雙向電泳試劑配制以及protocol_第1頁
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文檔簡介

1、水化液8mM Urea12g4.82%CHAPS0.5g0.20.5%IPG Buffer125ul500.002%Bromophe ndBlue50ul (1%BB)2.0DD H2OTo25mlTo 10ml分裝成500ul每管，凍于一 20C，用前融化SDS平衡液1 X2X3xTris-HCLPH8.8 (F液)0.54ml1.081.8Urea ( Fw60.06)5.41 g10.8218.2Glycerol (87%V/V)4.53g9.0615.1SDS0.3g0.61.0Bromophe nol Blue30ul60100DDH2OTo15mlTo30To50第一天配制2管，搖

2、晃過夜 第二天用前，一管加入DTT( 100mg/10ml)另一管加入碘乙酰胺(250mg/10ml)II向SDS膠1 X2X3xMono mer Soluti on (E液)50.04ml83.4125.14 x Vesolinggelbuffer (F 液)30ml507510%SDS (G 液)1.2ml23DDH2O38.16ml63.695.410%Am mon iumPeosulfate(0.48625G)600ul1ml1.5TEMED(10%AP:0.15t 1.5ml)39.6ul6699Acrylumicle 30%150gBis Acylumicle 0.8%4gDDH2

3、OTo 500ml4C貯藏Tris-base 1.5m181.7gDDH2OTo 750mlHCLTo PH8.8DDH2OTo 1L4C貯藏SDS 10%(W/V)5gDDH2OTo 50ml室溫二向下槽液25mM Tris HCL PH 8.312.12g192mM gly57.6g0.1% SDS4.5g定容至500ml(DDH20),攪拌，移至4L試劑瓶，再加入3.5LDDHQ, 需前一天加入電泳槽，以消泡瓊脂葡糖液二向下槽液100mlAgarose(NA or M)0.5%0.5gBromophe nol0.002%200ul87 C溶解，室溫保存1 %漠酚藍(lán)液Bromophend

4、Blue 1%100mgTris-base60mgDDH2OTo 10ml室溫保存固定液（無水）乙醇150ml乙酸37.5mlDDH20188ml敏化液1 X2X3x（無水）乙醇112.5ml225337.5Sodium thiosulfate0.75g1.52.25Sodium acetate (17%)25.5g5176.5DDH2OTo 350mlTo700To1050銀染液1 X2X3xAgNO 3 (2.5%)0.9375g1.8752.8125DDH2OTo 375 mlTo750To1125顯色液1 X2x3xSodiu ncarb on ate(6.26g)9.375g18.7528.125甲醛（37%）用前加150ul300450DDH2OTo 375 mlTo750To1125終

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