1、題目:產品無菌檢驗標準操作規程編號：SOP-QC-001版本號：01頁數：6頒發部門：質量管理機構生效日期：分發部門：生產部門制定人：審核人：批準人：制定日期：2016/6/15審核日期：批準日期：目的：制定無菌檢驗標準操作規程，確保檢驗操作正確。范圍：本標準適用于本公司靜脈注射產品無菌檢驗操作。責任者：質管部、化驗室主任、QC檢驗員內容：1、標準依據：中國藥典2010年版二部附錄XIH02、簡述：無菌檢查方法系用于檢查藥品是否無菌的一種方法。檢查項目包括需氣菌、厭氣菌及真菌檢查。若供試品符合該項檢查方法的有關規定，僅表明了在該檢驗條件下未發現微生物污染。3、環境要求：該項檢查應在環境潔凈度萬

2、級（C級）背景下的局部百級（A級）的單向流區域內或隔離系統中進行。其全過程必須嚴格遵守無菌操作。防止微生物污染，但所采取的措施不得影響供試品中微生物的檢出。操作前環境潔凈度應經驗證。日常檢驗需對試驗環境進行監控。4、方法驗證：進行該項檢查前應按照無菌檢查方法驗證規程確認該方法的適用性。5、人員要求：無菌檢查人員必須具備微生物專業知識，并經過無菌技術培訓。6、檢驗數量及檢驗量：6.1、每支供試品接入每種培養基的最少量:5ml（100ml-500ml）,1ml（20-100ml）,0.5ml（5-20ml）。7、細菌培養溫度為3035C,真菌培養溫度為2328C。8、儀器用具：垂直層流超凈工作臺、

3、生化培養箱、電熱恒溫水浴箱、顯微鏡、手提滅菌器、離心機、雙碟、試管、三角瓶、刻度離心管、注射器（針頭）、微量移液器、剪刀、鑲子、注射器盒、75%酒精棉球9、消毒劑配制:9.1、 75%乙醇溶液（配制酒精棉球用）。9.2、 0.2%新潔爾滅溶液（配制消毒棉球用）。9.3、 2%來蘇爾溶液（配制消毒棉球用）。題目:產品無菌檢驗標準操作規程編號：SOP-QC-001版本號：01頁數：6頒發部門：質量管理機構生效日期：分發部門：生產部門制定人：審核人：批準人：制定日期：2016/6/15審核日期：批準日期：10、試劑及培養基的配制：10.1、 0.1%蛋白陳水溶液：取蛋白陳1.0g,加水1000ml,

4、微溫使溶解，濾清，調節PH值至7.1±0.2,分裝，滅菌。10.2、 pH7.0滅菌氯化鈉蛋白凍緩沖液：取磷酸二氫鉀3.56g、磷酸氫二鈉7.23g、氯化鈉4.30g、蛋白陳1.0g,加水1000ml微溫溶解，濾清，分裝，滅菌。10.3、 根據供試品特性，可選用其他經驗證的適宜溶液作為稀釋液、沖洗液。如需要，可在上述稀釋液或沖洗液的滅菌前或滅菌后加入表面活性劑或中和劑。10.4、 硫乙醇酸鹽流體培養基：按商品說明稱取培養基，配制，搖勻，分裝，按培養基說明高壓滅菌，保存備用。分裝的容器應適當，具裝量與容器高度比例應符合培養結束后培養基氧化層（粉紅色）不超過培養基深度的1/2o供試品接種

5、前，培養基氧化層的高度不得超過培養基深度的1/5,否則須經100c水浴加熱至粉紅色消失（不超過20分鐘），迅速冷卻只限加熱一次，并應防止被污染。10.5、 改良馬丁培養基：取商品干燥培養基28.5g,加水1000ml,加熱溶解，分裝，121c高壓滅菌15分鐘（若干燥培養基結塊應勿使用）。10.6、 選擇性培養基：按上述硫乙醇酸鹽流體培養基或改良馬丁培養基的處方及制法，在培養基滅菌或使用前加入適量的中和劑、滅活劑或表面活性劑，其用量同方法驗證試驗（附表1常見干擾物的中和劑或滅活方法見微生物限度檢查法中）。10.7、 營養肉湯培養基：按商品說明稱取培養基，配制，加熱，溶解，分裝，按培養基說明高壓滅

6、菌，保存備用。10.8、 營養瓊脂培養基：取商品干燥培養基3.4g,加蒸儲水1000ml,加熱溶解分裝，121c高壓滅菌15分鐘。10.9、 改良馬丁瓊脂培養基：取商品干燥培養基制備或按改良馬丁培養基的處方及制法，加入14.0g瓊脂，調節PH值使滅菌后PH值為6.4±0.2,題目:產品無菌檢驗標準操作規程編號：SOP-QC-001版本號：01頁數：6頒發部門：質量管理機構生效日期：分發部門：生產部門制定人：審核人：批準人：制定日期：2016/6/15審核日期：批準日期：分裝，121c高壓滅菌15分鐘。10.10、 制備好的培養基應保存在225C,避光的環境中。培養基若保存于非密閉容器

7、中，一般在三周內使用。若保存于密閉容器中，一般可在一年內使用。10.11、 條件允許一般建議購買質量合格培養基成品。11、試驗前的準備工作11.1、 用具的洗刷11.1.1、 玻璃器皿：如試管、量筒、移液管、刻度吸管、離心管、三角瓶、雙碟等用清潔液浸泡，用流水洗滌，再用蒸儲水洗滌45次，倒置,晾干。試管、移液管、三角瓶等使用過后，應先消毒倒出內容物后，再清洗晾干。11.1.2、 注射器用水沖洗后，用洗滌劑沖洗，然后用水沖洗干凈，再用蒸儲水沖洗3次。11.1.3、 剪刀、銀子用水及去污粉洗滌，用水沖洗干凈，再用蒸儲水洗滌3次。11.1.4、 多用薄膜過濾器，玻璃管等用飲用水及蒸儲水洗凈、晾干。1

8、1.1.5、 潔凈服、褲、帽子、口罩等用水洗滌潔凈后，晾干。11.2、 用具的包扎及滅菌11.2.1、 移液管、刻度吸管在管口上端內，松松塞入少許脫脂藥物，然后每支管用白紙嚴密卷好，再用兩層牛皮紙一起包扎。11.2.2、 洗滌潔凈的注射器及適配針頭各部件與剪刀、銀子一并入墊有紗布的鋁盒內，一層層放好，蓋上紗布，將鋁盒蓋好，用牛皮紙包扎。11.2.3、 試管、三角瓶等在管（瓶）口塞上紗布棉紗用牛皮紙包裝嚴密。11.2.6、 將潔凈服、等用布口袋配套裝入，扎緊口袋，用牛皮紙包扎好。11.2.7、 將以上包扎好的用具在121c蒸汽滅菌20分鐘。或采取適宜的滅菌方法。（適宜高溫滅菌的器皿可采用160c

9、干熱滅菌）11.2.8、 物品滅菌完畢，勿立即置冷處，以免急速冷卻導致染菌，應置恒溫培養箱中干燥。題目:產品無菌檢驗標準操作規程編號：SOP-QC-001版本號：01頁數：6頒發部門：質量管理機構生效日期：分發部門：生產部門制定人：審核人：批準人：制定日期：2016/6/15審核日期：批準日期：11.3、 潔凈室的清潔與滅菌11.3.1、 潔凈室及超凈臺，每周用高鈕酸鉀加甲醛薰蒸滅菌。11.3.2、 在每次操作前，應作好清潔工作，并用0.2%新潔爾滅溶液或2%來蘇爾或75%乙醇擦洗超凈臺工作臺面及可能污染的死角，然后開啟紫外線燈殺菌半小時，超凈臺空氣過濾器自凈半小時。操作完畢后，用上述消毒液，

10、再次處理工作臺面，開紫外光燈殺菌30分鐘以上。12、操作12.1、 開啟傳遞窗外側門，將物品表面消毒后置傳遞窗內，關閉窗門。12.2、 操作人員按進入潔凈室更衣程序洗手、更衣換工作鞋，換無菌衣、褲、口罩。進入潔凈室內，開啟內側門，取出物品，關閉內側門，經緩沖間帶入潔凈室內，物品放置于實驗臺上，關閉潔凈室門，人員離開潔凈室，繼續用紫外燈照射半小時，關燈，再將用具放入超凈臺內。12.3、 配制的培養基應在涼暗處保存，一般不得超過2周。臨用前細菌和霉菌培養基分別經3035c和2025c培養不少于48小時和72小時,證明無菌生長時方可使用。12.4、 陽性對照試驗：12.4.1、 應根據供試品特性選擇

11、陽性對照菌，無抑菌作用及抗革蘭陽性菌為主的供試品，以金黃色葡萄球菌為對照菌；抗革蘭陰性菌為主的供試品以大腸埃希菌為對照菌；抗厭氧菌的供試品以生抱梭菌為對照品；抗真菌的供試品以白色念珠菌為對照品。12.4.2、 陽性對照試驗的菌液制備同方法驗證試驗。12.4.3、 取各陽性對照菌懸液（含菌量小于100CFU）及供試品（用量同供試品無菌檢查每份培養基接種的樣品量），以無菌操作加入相應培養基中，培養4872小時，檢查應生長良好。（陽性對照試驗操作應與微生物限度檢查操作隔離進行，防止交叉污染）。12.6、 陰性對照試驗：取供試品的相應溶劑或稀釋劑沖洗液同法操作，培養7日應無菌生長。12.7、 供試品檢

12、查：題目:產品無菌檢驗標準操作規程編號：SOP-QC-001版本號：01頁數：6頒發部門：質量管理機構生效日期：分發部門：生產部門制定人：審核人：批準人：制定日期：2016/6/15審核日期：批準日期：12.7.1、 供試品外部消毒：包裝瓶外壁用75%乙醇擦拭，待干。12.7.2、 供試品的制備：用滅菌銀子取出注射器，在火焰旁將針芯插入針管并安上針頭，注射器針頭應迅速通過火焰數次，用注射器以無菌操作直接吸取供試液。或抽至已滅菌玻璃容器中，用稀釋劑稀釋為供試液，如為可溶于水的固體供試品，應取規定量，加入適宜的滅菌稀釋液溶解做為供試液。12.7.3、 直接接種法：取供試品，按上述操作進行外部消毒和

13、制備后，用滅菌注射器或微量移液器以無菌操作自每管中吸取供試品，在近火焰旁以左手持培養基，以拇指和食指拔開培養基平板上蓋，邊緣通過火焰，移至火焰下側，分別將各供試品20ul（或規定量，除另有規定外，每個容器中培養基的用量應符合接種的供試品體積不得大于培養基體積的10%）沿培養基一端波浪形劃線，每個供試品均分別接種葡萄糖瓊脂培養基，硫乙醇酸鹽流體培養基及改良馬丁培養基各1個，另取硫乙醇酸鹽培養基一支，同法操作，操作結束后，接種對照菌液20ul（小于100CFU）作為供試品陽性對照。注入供試液后，應用封口膜將硫乙醇酸鹽培養基平板邊緣封住隔絕空氣。12.7.4、 硫乙醇酸鹽培養基在3035c培養7天,

14、改良馬丁培養基在2328c培養7大。培養期間應逐日檢查是否有菌生長，并填寫無菌檢查記錄。如供試品管出現輕微渾濁或菌落，經培養后不能從外觀判斷時，可取該培養基接種在另一支相同新鮮培養基中，細菌培養2大，真菌培養3天，觀察接種的同種新鮮培養基是否再出現菌落；或取培養液涂片，染色，鏡檢，判斷是否有菌。12.8、 果判斷：陽性對照管應生長良好，陰性對照管不得有菌生長。否則，試驗無效。若供試品平板均正常經確證無菌生長，判供試品符合規定；若供試品管中菌落并確證有菌生長，判供試品不符合規定，除非能充分證明實驗結果無效，即生長的微生物非供試品所含。當符合下列至少一個條件時，方可判試驗結果無效：題目:產品無菌檢驗標準操作規程編號：SOP-QC-001版本號：01頁數：6頒發部門：質量管理機構生效日期：分發部門：生產部門制定人：審核人：批準人：制定日期：2016/6/15審核日期：批準日期：無菌檢查試驗所用設備及環境的微生物監控結果不符合無菌檢查要求；(2)回顧無菌試驗過程，發現有可能引起微生物污染的因素；(3)供試品管中生長的微生物經鑒定后，確證是因無菌試驗中所使用的物品和(或)無菌操作技術不當引起的。試驗若經確認無效，應重試。重試時，重新取同量供試品，依法檢查，若無菌生長，判供試品符合規定