1、    八例范可尼貧血患兒的細胞遺傳學研究        【摘要】目的研究范可尼貧血(FA)的臨床學、血液學和細胞遺傳學的特征。方法培養FA患兒的外周血淋巴細胞并以絲裂霉素C(MMC)誘導，以計數染色體自發斷裂和誘發斷裂，并計數姊妹染色單體互換(SCE)。結果FA患兒的臨床和血液學的表現是多樣化的。自發性和MMC誘發之染色體斷裂明顯高于正常。結論由于FA遺傳學上的異質性，其遺傳表型也多樣化。因此，染色體斷裂研究是一個診斷FA的非常重要的方法，基因互補分析能證實患者所攜帶的是何

2、互補群。【關鍵詞】范可尼貧血染色體不穩定性先天畸形致斷裂劑交連物CYTOGENETIC STUDY IN EIGHT CASES OF FANCONI ANEMIAZheng Yi*【Abstract】ObjectiveTo study the clinical, hematological and cytogenetical characteristics in Fanconi anemia(FA).MethodsCulture the peripheral lymphocytes with Mitomycin C(MMC) induction to count the chromosome

3、 breakages and to count the sister chromatid exchanges(SCE) in FA.ResultsThe clinical and hematological manifestations in FA varied at all.Spontaneous chromosome break and MMC induced break in FA were significantly higher than those in normal. Spontaneous and induced SCE were also higher in FA.Concl

4、usionOwing to genetic heterogeneity in FA, the phenotypes in FA are diversified also. So, chromosome breakage study is a very important method in the diagnosis of FA, and gene complementation analysis may identify which complementation group the patient carries.【Key words】Fanconi anemiaChromosome in

5、stabilityCongenital anomalyClastogenic agentsCross-linker范可尼貧血(Fanconi's anemia,FA)是常染色體隱性遺傳病，患者的外周血淋巴細胞培養或成纖維細胞培養發現染色體有高度不穩定性，自發斷裂增加，對一些DNA交連物質(cross-linkers)如MMC，二環氧丁烷(diepoxybutane，DEB)等烷化劑有高度敏感性，能誘發染色體改變，19951998年，我們對部分原因不明的全血細胞減少患兒做了外周血淋巴細胞染色體檢查和骨髓檢查(骨髓未做染色體檢查)，發現8例患兒自發性染色體斷裂增加，MMC誘發試驗出現大量染

6、色體改變和SCE增加，報告如下。1材料與方法1.1研究對象8例患兒臨床表現和血液學資料見表1。1.2方法按常規方法，每瓶培養基中分別加入0.2ml患兒外周血，37培養24小時后，分為4組作不同處理。(1)自身對照組，未加MMC和/或5-溴脫氧尿嘧啶核苷(BUdR)；(2)誘變組1：加入日本產MMC，最終濃度為80ng/ml；(3)誘變組2：加入BUdR，最終濃度為10g/ml，避光；(4)誘變組3：加入MMC及BUdR濃度同上，避光。4組均37繼續培養48小時，常規制片，鏡檢，每組各計數30個細胞。以同樣方法設正常人10例，求其平均值作為對照。2結果2.1臨床表現男女比為44，出現貧血和出血的

7、年齡均在510歲之間，貧血發展過程緩慢。身高體重都低于正常，隨著年齡增長體格發育落后更為突出。4例皮膚有牛奶咖啡斑，1例有面部畸形、室間隔缺損(VSD)和甲狀腺功能低下(HT)，3例有小頭畸形(ME)。腹部B超、上肢X線片各查1例未見異常。兩例為同胞兄妹，均合并IDDM，因多次酮癥酸中毒和嚴重貧血而住院治療，其父母為近親婚配(染色體檢查未發現自發染色體斷裂)。 表1FA臨床和血液學表現Tab 1Clinical and hematologic manifestations of FACaseNo.(例號)Clinical manifestations(臨床表現)Hematologic exam

8、ination(血液學檢查)Sex(性別)Age(年齡)(year)Height(身高)(cm)Weigth(體重)(kg)HC(頭圍)(cm)Cafe aulait spots(咖啡斑)Complications(合并癥)Peripheral blood(外周血)Bone marrow examination(骨髓象)Hb(g/L)MCV(fl)MCH(pg)BPC(109/L)LC(%)ANC(109/L)M/ELCM(%)RBC(N/S)1male10.5118.52251.5-IDDM521124036431.50.35160.07MC2female610214.251-IDDM211

9、0026.129412.52.5152.05MC3female6.5-16-+-45963722581.671.8150.50MC4male6-20-+VSDHT421103248475.081351.50MC5female12-29-+-44914220770.480.7170.00MC6female121312749-ME501193420750.81318.54MC7male9-2548-ME541093418401.21.3171.00MC8male13-3048+ME941184032392.70.2182.50MCHC:head circumference(頭圍), LC:lymp

10、hocyte(淋巴細胞)，ANC：absolute neutrophil cell(中性粒細胞絕對值)，M/E：myeloid/erythorid(粒比紅)，M：megakaryocyte(巨核細胞)，N/S：number/slide(個/片)，IDDM：Insulin dependent diabetes millitus(胰島素依賴性糖尿病)，MC：macrocyte(巨紅細胞)，VSD：ventricular septal defect(室間隔缺損)，HT：hypothyroidism(甲狀腺功能降低)，ME：microencephaly(小頭畸形)2.2血液學表現外周血全血細胞減少，貧

11、血為重度(Hb60g/L)，MCV和MCH偏高，RBC大小不等，大細胞偏多，偶見巨大嗜多色RBC，中心淺染區不擴大，ANC降低。骨髓檢查：骨髓增生減低，增生旺盛者主要為LC，比值高達50%70%。粒、紅、巨核增生減低。晚紅偏大，偶見巨晚紅，花瓣樣晚紅，雙核晚紅。例4外周血WBC增加，單核細胞(MC)增加達13%19%，原幼MC 6%，骨髓為病態造血，原幼MC達17%，肝、脾浸潤，符合骨髓增生異常綜合癥-慢性單核細胞白血病型(MDS-CMMOL)。2.3染色體檢查患兒染色體有多種改變，有單體互換，雙著絲粒，三射體和四射體(tri and quadriradial cross-configurat

12、ion)，內復制(endoreduplication)，染色體單體斷裂和裂隙(break and gap)，尤以斷裂和裂隙較多。患兒染色體自發斷裂較正常對照高，以濃度為80ng/ml的MMC誘發，斷裂猛增，遠高于正常對照和自發斷裂，BUdR試驗SCE，自發SCE數較正常對照稍高，經MMC誘發后亦較正常對照和自發SCE數增加(表2)。 表28例FA患兒染色體斷裂試驗Tab 2Chromosome breakage test of FA patientsCase No.(例號)Spontaneous(N/30 cells)自發(次/30個細胞)MMC induced(N/30 cells)MMC誘

13、發(次/30個細胞)Spontaneous SCE(mean/cell)自發SCE(平均次/細胞)MMC induced SCE(mean/cell)MMC誘發SCE(平均次/細胞)Break(斷裂)Gap(裂隙)Break(斷裂)Gap(裂隙)143201811.6200231231711.020031612-10.0200422-582-6rare-23-9-7rare-23-8-75-8.8-Control(對照)00467.613.03討論本組患兒體格形態(體態)最常表現為矮小和牛奶咖啡斑，也是文獻報道中最常見的畸形，約占60%1，2。其它如骨骼、面部、泌尿生殖系、神經、消化、心血管畸

14、形也常見3，本組發現面部畸形合并VSD和HT 1例，ME 3例。例1、例2為父母近親婚配生下的親兄妹，同患FA和IDDM，有人作糖尿病流行病學調查4，發現FA患者的親屬中，糖耐量試驗異常、糖尿病的患病率高，并認為FA患者攜有糖尿病易感基因。近年來用細胞融合雜交分析發現FA至少有5個遺傳互補群：FAAC，FABC，FACC，FADC，FAEC5，6，有的做了基因的染色體定位，如FACC位于16q24.36，FACC位于9q22.37，FADC位于11q238。FA患者合并糖尿病和其家族中糖尿病患病率高的發現提示，FA的某些遺傳互補群可能與某些類型的糖尿病在遺傳學上有一定的關聯，此點尚待今后的研究

15、闡明。內分泌研究發現某些FA患者的生長激素降低，本組1例T3、T4降低，TSH正常表明為HT。FA的血液學特點：貧血出血多起病于510歲，全血細胞減少呈緩慢進行性(慢性再障)，BPC減少先出現則易誤診為特發性血小板減少性紫癜(ITP)。與ITP不同的是骨髓內巨核細胞減少或消失。外周血RBC的特點是大小不等，體積偏大。巨大RBC偏多，中心淺染區不擴大。骨髓示骨髓造血功能減低，特別是巨核細胞減少，有時見到骨髓有核細胞增生活躍實為LC比值增加所致，紅系有巨幼樣變和病態造血3，需與MDS鑒別。FA的血液學也可首先表現為或后來轉變為MDS或AML9，例4查體肝脾大，血液學也符合MDS-CMMOL。FA確

16、診有賴于染色體自發斷裂分析和致斷裂劑(clastogenic agents)對染色體的誘發斷裂試驗，FA染色體改變有單體互換，三射體，四射體，雙著絲點，斷裂，裂隙及內復制，據IFAR報告，自發染色體斷裂FA組為0.021.9/細胞(平均0.27)，非FA組為00.12/細胞(平均0.02)，經DEB作用后，染色體斷裂，FA組為1.3023.90/細胞(平均8.96)，非FA組為00.36/細胞(平均0.06)2。Cervenk等10以交連物MMC作實驗，結果與IFAR相似。本研究結果亦顯示自發斷裂FA高于對照，MMC誘發后斷裂明顯高于對照和自發斷裂。SCE分析是檢驗染色體損傷的敏感方法，本組結

17、果FA患者SCE略高于正常對照，加入MMC后SCE顯著增加。總之，FA由于遺傳學上的異質性，現已知至少有5個遺傳互補群，故在遺傳表型上也顯示多樣化，如體態發育異常的多樣化和血液學異常的多樣化，這些異常可單獨出現，也可多種組合而聯合出現，如先天畸形合并再障就是經典的FA，如體態無異常則僅有再障即稱為Estren-Dameshek綜合征。若體態異常而無或晚出現再障則有賴染色體檢查作出早期診斷。由于染色體的不穩定性和易受致斷裂劑的損傷，故FA有罹患各種實體瘤的潛在素質11。腫瘤出現可不伴體態和血液異常。因此應對先天畸形，慢性再障，骨髓增生異常綜合征，急性髓細胞性白血病和實體瘤的患兒進行染色體檢查，則

18、可能發現更多的染色體不穩定病例。再者，對這些患者應慎用各種交鏈藥物，以防對患者的染色體造成更大損傷。 作者單位：750004銀川，寧夏醫學院附屬醫院兒科(鄭漪、鄭傳經、石林)，遺傳學教研室(焦海燕、彭亮、墻克信)參考文獻1Giampietro PF, Adler-Brether B, Verlander PC, et al. The need for more accurate and timely diagnosis in Fanconi anemia: A report from the international Fanconi anemia registry (IFAR). Pedia

19、trics, 1993,91(6)1116-1120.2Auerbach AD, Rogatko A, Schroader-Kuth TM. International Fanconi anemia registry: Relation of clinical symptoms to diepoxybutane sensitivity.Blood, 1989,73(2)391-396.3Alter BP, Young NS. Fanconi's Anemia. In:Nathan DG, Oski GA. eds. Hematology of infancy and childhood

20、. Vol 1.4th ed. Phil:W.B.Saunders Co, 1993.237-249.4Morrel D, Chase CL, Kupper LL, et al. Diabetes mellitus in atatixa telangiectasia, Fanconi anemia, xeroderma pigmentosum, common variable immune deficiency and severe combined immune deficiency families. Diabetes, 1986,143-147.5Joenje H, Lo Tenfoe

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