1、液質聯用儀操作規程第1頁共8頁SOP- I- Xevo-TQSFSIDC1 適用范圍本設備配備ACQUITYJPLC液相色譜儀、TQSMS/MS質譜儀，適用于食品、藥品中各種有機物的定性、定量分析，是一種具有高靈敏度的檢測儀器，儀器由主 機、計算機和數據處理軟件等組成。2.職責2.1操作人員按照本規程操作儀器，認真填寫實驗使用記錄。2.2保管人員負責對儀器進行定期維護和保養。2.3科室負責人負責監督檢查規程的執行。3 操作程序日常操作步驟：準備UPLC設置樣品表一- 運行樣品一-定量一-打印報告。注：如果一個星期內不運行樣品請不要關質譜儀，使其保持真空。建立新方法和project的操作步驟：準

2、備UPLC建立新的project 用標準品調諧編輯質譜方法編輯 UPLC方法一-設置樣品表一-運行樣品一-定量一- 打印報告。3.1開機：徹底開機順序（儀器已關閉）確定MS及其它儀器電源電纜已連接，開氮氣發生器、開氬氣，小表 等待windows正常啟動 電腦界面右下角網絡圖標紅叉。打開UPLC自動進樣器電源，等到電腦界面右下角網絡圖標出現感嘆號！。打開UPLC泵電源，等約30s或者是有響聲。打開質譜電源，等待5min，離子源透視鏡里面亮。打開Masslynx軟件，masslynx主界面左側instrument-Mass tune-界面菜單 欄 vacuum-pump 同樣界面左側偏上 diag

3、nostics-vacuum-analyser MS1 turbo speed%要在5分鐘內升到80。至少抽真空4個小時 查看真空狀態主界面 mass console- 面左側 xevo tq ms detector力卩號展開-ms display 碰撞室真空度 達液質聯用儀操作規程第2頁共8頁SOP- I- Xevo-TQSFSIDC至U 7.x e-5mbar。日常開機順序（儀器未關閉）開氮氣發生器、開氬氣，小表準備樣品灌注二元泵 灌注自動進 樣器 建立液相方法 平衡液相3.3.1. 準備流動相用0.22um的膜過濾緩沖液，所有的緩沖液和超純水都要新配制，超純水和緩沖液使用不得超過二天，緩

4、沖鹽一定要是可揮發的，而且濃度不要大于10mM。3.3.2. 樣品要求所有樣品都要用流動相初始梯度比例的溶劑來溶解，并用0.22um的膜過濾。灌注二元泵在Massly nx主界面，單擊MS Con sole進入UPLC交互顯示界面，點擊左欄Acquity UPLC System Control Start Up System單擊QSM，選擇需要用到的流動相位置， 如A和B，選擇seal wash,時間設為3分鐘。單擊 SM，選擇 Strong Wash 5 cycles , Sample syringe 20單擊Equilibrate to Method，將流速設為0 ,單擊Start開始灌注

5、.時間大約為9min 左右。設定流速，平衡液相在Masslynx主界面，單擊Inlet Method圖標，打開液相方法編輯窗口，單擊status ACQUITY Additional Status,進入液相控制臺，單擊A或B或流速的位置，出現流 速、比例設定對話框，設定液相流速與比例，單擊對勾，開始平衡液相，如果后面 要做調諧，可設定流速0.2ml/min,有機相與水相的比例為50:50。液質聯用儀操作規程第3頁共8頁SOP- I- Xevo-TQSFSIDC3.4準備質譜341.計算化合物單同位素質量數Masslynx主界面 單擊ToolsMolecular Weight Calculato

6、r,輸入化合物的分子式（大寫-注意C、Br等正確的輸入方法）,注意選單同位素Mono iso ,lo n Mode:離子 化模式，+ve正離子，-ve負離子，單擊Calculate用Intellistart進行自動調諧在Masslynx主界面單擊MS Tune圖標，打開調諧窗口，單擊Ion Mode ES+或ES-，單擊 API Gas圖標打開氮氣，單擊 打開高壓選擇MS Mode圖標，設定液相流速0.2ml/min,水：乙腈的比例為50:50。把標準品調諧液放入質譜儀塑料瓶位置處的A （或B或C）號位（注:濃度在200ppb左右）單擊 Fluidics 選擇 Reservoir為 A ,Fl

7、ow State 為 LC 模式，點擊 Purge 圖標。 Purge 結束后，將 Flow State 改為 Combine 模式，設定 Function 為 MS1 scan, Mass為計算出化合物的質量數，span為5，點擊進樣，開始進樣，直到離子的 響應比較穩定。保存調諧文件：File Save A至已建的項目下。在 Masslynx主界面，選擇 Ms Console Xevo TQ MS Detector 選擇 Intellistart，選擇 Sample Tune and Develop Method，ES+ 單擊 Start圖標，出現Intellistart自動調諧編輯窗口，選

8、擇 Switch to Advaneed mode，輸入 Compound name 化合物名稱），Molecular Mass/Formula （分子量或 分子式）Adduct A+（ M+H +， 選擇 Load Existing Sample Tune，在 Sample Tune Name方框后的“。”處調用開始保存的調諧文件，在Develop MRM Method前 的方框打鉤，并在方框出輸入 MRM方法的文件名，路徑為已建的項目下。在 Print Report 前方框打鉤，Cone Voltage，Collision Energy 處為默認值，Fluidics 下 的 Flow Pa

9、th 選擇 Combined 模式，Sample Reservoir 和 Sample Flow Rate參數與 Fuldics下Combined模式下的進樣參數保持一致。單擊右邊的Start開始自動調 諧。調諧成功，會有綠勾出現，查看intellistart報告液質聯用儀操作規程第4頁共8頁SOP- I- Xevo-TQSFSIDC343 查看intellistart中自動生成的質譜方法：從MassLynx主窗口，單擊 MS Method,出現MS Method編輯對話框,選擇File open,選擇Intellistart中保存的質譜方法的文件，雙擊方法，如發現自動調諧生產 的質譜方法中部

10、分參數有誤，則可以在Cha nn els窗口手動修改參數，填寫relentinon window中的end時間，此時間必須與液相色譜方法運行時間保持一 致，選擇Auto Dwell,單擊OK，點擊File Save As,保存質譜方法文件。3.5建立液相方法編輯液相方法在液相方法編輯窗口，單擊Inlet，輸入溶劑名稱，run time及梯度洗脫程序，梯度洗脫程序中最后階段時間必須與 run time符合，單擊OK,選擇File Save As 保存方法，單擊Load Method，平衡液相。建立樣品列表在Masslynx主窗口，選擇 File New建立一個空白的表 samplelist。輸入

11、文件名 File Name，樣品信息File Text，雙擊 MS File，選擇質譜方法，雙擊Inlet File, 選擇液相方法，在Bottle中輸入樣品瓶的位置，在Inject Volume中輸入進樣 體積，可右鍵 Add,增加樣品表的行數，保存樣品表：File Save As。3.6數據采集和處理3.6.1.選中要采集的樣品，單擊 Run Start選擇Acquire Sample Data only”單擊 OK開始進樣并采集。在采集過程中，可查看色譜圖，點擊Chromatogram窗口，點擊Real-timeUpdate icon .如果不能見整個TIC圖，單擊 Default Ra

12、nge圖標。如果方法中包括多個通道，可通過 Display Mass查看如果方法中包括多個檢測器或多個 Function,可通過Display TIC查看處理多個Function的數據如果質譜方法中有多個 Function，如有三個Function，如想看第二個 Function， MS Sca n的數據。液質聯用儀操作規程第5頁共8頁SOP- I- Xevo-TQSFSIDC3.631在色譜圖窗口，點擊 Display TIC選中MS Scan ,選擇 Add trace，單 擊OK。如想查第二個Function. Daughter Scan質譜圖，在色譜圖中，選擇 Display TIC,

13、選擇 ScanWaveDS Add trace，單擊 OK=3.6.3.3.選擇Process Combine spectra分別用右鍵輸入信號和本底噪音.單擊 OK.得到 Daughter Scan的質譜圖，單擊 Process Smooth ，單擊 OK。3.7數據處理-外標定量法在Masslynx主頁面單擊Targetlynx/Edit method，出現定量方法編輯對話框， 單擊新建方法圖標，新建一個定量方法。單擊Add new compound （添加新的化合物）圖標，添加一個新的化合物。3.7.3 單擊菜單欄 update,選中 Quantitation Ion 和 Compoun

14、d Name （前面打勾）在Masslynx主頁面，打開中等偏下低濃度標準品的色譜圖，Display/Masschromatogram選出要定量的化合物的離子對，一般強度高的化合物用來做為定量 離子，另一個離子對則作為確證離子，用鼠標右鍵在定量離子對色譜圖上拉一下， 貝U compound name, Acquisition Function Number, Quantification Trace, Predicted Retention Time和Retention Time window 將自動輸入到定量方法中。注意：在色 譜圖上拉的時候，要遵循兩個原則，拉的位置要以色譜峰的峰尖左右對稱

15、，拉的 寬度要超過峰的起點和終點。單擊工作曲線圖標，在工作曲線設置頁面，填入Concen trati on Un its:濃度單位，例女口 n g/ml, ug/kg，ppb, ppm 等。Concentration of Standard: Level選擇 ConcAPoly no mial Type選擇Lin ear.（可根據自己行業的規定）Calibration Origin衛擇exclude排除原點），include（包含原點），force（強制過原點） Weitht ing Fu nctio n（權重）_1/x （根據自己行業規定）Propagate Calibratio n Par

16、ameters如果所有的化合物均用相同的工作曲線的參數， 選Yes液質聯用儀操作規程第6頁共8頁SOP- I- Xevo-TQSFSIDC打開積分參數列表，選中 Apex Track Enabled （打勾，YES, Integration Window Extent 輸入 2,選中 Propagate Integration Parameters 打勾），如果色譜峰 并不是很對稱的色譜圖，可先在色譜圖上先設定參數，積分，好積分參數滿意之 后，process/integrate/copy，在 Targetlynx 方法中 Edit/Past 就可將其粘貼到 Targetlynx方法中。建議用

17、Apex Track積分方法，Smooth方法建議用smooth iteration 1,smooth width 2。重復上面的過程，把其他幾個化合物的信息全部加入，保存方法：File/Save As,保存到當前項目的 MethDB文件夾中，正確的samplelist 表格模板，除了前面進樣時的選項之外，還要有sample type, ConA,等選中要處理 的樣品，單擊Process Samples出現下圖的對話框，確保選中，Integrate、sample ， calibrate Standard, Quantify Sample選擇剛才編輯的 Targetlynx 方法，單擊 OK后,

18、 出現定量結果對話框。可根據自己的需要，用鼠標右鍵，Cha ng Column Order來增加或減少Summary中的選項。3.8關機程序日常關機：381.1如果流動相中有緩沖鹽必須先將緩沖鹽換成水，灌注2分鐘，流速設為0.2ml/min，80%水相，沖洗至少30分鐘，換成80%有機相，沖洗至少20分鐘， 停流速，水相，沖洗至少30分鐘，換成80%有機相，沖洗至少20分鐘，停流速， 柱溫為室溫。關質譜：主界面mass tune或者電腦下面儀器圖標一界面左側偏上 fluidics-flow state選擇為waste、關氬氣，mass tune界面或者電腦下面儀器圖標 工具欄第6個 關高壓ma

19、ss tune界面右下角 等待去溶劑氣溫度降低至100度以 下mass tune界面或者電腦下面儀器圖標左側偏上。ES+sourcetemperature-desolvation 關氮氣，點擊氮氣發生器開啟開關。徹底關機先完成日常關機液質聯用儀操作規程第7頁共8頁SOP- I- Xevo-TQSFSIDC3.822泄真空：tune page vacuum vent-yes 等待渦輪分子泵轉速降到 10以 下 ,masslynx主界面左側instrument-Mass tune-界面左側偏上 diag no stics-vacuum-source turbo speed%退出軟件，其他界面先退出

20、，主界面最后退出關質譜電源 關所有UPLC電源，計算機電源，儀器三個電源順序無所 謂，關氮氣發生器，氬氣。如果有UPS關閉UPS電源，計算機電源。4日常維護、保養及注意事項4.1儀器室要保持整潔、干凈、無塵；配套設施布局合理。4.2儀器室溫度應相對穩定，一般應控制在 20-25 C,保持恒溫；相對濕度最好 為50-70%,室內應備有溫度計和濕度計，一般采用空調和吸濕機調節溫度和濕度。4.3氣壓過濾機械泵油，停止樣品采集、停止流動相、關閉高壓、關閉所有氣流, 關閉離子源內的真空隔離閥。用一字鏍絲刀順時針方向擰開機械泵上的GasBallast閥四分之一圈，運行30分鐘后再把Gas Ballast閥旋轉到原來關閉的 位置。對于ESI源，至少每星期做一次，對于 APCI源，每天做一次。4.4開高壓之前一定要先開氮氣，關氮氣之前一定要先關高壓。4.5 ESI離子化與溶劑密切相關，在使用某些溶劑和添加物需要注意以下幾個方面：三氟乙酸(TFA多用于蛋白質和多肽分析，但對 ESI離子化有抑制效應；三 乙胺(TEA在m/z 102處有較強的M+H+峰，有可能會抑制某些堿性化合物在正 離子ESI條件下的離子化，也有可