1、兩種洗板方法在ELISA中的應(yīng)用分析         【摘要】  目的：探討酶聯(lián)免疫試驗(yàn)(ELISA)中的洗板技術(shù)，試圖找到一種簡單、高效、經(jīng)濟(jì)、實(shí)用、可靠的ELISA洗板方法。方法：對753例臨床體檢乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的標(biāo)本，分別用手工法和全自動洗板機(jī)法兩種方法進(jìn)行洗板，進(jìn)行組間對比分析；將弱陽性標(biāo)本選出，重新檢測2次，分別用兩種方法洗板，看看弱陽性是否因洗板方法不同引起。結(jié)果：753例用ELISA方法檢測HBsAg試驗(yàn)中，用手工法洗板和用洗板機(jī)洗板，經(jīng)2檢驗(yàn)，P0.05，兩種洗板方法差異無

2、顯著性；18例弱陽性標(biāo)本檢測中，洗板方法的不同，不是造成假陽性的根本原因。結(jié)論：兩種洗板方法無差別，在ELISA實(shí)驗(yàn)中，手工法可以代替洗板機(jī)法洗板。手工法簡單、高效、實(shí)用，應(yīng)可規(guī)范推廣。 【關(guān)鍵詞】  ELISA洗板；洗板方法；弱陽性Comparison between Two Cleaningmethods on ELISAAbstract: Objective To investigate the cleaningtechnology of the ELISA. Try to find a simple higheffective and utility cleaningtrou

3、ghs method. Methods To use handle method and autowashingmachine method to clean the troughs of HBsAg with ELISA in 753 healthchecking peoples, Compared between the two cleaningmethods; Meanwhile, to select weak positive samples out and test repeatedly two times, to clean the troughs with the two met

4、hods, whether does it exist difference between the two methods.whether does it cause the fake positive by the cleaning methods. Results There is not significant difference(P0.05)to clean troughs with the two cleaningmethods in testing HBsAg with ELISA in 753 cases,The cleaningmethod isnt the real ca

5、use of the fake positive in testing 18 serum samples of weakpositive. Conclusion Washing with the two cleaningmethods, the result has not difference.the washmachine method can be substituted by the handle method. the handle method is simple, higheffective and practice.Key words: ELISA Cleaningtrough

6、s; Cleaningmethods;Weakpositive在酶聯(lián)免疫試驗(yàn)中，洗板是非常重要的過程。酶聯(lián)免疫試驗(yàn)(ELISA)洗滌過程雖不是一個反應(yīng)過程，但卻也決定著實(shí)驗(yàn)的成敗1。ELISA就是通過洗滌來達(dá)到分離游離和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的，通過洗滌以清除殘留在微孔板中未能與固相抗原或抗體相結(jié)合的物質(zhì)，以及在反應(yīng)過程中的非特異性吸附于固相載體上的干擾物質(zhì)。聚苯乙烯對蛋白質(zhì)的吸附是普遍的，在ELISA測定的反應(yīng)過程中應(yīng)盡量避免非特異性吸附，洗滌時又應(yīng)將這些非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌掉。在ELISA操作中，洗滌是非常關(guān)鍵的，應(yīng)引起操作者的高度重視。我們對753例用ELISA方法檢測乙型肝炎表面抗原

7、(HBsAg)的洗板過程進(jìn)行了檢測，采用我們自創(chuàng)的人工洗板法和全自動洗板機(jī)洗板對比試驗(yàn)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。1  材料和方法1.1  材料1.2  方法         1.3  統(tǒng)計(jì)方法  數(shù)據(jù)分析使用SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)軟件統(tǒng)計(jì)處理。2  結(jié)果2.1  兩種洗板方法HBsAg檢測結(jié)果比較  753例檢測標(biāo)本中，兩種方法洗板以后，手工法陽性52例，洗板機(jī)法陽性53例，經(jīng)2檢驗(yàn)，2=0.01，P0.05，兩種洗板方法差異無顯著性，結(jié)果見

8、表1。表1  753例HBsAg(手工法和洗板機(jī)法洗板)檢測結(jié)果（略）注：組間比較，2=0.01，P0.05。2.2  18例弱陽性標(biāo)本的檢測  用兩種方法洗板，結(jié)果陽性15例，陰性3例為假陽性；弱陽性率占753例樣本的2.39%(18/753)，假陽性占0.39%(3/753)。2.3  3例弱陽性標(biāo)本  經(jīng)重新處理標(biāo)本，重新檢驗(yàn)，用兩種方法進(jìn)行洗板檢測，結(jié)果3例都為陰性，而未出現(xiàn)1例陽性，確定3例為假陽性，應(yīng)排除。3  討論根據(jù)ELISA方法檢測原理可知洗滌是為了去除未結(jié)合的多余的酶標(biāo)物質(zhì)，但又不能把結(jié)合的酶標(biāo)物質(zhì)洗脫，它即簡單又

9、重要，即可用手工法也可用機(jī)械法。筆者用ELISA法檢測了753例體檢血清標(biāo)本的HBsAg，分別用我們自創(chuàng)的手工法洗板和全自動洗板機(jī)法洗板，進(jìn)行組間比較，P0.05，結(jié)果差異無顯著性。也就是說可用手工法代替洗板機(jī)法洗板，兩種洗板法得出的結(jié)果都可靠，我們認(rèn)為用手工法洗板更加簡單、高效，可提高工作效率。筆者對18例弱陽性標(biāo)本進(jìn)行了重復(fù)檢測，并用手工法和洗板機(jī)法兩種方法洗板測定，其中有3例弱陽性標(biāo)本經(jīng)重復(fù)檢測后為陰性，確定為假陽性，假陽性占753例樣本中的0.39%，假陽性往往顯色都較弱，表現(xiàn)為弱陽性。弱陽性的出現(xiàn)，主要是由于標(biāo)本沒有處理好造成，伴有溶血或其他因素引起血清渾濁較為常見，而這些樣品在HB

10、sAg的ELISA檢測中常出現(xiàn)假陽性2，纖維蛋白、紅細(xì)胞、標(biāo)本溶血是弱陽性發(fā)生的主要原因。尤其是纖維蛋白可非特異性地吸附在載體上，并吸附酶標(biāo)抗體，難于徹底洗脫，因此，標(biāo)本要充分凝固，離心要充分，使血清分離良好，吸樣時不要吸到紅細(xì)胞。如標(biāo)本溶血較嚴(yán)重，建議重新取樣，因?yàn)檠t蛋白中含有血紅素基團(tuán)，其有類似過氧化物酶的活性，在以辣根過氧化物酶(HRP)為標(biāo)記酶的ELISA測定中，如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度過高，則其很容易在溫育過程中吸附于固相上，從而與隨后加入的HRP底物反應(yīng)顯色3。在假陰性方面，753例檢測中，都做雙孔陽性對照，結(jié)果兩種洗板方法都未出現(xiàn)陽性對照陰性結(jié)果的現(xiàn)象，可見手工洗板法不會出現(xiàn)假

11、陰性的現(xiàn)象。用手工法洗板經(jīng)濟(jì)、實(shí)用，只需一個臉盆，一個特建的洗滌池，成本非常低，并可長期使用，其經(jīng)濟(jì)實(shí)用不言而喻；而全自動洗板機(jī)，價格昂貴，對于基層醫(yī)院是個不小的負(fù)擔(dān)；對于大醫(yī)院或繁忙的醫(yī)院，則要多臺同時使用，且容易堵塞、出故障，給工作帶來不便，其維護(hù)、保養(yǎng)、維修也是一個不小的負(fù)擔(dān)。在控制感染性醫(yī)療廢物方面，只要嚴(yán)格要求，將使用后的洗滌液也倒入洗滌池之中，按2 500 mg/L的濃度，加入健之素，浸泡24 h，然后收集，交醫(yī)療廢物處理公司處理，則完全可以控制感染。沖板用的自來水，只要符合國家自來水供水標(biāo)準(zhǔn)，便可使用，但洗板開始前，應(yīng)打開自來水開關(guān)，讓自來水空流1 min2 min，以使沉積的臟水流去。遇自來水混濁時，不可使用。綜上所述，在ELISA方法檢驗(yàn)當(dāng)中，手工法洗板和洗板機(jī)洗板，沒有本質(zhì)上的差別，兩種方法結(jié)果都可靠。但手工法簡單、經(jīng)濟(jì)、高效、實(shí)用，值得