1、比色法測定物質的含量比色法測定物質的含量原理：在相同條件下，配制標原理：在相同條件下，配制標準溶液和待測樣品溶液的有色準溶液和待測樣品溶液的有色溶液，將兩者的顏色進行比較，溶液，將兩者的顏色進行比較，用目測法求出待測樣品溶液的用目測法求出待測樣品溶液的濃度。濃度。案例案例1 1 食品中食品中NONO3 3- -和和NONO2 2- -含量的測定含量的測定原理：原理：對氨基苯磺酸對氨基苯磺酸 + 2H+ 2H+ + + NO + NO2 2- - 重氮化合物重氮化合物 + 2H+ 2H2 2O O- -萘胺萘胺 + + 重氮化合物重氮化合物 對對- -苯磺酸苯磺酸- -偶氮偶氮- - -萘胺（紫

2、萘胺（紫紅色化合物）紅色化合物）反應條件：反應條件：酸性條件下，磺胺與酸性條件下，磺胺與NONO2 2- -作用形成重氮作用形成重氮化合物，酸度大，重氮化作用速度加快。化合物，酸度大，重氮化作用速度加快。實驗中所有的反應需要在相同的外界條實驗中所有的反應需要在相同的外界條件下進行件下進行反應特點：非常靈敏，可測定反應特點：非常靈敏，可測定0.5 0.5 g/mLg/mL濃度的濃度的NONO2 2- -實驗過程：實驗過程：1 1標準濃度的標準濃度的NaNONaNO2 2配制配制（1 1）0.1 g0.1 g溶解于蒸餾水中，定容至溶解于蒸餾水中，定容至500mL500mL，NaNONaNO2 2濃

3、度為濃度為200mg/L200mg/L（NaNONaNO2 2濃度濃度=200g/mL=200g/mL）（2 2）取（）取（1 1）溶液）溶液5mL5mL用水稀釋，定容至用水稀釋，定容至200mL200mL（即稀釋了（即稀釋了4040倍），此時倍），此時NaNONaNO2 2濃度為濃度為5 5 mg/Lmg/L（NaNONaNO2 2濃度濃度=5 g/mL=5 g/mL）2 2反應試劑的配制反應試劑的配制（1 1）HClHCl：取：取20 mL20 mL濃鹽酸用蒸餾水水稀釋成濃鹽酸用蒸餾水水稀釋成100mL100mL；（2 2）對氨基苯磺酸：）對氨基苯磺酸：4mg/mL4mg/mL，稱取，稱取

4、0.4g0.4g對氨基苯磺酸溶于（對氨基苯磺酸溶于（1 1）中。）中。（3 3）- -萘胺：萘胺：2mg/mL2mg/mL，0.2g0.2g溶解于溶解于100mL100mL（1 1）中。）中。注意：注意：HClHCl在這個實驗中的作用是制造一種酸性環境，上面的濃度在這個實驗中的作用是制造一種酸性環境，上面的濃度足夠了。作為反應物質的對氨基苯磺酸和足夠了。作為反應物質的對氨基苯磺酸和- -萘胺也是過量的。實萘胺也是過量的。實驗過程中，只要每次重復時這些藥品的濃度穩定，實驗結果就會比驗過程中，只要每次重復時這些藥品的濃度穩定，實驗結果就會比較一致。因此，如果要采用這個實驗做一些探究性活動，需要大量

5、較一致。因此，如果要采用這個實驗做一些探究性活動，需要大量使用、實驗需要重復多次的、在短時期就可以完成的，可將這幾種使用、實驗需要重復多次的、在短時期就可以完成的，可將這幾種藥品多配制一些，放入冰箱，以免多次配制導致結果不穩定。藥品多配制一些，放入冰箱，以免多次配制導致結果不穩定。磺胺有強烈的氧化作用，其溶液不要與鐵制品接觸，最好采用玻璃磺胺有強烈的氧化作用，其溶液不要與鐵制品接觸，最好采用玻璃制品；溶解時需加熱。閉光保存。制品；溶解時需加熱。閉光保存。- -萘胺有毒，溶解時需要加熱。閉光保存。萘胺有毒，溶解時需要加熱。閉光保存。3 3標準色階的制備標準色階的制備表表1 NaNO21 NaNO

6、2含量測定的標準色階的制備表含量測定的標準色階的制備表編編號號蒸餾水蒸餾水（mL）NaNO2（mL）對氨基苯對氨基苯磺酸（磺酸（mL）-萘胺萘胺（mL）NaNO2的最終的最終含量（含量（g）17.00.0210.026.90.1210.536.80.2211.046.60.4212.056.40.6213.066.20.8214.076.01.0215.085.81.2216.095.61.4217.0105.41.6218.0115.21.8219.0制備標準色階時，各反應溶液的總量一定要制備標準色階時，各反應溶液的總量一定要保持一致，反應各部分要準確加入。如果顏保持一致，反應各部分要準確加

7、入。如果顏色太深，各色階間沒有差別，無法比較，可色太深，各色階間沒有差別，無法比較，可等反應穩定后，加水稀釋后再進行比較。但等反應穩定后，加水稀釋后再進行比較。但是一定要記錄稀釋的倍數，以便后面的計算。是一定要記錄稀釋的倍數，以便后面的計算。4材料中材料中NaNO2的提取的提取提取劑：稱取提取劑：稱取50g氯化鎘和氯化鎘和50g氯化鋇溶于氯化鋇溶于1000ml的蒸餾水中，用濃鹽酸調節的蒸餾水中，用濃鹽酸調節pH至至1。提取劑的作。提取劑的作用為提取泡菜汁中的雜質，以利比色；用為提取泡菜汁中的雜質，以利比色；氫氧化鋁乳液：進一步吸附泡菜汁中的雜質；方法：氫氧化鋁乳液：進一步吸附泡菜汁中的雜質；方

8、法：稱取稱取125g硫酸鋁鉀硫酸鋁鉀KAl(SO4)2.12H2O或硫酸鋁銨或硫酸鋁銨NH4Al(SO4)2.12H2O溶于溶于1000mL純水中。加熱純水中。加熱至至60oc，緩緩加入，緩緩加入55mL氨水氨水(20=0.88g/mL)。使。使氫氧化鋁沉淀完全。充分攪拌后靜置，棄取上清液。氫氧化鋁沉淀完全。充分攪拌后靜置，棄取上清液。用純水反復洗滌沉淀，至傾出上清液中不含氯離子用純水反復洗滌沉淀，至傾出上清液中不含氯離子（用硝酸銀溶液試驗）。然后加入（用硝酸銀溶液試驗）。然后加入300mL純水成懸純水成懸浮液，適應前振搖均勻。浮液，適應前振搖均勻。2.5mol/L的氫氧化鈉溶液：使其與泡菜汁

9、中的部分的氫氧化鈉溶液：使其與泡菜汁中的部分物質形成沉淀。物質形成沉淀。材料粉碎材料粉碎0.2 kg0.2 kg，注意要精確，注意要精確過過 濾濾也可離心，收集全部濾液氯化鎘、氯化鋇提取也可離心，收集全部濾液氯化鎘、氯化鋇提取加入加入2 2倍的蒸餾水，倍的蒸餾水，1 1倍的提取液，振蕩，提取倍的提取液，振蕩，提取1h1h。如果沒有搖。如果沒有搖床，可人工代替，經常用玻璃棒攪動。加堿沉淀氯化鎘、氯化床，可人工代替，經常用玻璃棒攪動。加堿沉淀氯化鎘、氯化鋇鋇也需要攪動。定容到也需要攪動。定容到500mL500mL一定要精確取一定要精確取50mL50mL濾液，加濾液，加Al(OH)32mLAl(OH

10、)32mL除去有機雜質，定容到除去有機雜質，定容到100mL100mL需要攪動。需要攪動。過濾過濾也可離心也可離心過濾過濾離心也可離心也可5材料中材料中NaNO2含量的測定含量的測定取上面獲得的無色透明液體取上面獲得的無色透明液體5mL于試管，加水于試管，加水2mL，加對氨基苯磺酸，加對氨基苯磺酸2mL，-萘胺萘胺1mL，反，反應應15min后，與上面的標準色階顏色進行對比，后，與上面的標準色階顏色進行對比，從色階表中找出相應的樣品從色階表中找出相應的樣品NaNO2的含量，根據的含量，根據公式計算樣品溶液中公式計算樣品溶液中NaNO2的含量的含量6 6采用比色法測定物質含量的要注意的地方采用比

11、色法測定物質含量的要注意的地方（1 1）稱取的物質量要準確，）稱取的物質量要準確，（2 2）研磨過程要充分，并充分溶解在水中）研磨過程要充分，并充分溶解在水中（3 3）每次定容要準確）每次定容要準確（4 4）反應時，加入的溶液量要準確）反應時，加入的溶液量要準確（5 5）所有的反應過程要保持條件一致。）所有的反應過程要保持條件一致。結果：泡菜中亞硝酸鹽含量在發酵剛剛開始的結果：泡菜中亞硝酸鹽含量在發酵剛剛開始的時候都處于上升趨勢，在時候都處于上升趨勢，在5 d5 d或者或者7 d7 d的時候會達的時候會達到一個最高值，之后就會慢慢下降，在發酵時間到一個最高值，之后就會慢慢下降，在發酵時間達到達

12、到13 d13 d左右的時候下降到一個相對比較穩定的左右的時候下降到一個相對比較穩定的數值，達到平穩狀態。數值，達到平穩狀態。原因分析：發酵初期，泡菜中的微生物生長很快，原因分析：發酵初期，泡菜中的微生物生長很快，微生物將蔬菜中的硝酸鹽還原成亞硝酸鹽，如此微生物將蔬菜中的硝酸鹽還原成亞硝酸鹽，如此同時，蔬菜中的酚類物質和維生素同時，蔬菜中的酚類物質和維生素C C等物質也會等物質也會將亞硝酸鹽氧化，但總體來說，生成的亞硝酸鹽將亞硝酸鹽氧化，但總體來說，生成的亞硝酸鹽大于被氧化的亞硝酸鹽，因此，隨著發酵時間的大于被氧化的亞硝酸鹽，因此，隨著發酵時間的進行，亞硝酸鹽的含量會逐步上升。隨著微生物進行，亞硝酸鹽的含量會逐步上升。隨著微