1、一、起草背景和研究經過蜂膠是蜜蜂從植物新生枝腋芽處、花蕾處、創傷處采集的樹脂類物質，再注入其腺體分泌物，經加工轉化而成的膠狀物質。是蜜蜂用來抵御蜂巢外部病蟲害、病原性微生物入侵以及保持巢內環境干凈清潔的物質。是常用的保健食品原料。也收載于中國藥典2010年版，適應癥為抗菌消炎、調節免疫、抗氧化、加速組織愈合。用于高脂血癥和糖尿病的輔助治療。蜂膠主要由樹脂類、芳香油、蜂蠟、花粉等組成。蜂膠來源因地域廣泛性和植被多樣性，造成了成分的復雜性。上世紀初Küstenmacher1從蜂膠中鑒定出肉桂醇與肉桂酸。至50年代后期國內外己從蜂膠中分離鑒定出化學成分有黃酮類、萜烯類、醌類、酯類、醇類、醛

2、類、酚類、有機酸類，酶類、維生素類、多糖及多種微量元素等。中國蜂膠化學成分研究始于80年代初期，尚天民等2從北京蜂膠中分離出白楊素，3 ,4-二甲氧基肉桂酸、異阿魏酸和廿六烷酸、5,7-二羥基黃酮、3,5,7-三羥基黃酮、5,7-二羥基,2-甲氧基黃酮、二十三(烷)酸甲酯、鄰苯二甲酸雙(2-乙基己基)酯、鄰苯二甲酸雙異丁酯和葵二酸雙(2-乙基己基)酯3，球橙素、喬橙素、柚木楊素、白楊素、良姜素和高良姜4。遲家平等57從遼西蜂膠中分離出白楊素、良姜素、刺槐素、洋芹素、山奈素、鼠李素、柚木楊素、咖啡酸芐酯、芫花素、硫的多倍體S8, 3，4-二甲氧基桂皮酸、異阿魏酸、咖啡酸、苯甲酸。曾唏8從貴陽蜂膠

3、中分離得到刺魄素。從貴陽蜂膠中分離得到5-苯基-2,5-戊二烯酸，3,4-二甲氧基肉桂酸，3羥基-4-甲氧基肉桂酸9。蜂膠含揮發油，鑒定出甲酸乙酷、乙酸乙醋、-按葉油醇、愈創烯醇等化合物10。用CG-MS在泰山蜂膠中分析鑒定出多種成分，主要為苯甲醇、苯甲酸、苯乙醇11，河南蜂膠中檢出了苯乙醇、3-苯基-2-丙酸、1-（1, 5-二甲基-4-乙烯基）-4-甲基苯、苯并蒽酮12，宜昌蜂膠中檢出肉桂酸、a-桉葉醇、10-表- C5 -桉葉醇等成分13。內蒙古蜂膠中檢測出了多種化合物,主要是-2沒藥醇、2-甲基-3-丁烯-2-醇、3-甲基-2-丁烯-1-醇14，北京蜂膠中分離得到愈創木醇、愈創木醇、-

4、桉葉油醇、異愈創木醇15；甘肅蜂膠中檢測到的主要成分是大黃酚16。我國蜂膠原料產量有限，經有關方面統計：每年蜂膠原料產量僅為350噸左右，年產值約7000萬元；提純蜂膠產量不足200噸，產值近億元；正常情況下，年產銷各種蜂膠制品約為600噸，銷售總額應在18億元左右，而實際上，各種蜂膠制品年銷售額達30億元以上。2007年，統計21家蜂膠企業生產用蜂膠原料消耗量，大大地超過了全國蜂膠原料的實際產量。保守估計，目前市場上未經批準的、存在各種問題的蜂膠產品約占蜂膠產品總量的半數以上，問題十分嚴重，而且愈演愈烈。更有甚者，有的蜂膠產品生產用原料摻假使雜，以油脂類物質冒充蜂膠，產品安全隱患極大。目前，

5、尚無保健食品原料蜂膠技術要求，項目組收集到有關部門頒布的9個蜂膠標準： 1、國家質量監督檢驗檢疫總局頒布的“中華人民共和國國家標準GB/T 19330-2008蜂膠標準”；2、國家質量監督檢驗檢疫總局頒布的“中華人民共和國國家標準GB/T24283-2009蜂膠標準”；3、國家質量監督檢驗檢疫總局頒布的“中華人民共和國國家標準GB/T 20574-2006蜂膠中總黃酮的測定方法”； 4、國家質量監督檢驗檢疫總局頒布的“中華人民共和國國家標準GB/T 23870-2009蜂膠中鉛的測定方法”；5、國家質量監督檢驗檢疫總局頒布的“中華人民共和國國家標準GB/T 19427-2002蜂膠中蘆丁、楊梅

6、酮、槲皮素、莰菲醇、芹菜素、松屬素、苛因、高良姜素含量的測定方法”；6、中國藥典2010年版蜂膠標準； 7、國內貿易部頒布的“中華人民共和國蜂膠行業標準SB/T 10096-92”；8、國家農業部頒布的“中華人民共和國蜂膠農業行業標準NY 5136-2002；9、國家農業部頒布的“中華人民共和國蜂膠農業行業標準無公害食品蜂膠NY 629-2002”；不同標準狀態氣味色澤滋味GBT 19330-2008 地理標志產品 東北黑蜂蜂膠不透明團塊或碎片，在35以上逐漸變軟，有粘性和可塑性，明顯的芳香味褐色、灰褐、暗綠、灰黑色等，有光澤有明顯的辛辣味GBT 24283-2009 蜂膠蜂膠團塊或碎片狀，不

7、透明，約30以上隨溫度升高逐漸變軟，且有粘性，有蜂膠所有的芳香氣味，燃燒時有樹脂乳香氣，無異味。棕黃色、棕紅色、褐色、黃褐色、灰褐色、青綠色、灰黑色等，有光澤微苦，略澀，有微麻感和辛辣感。蜂膠提取物斷面結構緊密，固體狀，約30以上隨溫度升高逐漸變軟，且有粘性，有蜂膠所有的芳香氣味，燃燒時有樹脂乳香氣，無異味。棕色、褐色、黑褐色，有光澤微苦，略澀，有微麻感和辛辣感。B/T 10096-1992 內易部蜂膠呈不透明固體團塊狀或碎渣狀，20-40時，膠塊變軟，有粘性，20'C以下膠塊變硬、脆。有芳香氣味，然燒時有樹脂乳香氣，棕黃、綜紅，有光澤一級棕褐帶青綠色，光澤較差二級灰褐色，無光澤三級口

8、嘗味苦、略帶辛辣味斷面結構緊密，呈黑大理石花紋狀斷面結構密實不一，呈砂粒狀斷面結構粗糙，有明顯的雜質NY5136-2002農業部無公害蜂膠不透明團塊或碎片，在35以上逐漸變軟，有粘性和可塑性有明顯的芳香味褐色、灰褐、暗綠、灰黑色等，有光澤有明顯的辛辣味NY/T 629-2002農業部蜂膠不透明的非晶狀團塊或碎片，10以下為固體，20'C-40逐漸變軟，有粘性和可塑性，60以上逐漸熔化為粘稠性流體有濃烈的芳香味，味強弱為分優、一、二及等外品暗綠、灰褐、灰黑或褐色等，分有較亮麗的光澤、有亮麗的光澤、有光澤、色澤灰暗用口嘗辛辣感極強、較強、有辛辣感、辛辣感較淡中國藥典2010年版為團塊狀或不

9、規則碎塊，20以下性脆，30以上逐漸變軟，發黏性。氣芳香多數呈棕黃色、棕褐色或灰褐色，具光澤。味苦，有辛辣感。表2 蜂膠不同標準理化指標比較表總黃酮含量氧化時間/s乙醇浸出物含量蜂蠟和75%乙醇不溶物含量碘值%酚類化合物含量%薄層鑒別或含量測定GBT 19330-2008 地理標志產品 東北黑蜂蜂膠8%2255（75%乙醇）45GBT 24283-2009 蜂膠蜂膠815224060蜂膠提取物17202295B/T 10096-1992 內易部蜂膠定性反應227555552535452512NY5136-2002農業部無公害蜂膠8%2255（75%乙醇）45NY/T 629-2002農業部蜂膠

10、15% 、10-15、10-5、55、5-10、10-22、2270、55-70、40-45、40（75%乙醇）30、30-45、45-60、60中國藥典2010年版2250白楊素、高良姜素TLC、HPLC測定現有的蜂膠相關標準主要從蜂膠形態、色澤、氣味、滋味、總黃酮含量、氧化時間、乙醇浸出物、白楊素、高良姜素含量等指標控制蜂膠質量，對蜂膠質量控制起到了一定作用。但缺少特征鑒別和特征成分的含量檢測指標等項目，可控性差，無法檢測其真假優劣，嚴重影響了產品的質量控制和監管的有效實施。二、蜂膠技術要求研究情況1. 儀器與試藥 HP-1100高效液相色譜儀（美國：包括1322A在線脫氣機、G1311A

11、四元梯度泵、G1315A二極管陣列檢測器、HP化學工作站），PBQ-薄層自動鋪板器（重慶南岸實驗電器廠）；SPU-自動噴霧顯色儀（日本島津）；CQ-250超聲波清洗器（上海船舶電子設備研究所），定量毛細管（美國Drummond公司），SimplicityTM型超純水系統（Millipore公司），硅膠G預制板、硅膠G高效薄層板（青島海洋化工有限公司）。 白楊素對照品（含量測定用，批號:111701-200501，中國藥品生物制品檢定所），高良姜素對照品（含量測定用，批號:111699-200501，中國藥品生物制品檢定所），蘆丁對照品（含量測定用，批號:100080-200707，中國藥品生物

12、制品檢定所），槲皮素對照品（含量測定用，批號:100081-200907，中國藥品生物制品檢定所），木犀草素對照品（含量測定用，批號:111520-200504，中國藥品生物制品檢定所），山奈素對照品（含量測定用，批號: 110861-200606，中國藥品生物制品檢定所），蜂膠對照品（自制），甲醇、乙腈為色譜純，其他試劑為分析純。 疑似摻假蜂膠原料：編號7、13、24；摻假蜂膠提取物：編號18、19、58、59、62、63、64、65、66；疑似假蜂膠：編號7、24、25；蘆丁粉：編號60；楊樹芽：編號61、92、93、94；楊樹葉：編號67、69、71、73、75、77、81、83、85；

13、楊樹枝：編號68、70、72、74、76、78、82、84；楊樹皮：編號80；巴西蜂膠原料：編號91；其他編號為蜂膠原料。狀態：經江西汪氏蜂蜜園有限公司多年來收樣觀察和采購經驗以及本課題組對60多批次樣品的觀察，多數蜂膠為團塊狀或不規則碎塊，10以下性脆，1030脆性不強，30以上逐漸變軟，因此，狀態定為：為團塊狀或不規則碎塊，10以下性脆，30以上逐漸變軟。色澤：經觀察60多批次樣品，多數蜂膠多數呈棕黃色、棕褐色或灰褐色，具光澤，與中國藥典2010年版蜂膠描述一致。氣味：經嗅聞60多批次樣品，蜂膠具芳香氣味，正品蜂膠氣味芳香，而摻假蜂膠氣無芳香味或有異味，因此，結合GBT 24283-200

14、9 蜂膠標準，氣味定為：氣芳香，無異味。滋味：中國藥典規定：味苦，有辛辣感。經品嘗40多批次樣品，參照GBT 24283-2009 蜂膠標準，滋味定義為：味微苦，略澀，有辛辣感和微麻感。蜂膠薄層色譜鑒別方法1：是為真偽鑒別而研究的薄層色譜鑒別方法。蜂膠主要成分有：球橙素、喬橙素、柚木楊素、白楊素、高良姜素、刺槐素、洋芹素、山奈素、鼠李素、柚木楊素、咖啡酸芐酯、芫花素，采用單一成分對照難以杜絕偽劣、造假現象，有人將楊樹葉、芽等粉末或者楊樹分泌物攙入蜂膠中，或者直接用楊樹芽提取物來假冒蜂膠提取物，所得到的劣質蜂膠在顏色、氣味、形狀上都與真蜂膠十分相似，給蜂膠的鑒別帶來了困難17。曹煒等18采用高效

15、液相色譜-二極管陣列檢測器-多極質譜聯用法分析了不同產地的30個蜂膠樣品以及2個楊樹芽乙醇提取物的化學成分，結果30個蜂膠樣品與楊樹芽乙醇提取物的成分十分相似，因此，建立蜂膠專屬性強的鑒別方法尤其重要，我們采用蜂膠對照品作為對照，對其進行了薄層鑒別研究。通過綜合考察，確定薄層色譜條件為，采用預制硅膠板，以甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸（1030.5）為展開劑，噴以1%三氯化鋁乙醇試液，熱風吹干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，特征斑點Rf值適中，結果見圖1。圖1. 蜂膠TLC圖1、12、13、20、29、31、36、37、46、47、53

16、為蜂膠樣品48（蜂膠對照品），18、58為假蜂膠提取物，7、24、61（楊樹芽）。蜂膠薄層色譜鑒別方法2：是為本次提高技術要求而研究的薄層色譜鑒別方法。取鑒別1項下的供試品溶液和對照品溶液各0.5ml，分別加入0.25% 5-二甲氨基萘磺酰氯丙酮溶液0.5ml，用三乙胺調pH至9-9.5，放置2-3小時，分別作為供試品溶液和對照品溶液。照薄層色譜法（中國藥典2010年版附錄 B）試驗，吸取上述二種溶液各2l，分別點于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯冰醋酸（91）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光（365 nm）燈下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。圖2. 蜂膠TL

17、C圖43、44、45、46、47、49、50、51、52、53、54、55、56、57為蜂膠樣品，48（蜂膠對照品），58、59為假膠，60為蘆丁，61楊樹芽。干燥失重：中國藥典2010年版蜂膠項下規定干燥失重不得過2%，經測定，蜂膠水分在不同季節波動較大一般在1.2至4.5之間，結果見表5，因此，規定干燥失重不得過4.0%。總灰分、酸不溶性灰分：按中國藥典2010年版蜂膠項下的方法測定，總灰分在1.0%4.5%之間，酸不溶性灰分在0.2%4.0%之間，因此，規定總灰分不得過8.0%，酸不溶性灰分不得過6.0%表5 不同批次蜂膠有關理化指標測定結果4.082.12蜂膠樣品463.661.25蜂

18、膠樣品503.781.41蜂膠樣品514.171.29蜂膠樣品524.082.06蜂膠樣品533.671.88蜂膠樣品544.351.16蜂膠樣品553.461.99蜂膠樣品563.282.21蜂膠樣品57氧化時間：按中國藥典2010年版蜂膠項下的方法測定，氧化時間均在22秒之內，結果見表6，因此規定氧化時間不得過22秒。乙醇浸出物含量：中國藥典2010年版蜂膠項下規定醇浸出物含量為50%，經江西汪氏蜂蜜園有限公司近幾年大生產提取數據和本課題組浸出物測定數據表明，蜂膠醇浸出物含量均在35%52%之間，結果見表6，因此，規定醇浸出物含量大于或等于38.0%。表6 不同批次蜂膠醇浸出物、氧化時間測

19、定結果19蜂膠樣品46標志性成分（白楊素、高良姜素）TLC：按中國藥典一部2010年版蜂膠藥材項下的鑒別方法，采用白楊素、高良姜素對照品作對照，對蜂膠進行薄層色譜鑒別有一定意義，因此，本技術要求采用該鑒別方法。標志性成分（白楊素、高良姜素）含量：按中國藥典2010年版蜂膠項下含量測定方法，測得各批次含量白楊素在1.63.8%之間，高良姜素在0.853.42%之間，結果見表8，因此，規定白楊素含量不得少于2.0%，高良姜素含量不得少于1.0%。表8 不同批次蜂膠中楊素、高良姜素測定結果1.49蜂膠樣品46鉛、砷、汞：分別按GB 5009.12、GB/T 5009.11、GB/T 5009.17規

20、定的方法測定，不同批次有毒有害物質測定結果見表10，結果顯示，不同批次重金屬鉛含量測定結果相差較大，根據實測結果及日本保健食品原料手冊中乙醇提取液，粉末制品規定Pb 20mg/kg的要求，而由于蜂膠并不直接食用而是提取物投料的現狀（原料蜂膠鉛含量高，經過提取后，提取物中基本不含鉛），規定蜂膠鉛含量每公斤少于或等于20 mg，砷含量實測值在0.10.7 mg/kg之間，因此，規定砷含量每公斤少于或等于1.0 mg，汞含量參照無公害蜂膠標準NY5136-2002，規定蜂膠汞含量每公斤少于或等于0.3 mg。表10 不同批次有毒有害物質測定結果蜂膠樣品46表11 不同批次有毒有害物質測定結果蜂膠樣品

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25、照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（中國藥典2010年版附錄 B）試驗，吸取上述兩種溶液各5l，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-丁酮（9.40.30.3）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。3、取鑒別1項下的供試品溶液0.5ml，加入0.25% 5-二甲氨基萘磺酰氯丙酮溶液0.5ml，用三乙胺調pH至9 9.5，放置23小時，作為供試品溶液。照薄層色譜法（中國藥典2010年版附錄 B）試驗，吸取上述溶液2l，點于聚酰胺薄膜上，以甲苯冰醋酸（91）為展開劑，展開，取出