1、腦傷寧對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用(一)    【摘要】 目的 觀察腦傷寧對(duì)大鼠腦缺血再灌注腦損傷的保護(hù)作用。方法 凝閉大鼠雙側(cè)椎動(dòng)脈45 h后，夾閉頸總動(dòng)脈30 min，再灌注90 min，造成大鼠腦缺血再灌注損傷模型，觀察腦傷寧對(duì)腦組織中生化指標(biāo)及腦電圖的影響。結(jié)果 缺血再灌注造成腦組織嚴(yán)重?fù)p傷，腦組織中水、Na+、Ca2+含量及丙二醛(MDA)含量較對(duì)照組明顯增高，而超氧化物歧化酶(SOD)活力較對(duì)照組降低，并伴有腦電圖異常和腦組織結(jié)構(gòu)病理性改變。夾閉頸總動(dòng)脈前30 min 腹腔注射腦傷寧能降低腦組織中水、Na+、Ca2+含量及MDA含量，并提

2、高SOD活力，對(duì)組織學(xué)檢查及腦電圖也有所改善。結(jié)論 腦傷寧對(duì)腦缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用。 【關(guān)鍵詞】 腦傷寧；腦缺血；再灌注損傷；Ca2+超載Abstract : Objective To study the protective effects of Naoshangning recipe on brain injury in rats.Methods The bilateral vertebral arteries of rats were occluded, and 45 h later, the carotid arteries of rats in the conscious co

3、ndition were occluded for 30 min followed by reperfusion for 90 min.The effects of Naoshangning recipe on the contents of water, Na+, and Ca2+ in cortex, malondialdehyde (MDA) content and superoxide dismutase (SOD) activity in brain hemispheres, as well as the EEG activities were observed.Results 30

4、 min ischemia and 90 min after reperfusion, the contents of water, Na+, Ca2+, and MDA were increased, and the SOD activity was reduced with abnormal EEG activity and ischemic injury in the brain tissues.Naoshangning recipe decreased the elevated water, Na+, Ca2+, and MDA contents, increased the SOD

5、activity, reduced the ischemic injury of brain tissue, and promoted the recovery of EEG activities.Conclusion Naoshangning has protective effects on cerebral ischemia-reperfusion injury in rats.Key words: Naoshangning recipe; cerebral ischemia; reperfusion injury; Ca2+ overloading腦傷寧是武漢大學(xué)人民醫(yī)院神經(jīng)科王安國(guó)教

6、授之經(jīng)驗(yàn)方，由川芎、當(dāng)歸、白芍、琥珀、鉤藤、遠(yuǎn)志、茯苓、夜交藤等中藥組成，具有活血化瘀、寧心安神、平肝熄風(fēng)、健脾除濕之功效。早期藥理學(xué)研究1表明腦傷寧可使高血黏模型大鼠的全血黏度、血漿黏度及紅細(xì)胞壓積明顯降低，為其臨床應(yīng)用提供初步理論依據(jù)，本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步研究腦傷寧對(duì)急性腦缺血再灌注損傷大鼠的保護(hù)作用，并探討其作用機(jī)制。1 材料和儀器1.1 藥材實(shí)驗(yàn)所需中藥材均購(gòu)自湖北省中藥材公司,由武漢大學(xué)人民醫(yī)院藥學(xué)部質(zhì)檢科鑒定。1.2 藥物與試劑丁咯地爾注射液，批號(hào)01754，法國(guó)施維雅藥廠生產(chǎn)。超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒，批號(hào)20031004；丙二醛(MDA)試劑盒，批號(hào)20030811，均購(gòu)自南京建

7、成生物制劑研究所。1.3 動(dòng)物Wistar大鼠，雄性，體質(zhì)量300350 g，1012月齡，由武漢大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：SCXK（鄂）2003-0004。1.4 儀器AA-670原子分光光度計(jì)（日本島津公司），RM-6200型多道生理記錄儀（日本島津公司）。2 實(shí)驗(yàn)方法2.1 腦傷寧湯劑的制備參照文獻(xiàn)1的方法制備。2.2 模型的建立與給藥大鼠50只，隨機(jī)分為5組，每組10只：即假手術(shù)（sham）組及單純?nèi)毖俟嘧?IR)組，腦傷寧2個(gè)劑量組及丁咯地爾組。四血管結(jié)扎全腦缺血模型的制備參考文獻(xiàn)2。大鼠腹腔注射水合氯醛400 mg·kg-1后，固定于立體定位儀，電燒灼凝閉兩

8、側(cè)椎動(dòng)脈，然后分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈并置套扣待用。置電極于大鼠額頂，描記腦電圖(EEG)。手術(shù)后45 h，待大鼠完全清醒后，試驗(yàn)動(dòng)物分別腹腔注射 25、100 mg·kg-1腦傷寧，或5 mg·kg-1丁咯地爾注射液，30 min后扣閉兩側(cè)頸總動(dòng)脈達(dá)30 min，松扣后再灌注90 min。sham組同樣手術(shù)，但不阻斷動(dòng)脈。2.3 檢測(cè)指標(biāo)再灌注結(jié)束時(shí)迅速斷頭取出腦組織，去腦干和小腦，將腦組織劃“+”分為4個(gè)部分，3份立即低溫(-20 )保存用于MDA含量、SOD活性和病理組織學(xué)檢查，1份用于測(cè)定腦組織水、Na+、Ca2+含量。其中腦水分用干濕重法，Na+、Ca2+含量用火焰原子吸

9、收分光光度法3,鄰苯三酚改良法4測(cè)定SOD活性，硫代巴比妥酸法5測(cè)定MDA含量。2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以±s表示，對(duì)EEG的影響采用Ridit分析，其它采用組間t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，P0.05為差異有顯著性。3 結(jié)果3.1 對(duì)腦缺血再灌注動(dòng)物死亡率及EEG的影響在整個(gè)缺血及再灌注期間，IR組、腦傷寧25 mg·kg-1組及丁咯地爾組分別有3、1、1只動(dòng)物因缺血損傷引起動(dòng)物死亡。四血管結(jié)扎后大鼠EEG電壓波幅變小，腦電很快抑制變平，按EEG變化程度分為5級(jí)6，即達(dá)到缺血前波幅100%屬1級(jí)，75%以上為2級(jí)，75%25%為3級(jí)，25%以下為4級(jí)，幾乎呈等電位的為5級(jí)。sh

10、am組在整個(gè)缺血及再灌注期間，EEG變化均以級(jí)為主。而缺血再灌注組缺血期EEG變化級(jí)有3只，級(jí)有3只；再灌注期EEG變化級(jí)有2只，級(jí)有4只，經(jīng)Ridit分析，與sham組比較差異顯著，P0.05。腦傷寧組EEG改變以級(jí)及級(jí)為主，經(jīng)Ridit分析，與IR組比較差異顯著，P0.05或P0.01，說(shuō)明腦傷寧可顯著改善EEG的恢復(fù)程度(見(jiàn)表1)。表1 對(duì)大鼠腦缺血再灌注后EEG幅度變化的影響（略）Tab.1 Effect on EEG in rats inducedby cerebral ischemia reperfusion與假手術(shù)組比較：*P 0.05；與缺血再灌注組比較：#P 0.05，#P

11、0.013.2 對(duì)腦組織水、Na+、Ca2+、MDA含量及SOD活性的影響再灌注后IR組腦組織水、Na+、Ca2+以及MDA含量均明顯高于sham組(P0.05或P0.01)。腦傷寧組腦組織水、Na+、Ca2+，以及MDA含量明顯低于IR組(P0.05或P0.01)。而IR組腦組織SOD活性低于sham組(P0.01)，腦傷寧組腦組織SOD活性明顯高于IR組(P0.01)，與sham組接近(見(jiàn)表2)。3.3 對(duì)腦組織形態(tài)學(xué)改變的影響缺血再灌注造成神經(jīng)元錐體細(xì)胞腫脹、變形，乃至核固縮，核溶解，細(xì)胞壞死，間質(zhì)也變得疏松。腦傷寧能顯著減輕這種損傷性改變，使壞死細(xì)胞數(shù)目減少，可見(jiàn)到較為完整的錐體細(xì)胞，

12、間質(zhì)也比較致密。4 討論腦缺血再灌注損傷的發(fā)生機(jī)理涉及諸多方面，Ca2+超載與氧自由基的大量產(chǎn)生在其中扮演著重要的角色。本實(shí)驗(yàn)觀察到腦缺血再灌注損傷后大腦皮層Ca2+累積，MDA含量增加，與文獻(xiàn)3報(bào)道的結(jié)果一致，腦傷寧能明顯降低缺血再灌注后腦組織的Ca2+和MDA含量，增強(qiáng)SOD活性，顯示出抗Ca2+超載及抗氧自由基作用。表2 對(duì)大鼠腦缺血再灌注后生化指標(biāo)變化的影響（略）Tab.2 Effect on biochemical index induced by cerebral ischemia reperfusion in rat與假手術(shù)組比較：*P 0.05，*P 0.01；與缺血再灌注組比

13、較：#P 0.05，#P 0.01腦水腫是腦缺血的主要并發(fā)癥之一，同時(shí)又是加重腦缺血的原因。由于缺血缺氧致使腦組織能量耗竭，細(xì)胞膜Na+K+泵功能障礙，Ca2+ATP酶活性降低，導(dǎo)致離子穩(wěn)態(tài)失衡，產(chǎn)生腦水腫。腦傷寧能劑量依賴性地減少缺血再灌注引起的鈉、水潴留，減輕腦水腫，提示腦傷寧可能阻止腦缺血造成的細(xì)胞膜離子轉(zhuǎn)運(yùn)紊亂，從而防止細(xì)胞內(nèi)的Ca2+超載與細(xì)胞損傷。EEG的變化及形態(tài)學(xué)檢查也明確顯示了腦傷寧對(duì)腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用，從而在電生理及形態(tài)學(xué)方面證實(shí)了腦傷寧的腦保護(hù)作用。綜上所述，腦傷寧通過(guò)降低腦內(nèi)Ca2+含量，減輕腦水腫，減少脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，改善腦電圖，緩解錐體細(xì)胞的損傷壞死情況，從多個(gè)方面顯示了其對(duì)腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用，其機(jī)制與抗Ca2+超載和抗脂質(zhì)過(guò)氧化作用有關(guān)，此結(jié)果為其臨床應(yīng)用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1 王芳，周珂，余恩欣.腦傷寧治療腦外傷后綜合征的藥效學(xué)研究J.廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2003，19(3)：249-252.2 彭新琦，可君.三重莨菪類藥物在大鼠急性前腦缺血及再灌注損傷中的作用J.中國(guó)藥理學(xué)報(bào)，1992，13(4)：357-361.3 趙衛(wèi)國(guó)，張?zhí)戾a，施愛(ài)芳，等.腦缺血腦水腫的實(shí)驗(yàn)研究-鈣在腦缺血損傷