1、一、常用貯液與溶液（一）常用緩沖液1磷酸緩沖液（ 1） 25下 0.1mol/L 磷酸鉀緩沖液的配制pH1mol/L K 2HPO4(mL)1mol/L KH 2PO4(mL)5.88.591.56.013.286.86.219.280.86.427.872.26.638.161.96.849.750.37.061.538.57.271.728.37.480.219.87.686.613.47.890.89.28.094.06.2（ 2） 25下 0.1mol/L 磷酸鈉緩沖液的配制pH1mol/L Na 2HPO4(mL)1mol/L NaH 2PO4(mL)5.87.992.16.012.

2、088.06.217.882.26.425.574.56.635.264.86.846.353.77.057.742.37.268.431.67.477.422.67.684.515.57.889.610.48.093.26.8 :用蒸餾水將混合的兩種1mol/L 貯存液稀釋至1000mL ，根據(jù) Henderson-Hasselbalch 方程計(jì)算其 pH值：pH=pK +1g(質(zhì)子受體 / 質(zhì)子供體 )在此， pK=6.86(25 )。2電泳緩沖液常用的電泳緩沖液緩沖液使用液濃貯存液（每升）Tris- 乙酸（ TAE ）1×：0.04mol/L Tris- 乙酸50×：

3、 242g Tris 堿0.001mol/L EDTA57.1mL 冰乙酸100mL 0.5mol/L EDTA(pH8.0)Tris- 磷酸（ TPE）1×:0.09mol/L Tris- 磷酸10×:10g Tris 堿0.002mol/L EDTA15.5mL85% 磷酸（ 1.679g/mL ）40mL 0.5mol/L EDTA(pH8.0)Tris- 硼酸（ TBE ）a0.5 ×0.045mol/L Tris- 硼酸5×： 54g Tris 堿0.001mol/L EDTA27.5 硼酸堿性緩沖液Tris- 甘氨酸說明：bc20mL 0.5

4、mol/L EDTA(pH8.0)1×:50mmol/L NaOH1×:5mL 10mol/L NaOH1mmol/L EDTA2mL 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)1×:25mmol/L Tris5×:15.1g Tris250mmol/L甘氨酸94g 苷氨酸（電泳級(jí)）（pH8.3 ）0.1% SDS50mL 10% SDS( 電泳級(jí) ) TBE 溶液長時(shí)間存放后會(huì)形成沉淀物，為避免這一問題，可在室溫下用玻璃瓶保存5×溶液，出現(xiàn)沉淀后則予以廢棄。以片都以1×TBE 作為使用液（即1：5 稀釋濃貯液）進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳。但

5、0.5 ×的使用液已具備足夠的緩沖容量。目前幾乎所有的瓊脂糖膠電泳都以1： 10 稀釋的貯存液作為使用液。進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠垂直槽的緩沖液槽較小，故通過緩沖液的電流量通常較大，需要使用1×TBE以提供足夠的緩沖容量。堿性電泳緩沖液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配。 Tris- 甘氨酸緩沖液用SDS 聚丙烯酰胺凝膠電泳。3凝膠加樣緩沖液緩沖液類型6×緩沖液貯存溫度0.25%溴酚藍(lán)0.25%二甲苯青 FF440% （W/V ）蔗糖水溶液0.25 溴酚藍(lán)0.25%二甲苯青 FF室溫15% 聚蔗糖 (Ficoll400)0.25%溴酚藍(lán)二甲苯青40.25%FF30% 甘油水溶液0.25%溴酚藍(lán)

6、440%(W/V) 蔗糖水溶液堿性加樣緩沖液 :300mmol/L NaOH6mmol/L EDTA18% 聚蔗糖 (Ficoll400)0.15%溴甲酚綠40.25%二甲苯青 FF使用以上凝膠加樣緩沖液的目的有三：增大樣品密度； 以確保 DNA 均勻進(jìn)入樣品孔內(nèi)；使樣品呈現(xiàn)顏色，從而使加樣操作更為便利，含有在電塊中能以可預(yù)知速率向陽極泳動(dòng)的染料。溴酚藍(lán)在瓊脂糖中移動(dòng)的速率約為二甲苯青FF 的 2.2 倍，而與瓊脂糖濃度無關(guān)。以0.5 ×TBF 作電泳液時(shí)，溴酚藍(lán)在瓊脂糖中的泳動(dòng)速率約與長300bp 的雙鏈線狀 DNA 相同，而二甲苯青 FF 的泳動(dòng)則與長4kb 的雙鏈線狀 DNA

7、相同。在瓊脂糖濃度為0.5% 1.4%的范圍內(nèi)，這些對應(yīng)關(guān)系受凝膠濃度變化的影響并不顯著。選用哪一種加樣染料純屬個(gè)人喜惡。但是，對于堿性凝膠應(yīng)當(dāng)使用溴甲酚綠作為示蹤染料，因?yàn)樵趬A性 pH 條件下其顯色較溴酚更藍(lán)為鮮明。4各種 pH 值的 Tris 緩沖液的配制各種 pH 值的 Tris 緩沖液的配制所需 pH 值（ 25）0.1mol/L HCl 的體積7 145 77 244 77 343 47 442 07 540 37 63857 736 67 834 57 932 08 029 28.126.28.222.98.319.98.417.28.514.78.612.48.710.38.88

8、.58.97.0某一特定 pH 值的 0.05mol/L Tris 緩沖液的配制：將 50mL 0.1mol/L Tris 堿溶液與上表所示相應(yīng)體積（單位： mL ）的 0.1mL/L HCl 混合，加水將體積調(diào)至 100mL（二）常用酶的配制1溶菌酶用水配制成50mg/mL 的溶菌酶溶液，分裝成小份并保存于-20。每一小份一經(jīng)使用后便予丟棄。2蛋白水解酶類貯存液貯存溫度反應(yīng)濃度反應(yīng)緩沖液溫度預(yù)處理0.01mol/LTris(pH7.8)鏈霉蛋20mg/mL-20（溶1mg/mL0.01mol/L EDTA37自消化 b白酶 a于水）0.5% SDS0.01mol/LTris(pH7.8)蛋白

9、酶20mg/mL-20（溶50 g/mL37無須預(yù)處K c于水）0.005mol/L EDTA理560.5% SDSa：鏈霉蛋白酶是從鏈球菌（Streptomyces griseus）中分離到的一種絲氨酸酶和酸性蛋白酶的混合物。b：自消化可消除 DNA 酶和 RNA 酶的污染，經(jīng)自消化的鏈酶蛋白酶的配制方法如下：把該酶的粉末溶解于 10mmol./L Tris·HCl(pH7.5) 、10mmol/L NaCl中，配成 20mg/mL 濃度，于 37溫育 1h。經(jīng)消化的鏈霉蛋白酶分裝成小份放在密封試管中，保存-20。c：蛋白酶 K 是一種枯草蛋白酶類的高活性蛋白酶，從林伯氏白色念球菌

10、 （ Tritirachium album Limber）中純化得到。該酶有兩個(gè)Ca2+結(jié)合位點(diǎn)，它們離酶的活性中心有一定距離，與催化機(jī)理并無直接關(guān)系。然而，如果從該酶中除去Ca2+，由于出現(xiàn)遠(yuǎn)程的結(jié)構(gòu)變化，催化活性將喪失80%左右，但其剩余活性通常已足以降解在一般情況下污染酸制品的蛋白質(zhì)。所以，蛋白酶K 消化過程中通常加入EDTA（以抑制依賴于 Mg2+ 的核酸酶的作用） 。但是， 如果要消化對蛋白酶 K 具有較強(qiáng)耐性的蛋白，如角蛋白一類， 則可能需要使用含有1mmol/L Ca2+ 而不含 EDTA的緩沖液。 在消化完畢后、 純化核酸前要加入 EGT（ pH8.0）至終濃度為2mmol/L

11、, 以鰲合 Ca2+。3無 DNA 酶的 RNA 酶將胰 RNA酶（ RNA 酶 A ）溶于 10mmol/L Tris·HCl(pH7.5) 、 15mmol/L NaCl 中，配成 10mg/mL 的濃度，于 100加熱 15min，緩慢冷卻至室溫，分裝成小份保存于-20。（三）常用抗生素溶液貯存液 a工作濃度抗生素濃度保存條件嚴(yán)緊型質(zhì)粒松弛型質(zhì)粒氨芐青霉素50mg/mL( 溶于水 )-2020g/mL60g/mL羧芐青霉素50mg/mL( 溶于水 )-2020g/mL60g/mL氯霉素34mg/mL( 溶于乙醇 )-2025g/mL170g/mL卡那霉素10mg/mL( 溶于水

12、 )-2010g/mL50g/mL鏈霉素10mg/mL( 溶于水 )-2010g/mL50g/mL四環(huán)素 b5mg/mL( 溶于乙醇 )-2010 g/mL50 g/mLa：以水為溶劑的抗生素貯存液通過0.22 m濾器過濾除菌。以乙醇為溶劑的抗生素溶液無須除菌處理。所有抗生素溶液均應(yīng)放于不透光的容器保存。b：鎂離子是四環(huán)素的拮抗劑，四環(huán)素抗性菌的篩選應(yīng)使用不含鎂鹽的培養(yǎng)基（如LB 培養(yǎng)基）。（四）常用貯存液的配制1 30% 丙烯酰胺溶液【配制方法】將 29g 丙烯酰胺和 1g N， N-亞甲雙丙烯酰胺溶于總體積為 60mL 的水中。加熱至加水至終體積為 100mL 。用 Nalgene 濾器（

13、 0.45 m孔徑）過濾除菌，查證該溶液的7.0，置棕色瓶中保存于室溫。37溶解之，補(bǔ)pH 值應(yīng)不大于【注意】丙烯酰胺具有很強(qiáng)的神經(jīng)毒性并可以通過皮膚吸收，其作用具累積性。稱量丙烯酰胺和亞甲雙丙烯酰胺時(shí)應(yīng)戴手套和面具。可認(rèn)為聚丙烯酰胺無毒，但也應(yīng)謹(jǐn)慎操作，因?yàn)樗€可能會(huì)含有少量未聚合材料。一些價(jià)格較低的丙烯酰胺和雙丙烯酰胺通常含有一些金屬離子，在丙烯酰胺貯存液中加入大約 0.2 體積的單床混合樹脂（ MB-1 Mallinckrodt ），攪拌過夜，然后用 Whatman 1 號(hào)濾紙過濾以純化之。在貯存期間，丙烯酰胺和雙丙烯酰胺會(huì)緩慢轉(zhuǎn)化成丙烯酰和雙丙烯酸。2 40% 丙烯酰胺【配制方法】把

14、380g 丙烯酰胺（ DNA 測序級(jí)）和20g N ，N-亞甲雙丙烯酰胺溶于總體積為600mL繼續(xù)按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法處理，但加熱溶解后應(yīng)以蒸餾水補(bǔ)足至終體積為的蒸餾水中。1L 。【注意】見上述配制30%丙烯酰胺的說明，40%丙烯酰胺溶液用于DNA 序列測定。3放線菌素D 溶液【配制方法】把 20mg 放線菌素 D 溶解于 4mL 100% 乙醇中，1：10 稀釋貯存液， 用 100%乙醇作空白對照讀取OD440值。放線菌素D （分子量為1255）純品在水溶液中的摩爾消化系數(shù)為21， 900，故而 1mg/mL 的放線菌素 D 溶液在 440nm 處的吸光值為0.182，放線菌素

15、D 的貯存液應(yīng)放在包有箔片的試管中，保存于 -20。【注意】放線菌素 D 是致畸劑和致癌劑，配制該溶液時(shí)必須戴手套并在通風(fēng)櫥內(nèi)操作，而不能在開放在實(shí)驗(yàn)桌面上進(jìn)行，謹(jǐn)防吸入藥粉或讓其接觸到眼睛或皮膚。藥廠提供的作治療用途的放線菌素 D 制品常含有糖或鹽等添加劑。 只要通過測量貯存液在 440nm 波長處的光吸收確定放線菌素 D 的濃度，這類制品便可用于抑制自身引導(dǎo)作用。4 0.1mol/L 腺苷三磷酸（ ATP ）溶液【配制方法】在 0.8mL 水中溶解 60mg ATP, 用 0.1mol/L NaOH 調(diào)至 pH 值至 7.0，用蒸餾水定容 1mL ，分裝成小份保存于 -705 10mol/

16、L 乙酸酰溶液【配制方法】把 770g 乙酸酰溶解于800mL 水中，加水定容至1L 后過濾除菌。6 10% 過硫酸銨溶液【配制方法】把 1g 過硫酸銨溶解于終量為10mL 的水溶液中，該溶液可在4保存數(shù)周。7 BCIP 溶液【配制方法】把 0.5g 的 5-溴 -4- 氯 -3-吲哚磷酸二鈉鹽（BCIP ）溶解于10mL 100% 的二甲基甲酰胺中，保存于48 2×BES 緩沖鹽溶液【配制方法】用總體積90mL 的蒸餾水溶解1.07g 鹽溶液 BESN ， N- 雙（ 2-羥乙基） -2- 氨基乙磺酸 、1.6g NaCl和 0.027g Na2HPO4 ，室溫下用 HCl 調(diào)節(jié)

17、該溶液的 pH 值至 6.96、然后加入蒸餾水定容至100mL ，用 0.22 m濾器過濾除菌，分裝成小份，保存于-20。9 1mol/L CaCl2 溶液【配制方法】在 200mL 蒸餾水中溶解54g CaCl2·6H2O ，用 0.22 m濾器過濾除菌， 分裝成 10mL 小份貯存于 -20。【注意】制備感受態(tài)細(xì)胞時(shí)，取出一小份解凍并用蒸餾水稀釋至100mL ，用 Nalgene 濾器（ 0.45 m孔徑）過濾除菌，然后驟冷至0。10 2.5mol/L CaCl2 溶液【配制方法】在 20mL 蒸餾水中溶解 13.5g CaCl2 ·6H2O ，用 0.22 m濾器過濾

18、除菌， 分裝成 1mL 小份貯存于 -20。11 1mol/L 二硫蘇糖醇（DTT ）溶液【配制方法】用 20mL 0.01mol/L乙酸鈉溶液 （ pH5.2 ）溶解 3.09g DTT ，過濾除菌后分裝成1mL 小份貯存于 -20。【注意】DTT 或含有 DTT 的溶液不能進(jìn)行高壓處理。12脫氧核苷三磷酸（dNTP ）溶液【配制方法】把每一種dNTP 溶解于水至濃度各為100mmol/L 左右，用微量移液器吸取0.05mol/L Tris 堿分別調(diào)節(jié)每一 dNTP 溶液的 pH 值 7.0（用 pH 試紙檢測），把中和后的每種dNTP 溶液各取一份作適當(dāng)稀釋，在下表中給出的波長下讀取光密度

19、計(jì)算出每種dNTP 的實(shí)際濃度，然后用水稀釋成終濃度為50mmol/L 的 dNTP ，分裝成小份貯存于-70。堿基波長（ nm）消化系數(shù)（ ） L/ （ mol·cm）A2591.54×104G2531.37×104C2719.103×10T2607.403×10比色杯光徑為1cm 時(shí),吸光度 =M13 0.5mol/L EDTA(pH8.0)溶液【配制方法】在 800mL 水中加入186.1g 二水乙二胺四乙酸二鈉（EDTA-Na· 2H2O ），在磁力攪拌器上劇烈攪拌，用 NaOH 調(diào)節(jié)溶液的 pH 值至 8.0（約需 20g

20、NaOH 顆粒）然后定容至1L，分裝后高壓滅菌備用。【注意】EDTA 二鈉鹽需加入NaOH 將溶液的pH 值調(diào)至接近8.0，才能完全溶解。14溴化乙錠（10mg/mL 溶液）【配制方法】在 100mL 水中加入 1g 溴化乙錠，磁力攪拌數(shù)小時(shí)以確保其完全溶解，然后用鋁箔包裹容器或轉(zhuǎn)移至棕色瓶中，保存于室溫。【注意】小心：溴化乙錠是強(qiáng)誘變劑并有中度毒性，使用含有這種染料的溶液時(shí)務(wù)必戴上手套，稱量染料時(shí)要戴面罩。15 2×HEPES 緩沖鹽溶液【配制方法】用總量為 90mL 的蒸餾水溶解1.6g NaCl 、0.074g KCl 、0.027g Na2PO4·2H2O 、0.2

21、g 葡聚糖和1gHEPES，用 0.5mol/L NaOH 調(diào)節(jié) pH 值至 7.05，再用蒸餾水定容至 100mL 。用 0.22 m濾器過濾除菌，分裝成 5mL 小份，貯存于 -20。16 IPTG 溶液【配制方法】IPTG 為異丙基硫代 -D- 半乳糖苷（分子量為 238.3），在 8mL 蒸餾水中溶解 2g IPTG 后，用蒸餾水定容至 10mL ，用 0.22 m濾器過濾除菌，分裝成 1mL 小份貯存于 -20。17 1mol/L 乙酸鎂溶液【配制方法】在 800mL 水中溶解214.46g 四水乙酸鎂，用水定容至1L 過濾除菌。18 1mol/L MgCl2 溶液【配制方法】在 8

22、00mL 水中溶解203.4g MgCl2 ·6H2O ，用水定容至1L ，分裝成小份并高壓滅菌備用。【注意】MgCl2 極易潮解，應(yīng)選購小瓶（如100g）試劑，啟用新瓶后勿長期存放。19 -巰基乙醇（ BME ）溶液【配制方法】一般得到的是14.4mol/L 溶液，應(yīng)裝在棕色瓶中保存于4。【注意】BME 或含有 BME 的溶液不能高壓處理。20 NBT溶液【配制方法】把 0.5g 氯化氮藍(lán)四唑溶解于10mL 70% 的二甲基甲酰胺中，保存于4。21酚 /氯仿溶液【配制方法】把酚和氯仿等體積混合后用0.1mol/L TrisHCl(pH7·.6) 抽提幾次以平衡這一混合物，

23、上面覆蓋等體積的0.01mol/L TrisHCl(pH7·.6) 液層，保存于4。置棕色玻璃瓶中，【注意】酚腐蝕性很強(qiáng)，并可引起嚴(yán)重灼傷，操作時(shí)應(yīng)戴手套及防護(hù)鏡，穿防護(hù)服。所有操作均應(yīng)在化學(xué)通風(fēng)櫥中進(jìn)行。與酚接觸過的部位皮膚應(yīng)用大量的水清洗，并用肥皂和水洗滌，忌用乙醇。22 10mmol/L 苯甲基磺酰氟（PMSF ）溶液【配制方法】用異丙醇溶解PMSF 成 1.74mg/mL （ 10mmol/L ），分裝成小份貯存于-20。如有必要可配成濃度高達(dá) 17.4mg/mL 的貯存液（ 100mmol/L ）。【注意】PMSF 嚴(yán)重?fù)p害呼吸道粘膜、眼睛及皮膚，吸入、吞進(jìn)或通過皮膚吸收后

24、有致命危險(xiǎn)。一旦眼睛或皮膚接觸了PMSF，應(yīng)立即用大量水沖洗之。凡被PMSF 污染的衣物應(yīng)予丟棄。PMSF 在水溶液中不穩(wěn)定。應(yīng)在使用前從貯存液中現(xiàn)用現(xiàn)加于裂解緩沖液中。PMSF 在水溶液中的活性喪失速率隨pH 值的升高而加快，且25的失活速率高于4。 pH 值為 8.0 時(shí)， 20mmol/L PMSF水溶液的半壽期大約為 85min，這表明將 PMSF 溶液調(diào)節(jié) 為堿性（ pH>8.6 ）并在室溫放置數(shù)小時(shí)后，可安全地予以丟棄。23磷酸鹽緩沖溶液（PBS）溶液【配制方法】在 800mL 蒸餾水中溶解 8g NaCl 、 0.2g KCl 、 1.44g Na2HPO4 和 0.24g

25、 KH2PO4, 用 HCl 調(diào)節(jié) 溶液的 pH 值至 7.4 加水定容至 1L，在 15lbf/in2(1034 105Pa)×高壓下蒸氣滅菌 20min 。保存于室溫。24 1mol/L 乙酸鉀（ pH7.5 ）溶液【配制方法】將 9.82g 乙酸鉀溶解于90mL 純水中，用2mol/L 乙酸調(diào)節(jié)pH 值至 7.5 后加入純水定容到1L ，保存于 -20。25乙酸鉀溶液（用于堿裂解）【配制方法】在 60mL 5mol/L 乙酸鉀溶液中加入 11.5mL 冰乙酸和 28.5mL 水，即成鉀濃度為 3mol/L 而乙酸根濃度為 5mol/L 的溶液。26 3mol/L 乙酸鈉（ pH

26、5.2 和 pH7.0 ）溶液【配制方法】在 80mL 水中溶解408.1g 三水乙酸鈉，用冰乙酸調(diào)節(jié)pH 值至 5.2 或用稀乙酸調(diào)節(jié)pH 值至 7.0，加水定容到1L，分裝后高壓滅菌。27 5mol/L NaCl 溶液【配制方法】在 800mL 水中溶解292.2g NaCl 加水定容至1L ，分裝后高壓滅菌。28 10% 十二烷基硫酸鈉（SDS）溶液【配制方法】在 900mL 水中溶解 100g 電泳級(jí) SDS，加熱至 68助溶， 加入幾滴濃鹽酸調(diào)節(jié) 溶液的 pH 值至 7.2，加水定容至 1L，分裝備用。【注意】SDS 的微細(xì)晶粒易擴(kuò)散，因此稱量時(shí)要戴面罩，稱量完畢后要清除殘留在稱量工

27、作區(qū)和天平上的SDS， 10% SDS 溶液無須滅菌。29 20×SSC 溶液【配制方法】在 800mL 水中溶解175.3g NaCl 和88.2g檸檬酸鈉， 加入數(shù)滴10mol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值至7.0，加水定容至1L，分裝后高壓滅菌。30 20×SSPE 溶液【配制方法】在 800mL7.4（約需水中溶解17.5g NaCl 、 27.6g NaH2PO4·H2O 和 7.4g EDTA ，用6.5mL 10mL/L NaOH ），加水定容至1L，分裝后高壓滅菌。NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值至31 100% 三氯乙酸溶液【配制方法】在裝有500g TCA

28、的瓶中加入227mL水，形成的溶液含有100% （ M/V ） TCA 。32 Tris緩沖鹽溶液（TBS ）（ 25mmol/L Tris）【配制方法】在 800mL 蒸餾水中溶解 8g NaCl 、0.2g KCl 和 3g Tris 堿，加入 0.015g 酚并用 HCl 調(diào)至 pH 值至 7.4，用蒸餾水定容至 1L，分裝后在 151bf/in2(1.034 105Pa)×高壓下蒸汽滅菌 20min ，于室溫保存。33 X-gal溶液【配制方法】X-gal 為 5-溴 -4-氯 -3-吲哚 -D 半乳糖苷。用二基甲酰胺溶解X-gal 配制成的20mg/mL 的貯存液。保存于一

29、玻璃管或聚丙烯管中，裝有X-gal 溶液的試管須用鋁箔封裹以防因受光照而被破壞，并應(yīng)貯存于 -20。 X-gal 溶液無須過濾除菌。34雜交試驗(yàn)中用于降低背景的封閉劑試劑用途Northern 雜交Denhardt 試劑使用 RNA 探針的雜交單拷貝序列的Southern 雜交將 DNA 固定于尼龍膜上的雜交Denhardt 試劑通常配制 50×貯存液，過濾后保存于 -20。可將該貯存液 10 倍稀釋于預(yù)雜交液（常為含有 0.5%SDS 和 100g/mL 經(jīng)變性被打斷的鮭精 DNA 的 6×SSC 或 6×SSPE）中。50×Denhardt 液中含 5

30、g 聚蔗糖 （ Ficoll,400 蛋白（組分 V”Sigmal），加水至終體積為BLOTTO型， Pharmacia）、5g 聚乙烯吡咯烷酮和 5g 牛血清白 500mL 。Grunstein-Hogness 雜交Benton-Davis 雜交除單拷貝序列 Southern 雜交以外的所有 Southern 雜交斑點(diǎn)印跡1×BLOTT （牛乳轉(zhuǎn)移技術(shù)優(yōu)化液，Bovine Lacto Transfer Technique Optimizer） ,是含 5%膠脂奶粉和 0.02%疊氮鈉的水溶液，應(yīng)保存于4。使用前可用預(yù)雜交液稀釋25 倍。BLOTTO不應(yīng)與高濃度的 SDS 并用，因?yàn)?/p>

31、后者會(huì)導(dǎo)致牛奶中蛋白質(zhì)析出。如果雜交背景不合要求，可在雜交液中加入 NP-40 至終濃度為 1%。BLOTTO 不能用作 Northern 雜交的封閉劑，因?yàn)檫@一封閉劑中可能含有 RNA 酶，其活性之高使人無法接受。注意：疊氮鈉有毒性，取用時(shí)需戴手套小心操作。含疊氮鈉的溶液應(yīng)予明確標(biāo)記。Southern 雜交肝素原位雜交肝素（ Sigma H-7005 ，從豬中提取的二級(jí)產(chǎn)品或相當(dāng)?shù)燃?jí)的產(chǎn)品）用4×SSPE 或 4×SSC 溶解配制成 50mg/mL 的濃度， 保存于 4。肝素在含有葡聚糖硫酸酯的雜交液中用作封閉劑的濃度為500 g/mL，在不含葡聚糖硫酸酯的雜交液中的濃度

32、為50 g/mL。經(jīng)變性并被打斷的鮭精DNAsouthern 和 Northern 雜交把鮭魚精子DNA （ Sigma, ,鹽鈉）溶解于水配制成10mg/mL 的濃度，必要時(shí)于室溫磁力攪拌2 4h 助溶。把溶液中NaCl 的濃度調(diào)至0.1mol/L ，并用酚和酚/氯仿各抽提一次，回收水相。合 DNA 溶液快速通17 號(hào)皮下注射針頭12 次，以剪切DNA 。加入 2 倍體積用冰預(yù)冷的乙醇沉淀 DNA 。離心回收DNA 并重溶于水，配制成10mg/mL 的濃度，測定溶液的OD 260 值并計(jì)算出精確的 DNA 濃度，然后煮沸10min ，分裝成小份保存于-20。使用前置沸水浴中加熱5min ，然

33、后迅速在冰浴中驟冷。預(yù)雜交液中應(yīng)含有100g/mL經(jīng)變性并被打斷的鮭魚精子DNA35 4% 多聚甲醛【配制方法】稱取 40g 多聚甲醛，加人溶解后用濃HC1 調(diào)節(jié) pH800mL 0.2M PBS 加熱溶解，并加人少量的至 7.3-7.4，定容至 1000mLNaOH助溶，待多聚甲醛完全36熱修復(fù)液【配制方法】貯液：檸檬酸21.01g + 蒸餾水 1000mL檸檬酸三鈉29.4g +蒸餾水 1000mL工作液：取檸檬酸9mL + 檸檬酸三鈉41 mL + 450 mL蒸餾水,調(diào)PH至6.037礦化誘導(dǎo)液【配制方法】Alpha-MEM15% FCS405 mL75mlP/S（雙抗）10mM AA

34、1M beta-GP5ml5mL5mLL-ascorbic acid-phosphate (0.145g+50mLPBS)beta-glucorophosphate(10.8g+50mLPBS)2mM Dexamethsone sodium phosphate 2.52mM L-glutamine5mL1.8mM KH2PO42.5 ml (2.45g+50ml PBS)L38 500 mL 5X Mix（用于 real-time PCR ）【配制方法】5X20mM TRIS0.5 M TRIS100 mL5X50 mM KCl1MKCl125 ml5X3 mM MgCl1MMgCl27.5

35、ml5X10 nM Fluorescein10 uM Fluoresein2.5 mL5X5% DMSODMSO125 mLddH2O141 mLnaturalize mixture to PH 8.6 by 10M NaOH, Then filter by 0.2 m filterBefore using the final 5Xmix, 10 mL 5X Mix +50 L 500X SYBR rgreen (to 0.5X cybergreen)39 10mg/mL 牛血清蛋白 (BSA ）【配制方法】加 100mg 的牛血清蛋白（組分V 或分子生物學(xué)試劑級(jí)，無DNA 酶）于 9.5mL

36、 水中（為減少變性，須將蛋白加入水中，而不是將水加入蛋白），蓋好蓋后，輕輕搖動(dòng)，直至牛血清蛋白完全溶解為止。不要渦旋混合。加水定容到10mL ，然后分裝成小份貯存于-20。40 1mol/L 二硫蘇糖醇（DTT ）【配制方法】在二硫蘇糖醇5g 的原裝瓶中加32.4mL 水，分成小份貯存于-20。或轉(zhuǎn)移100mg 的二硫蘇糖醇至微量離心管，加0.65mL 的水配制成1mol/L 二硫蘇糖醇溶液41 1mol/L HEPES【配制方法】將 23.8gHEPES 溶于約 90mL 的水中，用NaOH 調(diào) pH （6.8-8.2），然后用水定容至100mL 。42 25mg/mL IPTG【配制方法】

37、溶解 250mg 的 IPTG （異丙基硫代-D- 半乳糖苷）于10mL 水中，分成小份貯存于-20。43 10 SDS（十二烷基硫酸鈉）【配制方法】稱取 100gSDS 慢慢轉(zhuǎn)移到約含0.9L 的水的燒杯中，用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。用水定容至 1L。44 2.5 X gal（ 5-溴 -4-氯 -3- 吲哚 -半乳糖苷）【配制方法】溶解 25mg 的 X gal 于 1mL 的二甲基甲酰胺（DMF ） ,用鋁箔包裹裝液管，貯存于-20。45 DEPC （焦碳酸二乙酯）處理水【配制方法】加 100LDEPC 于 100mL 水中，使 DEPC 的體積分?jǐn)?shù)為 0.1。在 37溫浴至少 12h，然后在 15 psi 條件下高壓滅菌20min ，以使殘余的DEPC液。失活。 DEPC會(huì)與胺起反應(yīng)，不可用DEPC 處理Tris 緩沖46TE （用于懸浮和貯存DNA ）【配制方法】1mL 1mol/L Tris-HCl（ pH7