1、凍干皮內注射用卡介苗制造及檢定規程本品系卡介菌經培育后凍干制成。用于預防結核病。1菌種1.1制造卡介苗的菌種，應由中國藥品生物制品檢定所分 發或經同意。嚴禁使用通過動物的菌種制造卡介苗。1.2 如果采用次代種子批，單批收獲培養物的總代數不得 超過12代（包括在馬鈴薯培養基上培育的代數與在液體蘇通培 養基上的代數）。1.3 菌種檢定新收到的菌種或新制備種子批應進行下列檢定。1.3.1 培養特性卡介菌在蘇通培養基上發育良好。培育溫度在3739 C之間。抗酸染色應為抗酸桿菌。 在蘇通馬鈴薯培養基上發育的卡介 菌應是干皺成團略呈淺黃色。 在牛膽汁馬鈴薯培養基上為淺灰色 粘膏狀菌苔。在雞蛋培養基上有突起

2、的皺型和擴散型兩類菌落， 且帶淺黃色。在蘇通培養基上卡介菌應浮于表面，為多皺微帶黃 色的菌膜。毒力試驗用結素試驗(PPD 100IU)陰性，體重300400g的同性健 康豚鼠4只，各腹腔注射1ml菌液(5mg/ml),每周稱體重，4 5周后解剖檢查，大網膜上可出現膿皰，腸系膜淋巴結及脾可能 腫大，肝及其他臟器應無肉眼可見的病變。1.3.3 毒力試驗用結素試驗(PPD 100IU)陰性，體重300400g的同性健 康豚鼠6只，于肌內側皮下各注射 1ml菌液(10mg/ml)，注射 前稱體重，注射后每周觀察 1次注射部位及局部淋巴結的變化。每2周稱體重1次。6周時解剖3只，滿3個月將另3只豚鼠解

3、劑，檢查各臟器應無肉眼可見的結核病變。若有可疑病灶時，應 作涂片和組織切片檢查，并采取部分病灶磨碎，加少量生理鹽水 混勻，皮下注射2只豚鼠。若證明系結核病變，該菌種即應廢棄。 試驗經過詳細記錄備查。若未滿3個月試驗豚鼠因其他病患死亡 應解剖檢查，依上法處理。若死亡 2只以上應重試。免疫力試驗用原代種子批以1/100人份的劑量免疫豚鼠，以103104 強毒人型結核分枝桿菌感染，免疫組與對照組動物的病變指數及 脾臟毒菌分離數的對數值經統計學處理，應有顯著差異。如無條件，可送中國藥品生物制品檢定所進行。1.4菌種保存凍干菌種保存于28 °C。2菌苗制造2.1 卡介苗制造室必須與其他生物制品

4、部門及實驗室分 開。所需用具如高壓鍋、冰箱及玻璃器皿等，均須單獨設置并專 用。卡介苗制造、包裝及保存過程均須避光。卡介苗制造的工作人員及經常進入卡介苗制造室的人員，必須身體健康，經X線檢查無結核病，且以后每年經 X線檢查1 2次，可疑者暫不在卡介苗制造室工作，其檢查記錄必須保存備 查。2.2制造用培養基生產用培養基不得含有能使人產生毒性或變態反應的物質。 培養基所用的原料應符合中國生物制品主要原材料試行標準 規定。2.3 菌種傳代與培養凍干菌種在蘇通馬鈴薯培養基、膽汁馬鈴薯培養基以及液體 蘇通培養基上每傳一次為一代。 馬鈴薯培養基上培育的菌種放冰 箱保存不超過2個月。用于生產菌苗的培養物的總代

5、數不超過 12代。2.4 原液制造241收集培養瓶應逐瓶檢查，若有污染、濕膜、混濁等情況應廢棄。收集菌膜壓干，移入盛有不銹鋼珠瓶內，鋼珠與菌體的比例應根 據研磨機轉速控制在一適宜的范圍，并盡可能在低溫下研磨。 加入適量無致敏原保護液稀釋成一定濃度的原液。2.4.2 稀釋用中國藥品生物制品檢定所發給的凍干卡介苗參考比濁標準，以分光光度法或其他適宜方法測定原液濃度，用保護液將原液稀釋成1.0mg/ml。243 純菌試驗用于制造卡介苗的培養物、原液、以及稀釋后的菌苗均應按生物制品無菌試驗規程抽樣做純菌試驗。2.5 菌苗分批用同一代菌種同時制造的菌苗為1批，稀釋為數瓶者，按瓶分亞批。2.6 分裝分裝過

6、程中勿使苗混合均勻。每 10人份卡介苗應為0.5 士 O.lmg。3凍干菌苗原液分裝后應立即進行凍干。干燥完畢后立即進行真空 封口。亦可充氮封口。4成品檢定4.1 物理化學檢查凍干卡介苗應為白色疏松體或粉末狀。 加入稀釋液后，應于 3分鐘內完全溶解成均勻懸液。 殘余水分不應超過3%包裝前應 每支安瓿檢查真空，不合格的安瓿應廢棄。4.2 鑒別試驗每批菌苗須做涂片檢查，抗酸染色應是抗酸桿菌。4.3 純菌試驗每亞批菌苗抽樣按生物制品無菌試驗規程進行。4.4 活菌計數同一代菌種制造的各批凍干卡介苗應抽1批做干前活菌計數。同一批菌種制造的各亞批菌苗均應做干后活菌計數，抽安瓿5支稀釋混合。凍干菌苗活菌數應在100萬/mg以上。可與熱穩定性試驗同時進行。4.5 熱穩定性試驗取凍干后菌苗放置37 C 28天進行加速失活試驗，測定活菌 數，與4C保存的同一批菌苗同時進行比較，計算降低的百分離。加溫放置制品的活菌數應不少于冷藏菌苗的2%但不得低于20萬/mg。此試驗可與參考菌苗同時進行（參考菌苗加入試驗的目 的為檢查培養基的質量）。每一機柜凍干菌勒應抽樣進行此項試 驗。4.6 安全試驗同一代菌種生產的各批凍干卡介苗應抽1個亞批做安全試驗。用結素試驗（PPd 10IU）陰性，體重300400g的同性健 康豚鼠6只。每只皮下注射相當于 50人份的凍