1、標準菌株使用標準操作規程1 檢驗目的對實驗室的標準菌株進行合理的保存，并規范合理的使用流程，保證菌株的性能穩定可靠。2 范圍微生物實驗室保存的標準菌株。3 職責微生物組工作人員正確執行本操作規程。4 術語和定義4.1標準菌株其特征進行了分類和描述，有明確的來源。ATCC（American Type Culture Collection）美國標準菌株收藏中心。4.2標準儲備菌株標準菌株經過一代轉接后獲得的同種菌株。4.3 工作菌株標準儲備菌株傳代后得到的同種菌株。4.4 標準培養物標準菌株、標準儲備菌株、工作菌株的統稱。4.5質控菌株ATCC最佳，但當無法獲得時可以使用ATCC演化的菌株或我國國

2、家菌種庫儲存的標準菌株。特殊情況，例如定性試驗可用已知的菌種作為質控菌株。室間質評的菌株即可。5 保存程序5.1標準菌株5.1.1商業購買的ATCC標準菌株干粉，-80低溫保存，可以2年以上。安瓿真空包裝的，-80可長期穩定保存。將標準菌株進行編號和登記。5.1.2復蘇用1ml無菌的小牛血清或營養肉湯溶解。根據菌種的生長特點，接種到新鮮培養基上選擇適宜的培養條件培養18-24h。酵母菌要求3天，形成孢子的微生物宜保存孢子。5.2標準儲備菌株5.2.1由復蘇后的ATCC標準菌株制備。復蘇后的標準菌株要檢查其純度，必要時進行生化試驗檢查。刮取培養物上的菌體，用足量的菌懸浮于防凍培養基中。防凍液可以

3、是無菌脫纖維羊血、10%甘油肉湯。儲存足夠量的標準儲備菌株，可用1-2年。一年52周需要52支以上。5.2.2甘油肉湯保存法成分有蛋白胨、牛肉浸出粉、氯化鈉、甘油、純化木。相當于20%的甘油。挑取5環菌落加入到1ml甘油肉湯中混勻。苛養菌可以適當增加菌量。-80保存。除鏈球菌和嗜血桿菌以外細菌均可使用。保存期限1-5年。5.2.3全血保存法成分為脫纖維羊血。挑取5環菌落加入到1ml甘油肉湯中混勻。苛養菌可以適當增加菌量。-80保存。主要用于保存鏈球菌、嗜血桿菌及厭氧菌。保存期限1-5年。5.2.4標準儲備菌株進行編號和登記。5.3工作標準菌株由標準儲備菌株傳代得到的菌株。標準儲備菌株對多向下傳

4、三代。過多的傳種會增加變異的機會。標準儲備菌株根據菌種特點選擇適宜的培養基和培養條件進行培養18-24h即工作標準菌株。儲存在2-8，可放四周。個別營養要求高的為2周，例如肺炎鏈球菌和嗜血桿菌。使用時應編號并登記。5.4編號方法每個菌的保存管都要有唯一的編號，簽字筆標注，便于查找和管理。來源數字意義購買的標準菌株1501ATCC2592215年第1株ATCC25922儲備標準菌株1501ATCC25922-3由1501ATCC25922傳代而來的3號標準儲備菌株5.5記錄管理5.5.1菌種應有嚴格的登記。每個編號都要有詳細的記錄包括來源、傳代、保存方法、使用記錄、使用原因、高壓滅菌記錄等。附表

5、標準菌株記錄表標準儲備菌株記錄表5.5.2菌種保管應有專人負責，保存于專用冰箱中，雙人雙鎖，確保菌種安全。保管人員變動時，必須嚴格交接手續。5.5.3各種菌種應按規定時間接種，注意菌種有無污染及變異，如發現變異時，應及時更換5.5.4一個使用周期結束后，標準菌株、儲備菌株、工作菌株都要進行高壓滅菌處理，并做好記錄。6 使用流程購買的標準菌株，編號，-80保存用完第二天高壓滅菌標準菌株性能驗證復蘇接種合適的培養基，孵育出菌落挑取典型的菌落到合適的穩定劑中，編號，-80保存，準備n支標準儲備菌株月質控周質控日質控每月取出一支標準儲備菌株傳種合適的培養基，適宜條件孵育出菌落每周取出一支標準儲備菌株傳

6、種合適的培養基，適宜條件孵育出菌落傳代培養物每周取出一支標準儲備菌株傳種合適的培養基，適宜條件孵育出菌落儲備菌株管用完第二天高壓滅菌直接作為工作菌株使用，第二天高壓滅菌傳代培養物可以作為第一天的工作菌株使用。4保存。以后6天用。也可以用最后一天的的工作菌株作為傳代培養物繼續使用一周。以后的6天每天都用傳代培養物傳一個新的菌株，作為工作菌株使用。工作菌株使用后第二天高壓滅菌7天后傳代培養物作廢，進行高壓滅菌重新取一直標準儲備菌株傳種，進入下一輪周期，程序如上面幾個步驟購買的標準菌株（可追溯來源，衛生部室間質評菌株可作為質控菌株使用，按照標準菌株管理） 0代 接種傳代培養一次，并進行純度和生化鑒定

7、 1代作為“儲存標準菌株”進行多個分裝保存，按照特定條件儲存和推薦的儲存時間每天傳代平板作為第二天的工作標準菌株，進行室內質控，用完立刻高壓處理2代進行純度檢查和生化鑒定。作為傳代物或者第一支“工作菌株”特定的儲存條件和推薦儲存時間可以再重復一周，規則同上。但一般來說工作菌株不能超過3代室內質控7 質量控制7.1 觀察菌落的典型形態是否符合菌種。有沒有雜菌生長。7.2用氧化酶、觸酶、上機等生化試驗，鑒定菌種有沒有變化。7.3如果有污染或懷疑有問題時，應準備新的首次傳代物或者獲取新的標準菌株。8 參考文獻序號唯一性編號文獻名稱9.1ISBN978-7-117-19862-2/R·19863全國臨床檢驗操作規程第四版9.2ISBN978-7-5478-1226-6/R&#