1、細胞生物學實驗教學大綱09面向?qū)I(yè)：生物科學、生物技術10實驗課程的教學任務、要求和教學目的1.1 1 教學任務細胞生物學是生命科學的一個重要分支，是生物學相關專業(yè)重要的基礎必修課。細胞生物學實驗使學生了解和掌握本學科的主要研究方法和技術；鞏固和加深基礎理論知識的學習，提高學生分析問題、解決問題的能力；培養(yǎng)學生創(chuàng)新思維和動手能力，使學生養(yǎng)成良好的科研習慣，全面提高學生的生物學基本實驗技能。1.2 2 教學要求要求學生在實驗前參加本課程原理與技術講授，認真預習與準備，參加基本實驗技術訓練；實驗中要遵守操作規(guī)程，掌握細胞生物學的基本操作和基本技能（特別是細胞生物學實驗石蠟切片的制作及染色技術，動物

2、細胞培養(yǎng)及細胞融合，植物組織培養(yǎng)等基本實驗操作技術等），并做好實驗記錄；實驗后要整理好物品，及時處理實驗數(shù)據(jù)，獨立撰寫實驗報告，積極參加課后討論。1.3 3 教學目的培養(yǎng)學生實際動手能力及觀察問題和解決問題的能力，同時掌握和初步了解細胞生物學實驗的基本技術和方法，如涂片、鋪片、徒手切片、細胞傳代等，并且進行創(chuàng)新實驗的設計。11 學生應掌握的實驗技術及實驗能力通過本實驗課程，學生應熟練掌握血涂片的制備法，小鼠腸系膜鋪片法；徒手切片法；細胞活體染色技術；石蠟切片的制作技術及特征性染色方法等基本原理及操作技術；掌握熒光顯微鏡的使用；掌握動物細胞培養(yǎng)及細 胞融合、細胞凋亡、細胞生理性實驗；植物組織培養(yǎng)

3、及植物原生質(zhì)體的分 離、融合、體細胞雜交、細胞器的分級分離等基本原理及操作技術。12 .開設實驗項目開設實驗項目一覽表實驗項目編R實驗項目名稱實驗類型實驗性質(zhì)實驗學時每組人數(shù)首次開出年月34300501徒手切片、石蠟切片、冷凍切片的制作技術驗證性必做4120130934300502細胞培養(yǎng)無菌操作技術驗證性必做4120130934300503細胞的凍存及復蘇技術驗證性必做4120130934300504植物組織培養(yǎng)無菌操作及觀察技術驗證性必做4120130934300505徒手切片、裝片、涂片的制作及細胞結(jié)構(gòu)的觀察綜合性選做4119930334300506石蠟切片的制備及細胞的染色觀察綜合性必

4、做26119990334300507細胞器的熒光標記技術綜合性選做4220040334300508植物組織培養(yǎng)，植物細胞懸浮培養(yǎng)及植物原生質(zhì)體的分離培養(yǎng)綜合性選做4220010334300509冷凍切片技術驗證性選做4220160334300510免疫膠體金技術綜合性選做4220030334300511動物細胞的融合綜合性選做4120050334300512動物細胞傳代與原代培養(yǎng)綜合性必做12120080334300513細胞器的分離與鑒定綜合性選做4120070334300514細胞生理性質(zhì)實驗綜合性選做4120090934300515細胞凋亡過程中 DNA及蛋白檢測實驗綜合性選做42201

5、60334300516利用RT-PCR技術檢測細胞中 3-actin的表達綜合性選做4220100934300517哺乳動物早熟染色體凝聚誘導綜合性選做4220110934300518設計觀察患病（糖尿病或肝癌）小鼠肝腎細胞內(nèi)多糖的變化設計性選做2120120334300519設計觀察藥物（四氯化碳或乙醇）對肝臟細胞損傷后蛋白質(zhì)的變化測定設計性選做2120130934300520利用植物培養(yǎng)技術的實驗原理設計能夠具有潛在應用價值的實驗方案設計性選做21201009注：在設計性實驗中，學生可自選其一徒手切片、石蠟切片、冷凍切片的制作技術實驗。包括徒手切片操作技巧，制作出易于觀察細胞形態(tài)及細胞組成

6、成分的切片；包括切片機的操作要 領，切片的制作技巧，制作出符合 HE染色、PAS染色、Feulgen染色的石蠟 切片、冷凍切片。細胞培養(yǎng)無菌操作技術實驗。包括無菌操作臺、臭氧發(fā)生器、二氧化碳 培養(yǎng)箱的使用及維護保養(yǎng)技術；培養(yǎng)基的配制及滅菌的方法；細胞室處理及 檢測技術。細胞的凍存及復蘇技術實驗。包括程序降溫儀、細胞凍存盒、液氮罐的 使用，了解細胞凍存、細胞復蘇的注意事項，細胞凍存及復蘇技術。植物組織培養(yǎng)無菌操作及觀察技術實驗。包括植物組織培養(yǎng)所需培養(yǎng)基的配制，培養(yǎng)時無菌操作，培養(yǎng)過程中及培養(yǎng)結(jié)果的觀察，植物組織培養(yǎng)無 菌操作及觀察技術。徒手切片、裝片、涂片的制作及細胞結(jié)構(gòu)的觀察實驗。包括血涂片

7、的制備；紅細胞及各種白細胞的形態(tài)觀察；顯微鏡測微尺的使用；植物細胞的基本結(jié)構(gòu)觀察；細胞后含體的觀察和鑒別；小鼠腸系膜鋪片；花生、向日葵徒手切片及細胞中脂類的染色，脂肪顯示技術；中性紅染液染小麥或黃豆幼根根尖液泡系；詹納斯綠B 溶液染人口腔粘膜上皮細胞線粒體；線粒體、液泡系的活細胞術。石蠟切片的制備及細胞的染色觀察實驗。包括制作石蠟切片，HE 染色觀察；PAS反應，觀察多糖在細胞中的移動；Feulgen染色，觀察DNA染色結(jié)果。細胞器的熒光標記技術實驗。包括熒光顯微鏡的使用；羅丹明標記的鬼筆環(huán)肽染色；超聲波法制備脂質(zhì)體；凍融法制備脂質(zhì)體；冷凍干燥法制備脂質(zhì)體；脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術。植物組織培養(yǎng)，植物細

8、胞懸浮培養(yǎng)及植物原生質(zhì)體的分離培養(yǎng)實驗。掌握植物組織培養(yǎng)；植物細胞的懸浮培養(yǎng)；植物原生質(zhì)體分離和培養(yǎng)；PEG方法誘導植物原生質(zhì)體融合；根據(jù)親本原生質(zhì)體的形態(tài)標志來鑒別雜種細胞。冷凍切片技術實驗。包括超薄切片制作；掃描電子顯微鏡樣品制備。免疫膠體金技術實驗。包括制備膠體金，標記山羊抗鼠Ig 抗體并檢測效果。動物細胞的融合實驗。包括制備細胞懸液；50%PEG溶液進行細胞融合；詹納斯綠染色觀察細胞融合的現(xiàn)象。動物細胞傳代與原代培養(yǎng)實驗。包括細胞的消化分散；細胞計數(shù)；傳代細胞培養(yǎng)；原代細胞培養(yǎng)；細胞凍存及復蘇；小鼠解剖及所需組織分離破碎處理。細胞器的分離與鑒定實驗。包括細胞器的分級分離；玉米線粒體的分

9、離與觀察；觀察離體葉綠體對染料的還原作用；制備大鼠肝細胞勻漿；差速離心細胞器；培育玉米種子芽；分離制備收集保存線粒體；制備葉綠體并對分離物進行鑒定。細胞生理性質(zhì)實驗。包括制備羊血細胞懸液及低滲溶液；研究紅細胞的滲透性；進行小鼠實驗前處理及小鼠腹腔注射血紅細胞，顯微鏡下觀察小鼠腹腔巨噬細胞吞噬現(xiàn)象。細胞凋亡過程中DNA 及蛋白檢測實驗。包括誘導腫瘤細胞凋亡，提取凋亡細胞中的總蛋白，利用雙向電泳檢測其種類，利用流式細胞儀檢測細胞凋亡過程。利用RT-PCR技術檢測細胞中 lactin的表達實驗。包括細胞培養(yǎng)；總RNA提取；進行總RNA定量，cDNA合成，PCR擴增及電泳檢測。哺乳動物早熟染色體凝聚誘

10、導實驗。包括誘導有絲分裂期及間期細胞，進行細胞融合。設計觀察患病（糖尿病或肝癌）小鼠肝腎細胞內(nèi)多糖的變化實驗。包括利用已患病的小鼠肝細胞進行石蠟切片制作,特異性染色及觀察。設計觀察藥物（四氯化碳或乙醇）對肝臟細胞損傷后蛋白質(zhì)的變化測定實驗。包括利用不同濃度的藥物對肝細胞的損傷,觀察細胞內(nèi)蛋白質(zhì)的變化。利用植物培養(yǎng)技術的實驗原理設計能夠具有潛在應用價值的實驗方案實驗。包括利用植物培養(yǎng)技術，進行次生代謝產(chǎn)物的生產(chǎn)（如利用胡蘿卜生產(chǎn)伊胡蘿卜素）。13實驗教材或指導書或主要參考資料1）滕利榮等，生物學基礎實驗教程I （第三版），科學出版社，2008年2）王金發(fā)等，細胞生物學實驗教程，科學出版社，2005 年3）辛華，細胞生物學實驗，北京，科學出版社，2001 年4）李素文，細胞生物學實驗實驗指導，北京，高等教育出版社/施普林格出版， 2001 年14考核要求、考核方式及成績評定標準14.1 考核要求：以培養(yǎng)學生的科學態(tài)度、科學思維和實驗操作能力為前提，注重訓練學生的獨立動手能力、思考能力，發(fā)現(xiàn)問題、分析問題和解決問題的能力，實驗設計能力及創(chuàng)新能力，教師應及時、客觀、公正、如實評價每名學生實驗