒，它自然存在于土壤農(nóng)桿菌細胞是一種細菌質(zhì)粒，它自然存在于土壤農(nóng)桿菌細胞中。土壤農(nóng)桿菌可感染大多數(shù)雙子葉植物的受傷部位，使之中。土壤農(nóng)桿菌可感染大多數(shù)雙子葉植物的受傷部位，使之產(chǎn)生冠癭瘤產(chǎn)生冠癭瘤(grown gall tumors)。 致毒區(qū) Ti 質(zhì)粒復制起始點 冠癭堿代謝 酶編碼基因 與 Ti 質(zhì)粒轉(zhuǎn)移功能 有關的遺傳座位 冠癭堿合成基因 T-DNA 區(qū) 右邊界 生長素合成基因 細胞分裂素合成基因 左邊界 Ti 質(zhì)粒。質(zhì)粒。 Ti質(zhì)粒的一部分質(zhì)粒的一部分DNA叫做叫做轉(zhuǎn)移轉(zhuǎn)移DNA（T-DNA），當），當T-DNA整合到宿整合到

23、宿主植物細胞的染色體后，就主植物細胞的染色體后，就誘導出根瘤，并使根瘤細胞誘導出根瘤，并使根瘤細胞合成冠癭堿合成冠癭堿(opine),作為土壤作為土壤農(nóng)桿菌的碳源和氮源農(nóng)桿菌的碳源和氮源 。六、Ti質(zhì)粒55（1）T-DNA區(qū)（區(qū)（transferred-DNA regions） T-DNA是農(nóng)桿菌侵染植物細胞時，從是農(nóng)桿菌侵染植物細胞時，從Ti質(zhì)粒上導入質(zhì)粒上導入植物細胞的一段植物細胞的一段DNA。 T-DNA兩端各有一段兩端各有一段25bp的重復序列的重復序列(LB, RB)。 T-DNA攜帶的致瘤基因是一些與激素合成有關的基因，由于激素攜帶的致瘤基因是一些與激素合成有關的基因，由于激素合成

24、基因使細胞處于不停的分裂狀態(tài)，形成冠癭瘤，不能合成基因使細胞處于不停的分裂狀態(tài)，形成冠癭瘤，不能進行細胞分化。進行細胞分化。Ti質(zhì)粒改造后才能應用于植物的基因工程。質(zhì)粒改造后才能應用于植物的基因工程。 保留保留T-DNA兩端的末端序列，然后用外源兩端的末端序列，然后用外源DNA插入或直接取代野生型插入或直接取代野生型T-DNA的部分基因，使轉(zhuǎn)化的植物細胞不具有成瘤能力。的部分基因，使轉(zhuǎn)化的植物細胞不具有成瘤能力。56（2）Vir區(qū)（區(qū)（virolence region）Vir區(qū)段上的基因與區(qū)段上的基因與T-DNA從細菌轉(zhuǎn)移到植物細胞的遺傳過程從細菌轉(zhuǎn)移到植物細胞的遺傳過程有關，區(qū)段上的基因能夠

25、使農(nóng)桿菌表現(xiàn)出毒性，故稱之為毒有關，區(qū)段上的基因能夠使農(nóng)桿菌表現(xiàn)出毒性，故稱之為毒性區(qū)性區(qū)。Vir區(qū)段總長度大約區(qū)段總長度大約35kb，由，由7個互補群組成，分別命個互補群組成，分別命名為名為VirA、VirB、VirC、VirD、VirE、VirG和和VirH。（3）Con區(qū)區(qū)(regions encoding conjugations) 該區(qū)段上存在著與細菌間接合轉(zhuǎn)移的有關基因（該區(qū)段上存在著與細菌間接合轉(zhuǎn)移的有關基因（tratra），），調(diào)控調(diào)控TiTi質(zhì)粒在農(nóng)桿菌之間的轉(zhuǎn)移。質(zhì)粒在農(nóng)桿菌之間的轉(zhuǎn)移。 （4）Ori區(qū)區(qū)(origin of replication) 該區(qū)段基因調(diào)控該區(qū)段基

26、因調(diào)控TiTi質(zhì)粒的自我復制，故稱之為質(zhì)粒的自我復制，故稱之為復制起始區(qū)復制起始區(qū)。57（1）雙元載體系統(tǒng)（）雙元載體系統(tǒng)（binary vector）具有兩個質(zhì)粒具有兩個質(zhì)粒穿梭質(zhì)粒和穿梭質(zhì)粒和Ti質(zhì)粒。質(zhì)粒。（2）共整合載體（）共整合載體（integrated vector）共整合載體系統(tǒng)包括在共整合載體系統(tǒng)包括在T-DNA上的激素合成區(qū)經(jīng)上的激素合成區(qū)經(jīng)過突變后的過突變后的Ti質(zhì)粒和中間載體兩部分。質(zhì)粒和中間載體兩部分。Ti質(zhì)粒的衍生載體質(zhì)粒的衍生載體58七、七、酵母人工染色體載體酵母人工染色體載體 （yeast artificial chromosome, YACyeast artif

27、icial chromosome, YAC） 八、細菌人工染色體八、細菌人工染色體 （bacterial artificial chromosome, BACbacterial artificial chromosome, BAC） 動物病毒動物病毒DNADNA改造的載體改造的載體（如腺病毒、腺病毒相關病毒、（如腺病毒、腺病毒相關病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒）逆轉(zhuǎn)錄病毒）59 人基因組十分龐大，約含人基因組十分龐大，約含4 410109 9bpbp，建立建立和篩選人的基因組文庫，要求有容量更大的和篩選人的基因組文庫，要求有容量更大的載體，酵母人工染色體（載體，酵母人工染色體（yeast artificia

28、l yeast artificial chromosome,YACchromosome,YAC）載體應運而生。載體應運而生。YACYAC含含有酵母染色體端粒（有酵母染色體端粒（telesometelesome）、）、著絲點著絲點( (centromerecentromere) )及復制起點等功能序列，可插及復制起點等功能序列，可插入長度達入長度達200-500kb200-500kb的外源的外源DNADNA，導入酵母導入酵母細胞可以隨細胞分裂周期復制繁殖供作克隆細胞可以隨細胞分裂周期復制繁殖供作克隆，成為人基因組研究計劃的重要，成為人基因組研究計劃的重要60正常酵母人工染色體含有：正常酵母人工染

29、色體含有：* 四膜蟲端粒（四膜蟲端粒（tel)* 酵母自主復制序列（酵母自主復制序列（ARS)* 酵母著絲點酵母著絲點 (CEN)酵母的選擇標記酵母的選擇標記 (TRP1、 URA1)YAC載體載體61BAC載體載體62Structure of a bacterial artificial chromosome (BAC), used for cloning large fragments of donor DNA. CMR is a selectable marker for chloramphenicol resistance. oriS, repE, parA, and parB are

30、 F genes for replication and regulation of copy number. cosN is the cos site from l phage. HindIII and BamHI are cloning sites at which foreign DNA is inserted. The two promoters are for transcribing the inserted fragment. The NotI sites are used for cutting out the inserted fragment.6364PAC載體載體65四種

31、常用載體的比較* * 外源外源DNADNA如超過如超過10kb10kb，則重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化率和則重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化率和DNADNA得率都非常低得率都非常低* * * 已有個別材料可用于此目的已有個別材料可用于此目的66 質(zhì)粒和噬菌體載體只能在細菌中繁殖，不能滿足真核質(zhì)粒和噬菌體載體只能在細菌中繁殖，不能滿足真核DNADNA重組需要。感染動物的病毒可改造用作動物細胞的載體。重組需要。感染動物的病毒可改造用作動物細胞的載體。由于動物細胞的培養(yǎng)和操作較復雜、花費也較多，因而病毒由于動物細胞的培養(yǎng)和操作較復雜、花費也較多，因而病毒載體構(gòu)建時一般都把細菌質(zhì)粒復制起始序列放置其中。使載載體構(gòu)建時一般都把細菌質(zhì)粒復制起始序列放置其中。使載體及其攜帶的外來序列能方便地在細菌中繁殖和克隆，然后體及其攜帶的外來序列能方便地在細菌中繁殖和克隆，然后再引入真核細胞。目前病毒載體常用者有改造來自猴腎病毒再引入真核細胞。目前病毒載體常用者有改造來自猴腎病毒SV40SV40（Simian Virus 40Simian Virus 40）、）、逆轉(zhuǎn)錄病毒和昆蟲桿狀病毒等，逆轉(zhuǎn)錄