1、高中生物課后分層檢測案:課后分層檢測案12血紅蛋白的提取和分離基礎鞏固練1 .利用凝膠色譜法先洗脫出來的蛋白質是（）A.相對分子質量大的B.溶解度高的C.相對分子質量小的D,所帶電荷多的2 .凝膠色譜法是分離蛋白質分子的一種常用方法，但并非所有的蛋白質都可以用此方 法進行分離，能分離的蛋白質分子之間必須（）A.具有相同的相對分子質量8 .相對分子質量不同，但都是相對分子質量較大的分子C.相對分子質量不同，但都是相對分子質量較小的分子D.具有不同的相對分子質量9 .凝膠色譜法分離蛋白質時，凝膠的種類較多，但其作用的共同點是（）A.改變蛋白質分子通過凝膠時的路徑10 吸附一部分蛋白質，從而影響蛋白

2、質分子的移動速度C.將酶或細胞固定在凝膠中D.與蛋白質分子進行化學反應，從而影響其移動速度11 分離血紅蛋白溶液時，離心所采用的方法是（）A.低速長時間離心B.低速短時間離心C.高速長時間離心D.高速短時間離心12 將處理破裂后的紅細胞混合液以2 000 r/min的速度離心10 min后，離心管中的溶 液分為四層，從上到下的順序依次是（）A.血紅蛋白、甲苯層、脂質物質層、紅細胞破碎物沉淀層B.甲苯層、紅細胞破碎物沉淀層、血紅蛋白、脂質物質層C.脂質物質層、血紅蛋白、甲苯層、紅細胞破碎物沉淀層D.甲苯層、脂質物質層、血紅蛋白、紅細胞破碎物沉淀層6 .使用凝膠色譜法分離蛋白質實驗中，相對分子質量

3、不同的蛋白質在凝膠中的行進過 程可表示為下圖中的（）=3 00 = V A AD7 .在血紅蛋白的整個提取過程中，不斷用磷酸緩沖液處理的目的是（）防止血紅蛋白被氧氣氧化8 血紅蛋白是一種堿性物質，需要酸中和防止色譜柱內產生氣泡，影響洗脫效果讓血紅蛋白處在穩定的pH范闈內，維持其結構和功能A. ®® B. ®C. ® D. 8 .下列關于蛋白質提取和分離實驗中樣品處理步驟的描述，正確的是（）A.紅細胞的洗滌：加入蒸懦水，緩慢攪拌，低速短時間離心9 .血紅蛋白的釋放：加入生理鹽水和甲苯，置于磁力攪拌器上充分攪拌C.分離血紅蛋白：將攪拌好的混合液離心，過濾后，

4、用分液漏斗分離D.透析：將血紅蛋白溶液裝入透析袋，然后置于pH為4.0的磷酸緩沖液中透析12 h10 紅細胞含有大量的血紅蛋白，我們可以選用豬、牛、羊或其他哺乳動物的血液來提 取和分離血紅蛋白，請回答下列有關問題：（1）實驗前取新鮮的血液，要切記在采血容器中預先加入檸椽酸鈉，取血回來，經處理 并離心，收集血紅蛋白溶液。加入檸檬酸鈉的目的是。以上所述的過程為樣品處理，它包括、分離血紅蛋白溶 液。（2）收集的血紅蛋白溶液可以在透析袋中透析，這就是樣品的粗分離。透析的目的是。透析過程中需要用到 緩沖液。（3）通過凝膠色譜法將樣品進一步純化，最后經SDS一聚丙烯酰胺凝膠電泳進行純度鑒 定。凝膠色譜法是

5、根據 分離蛋白質的方法。加入SDS可以使蛋白質在聚丙烯酰胺凝膠電泳中的遷移率完全取決于。能力提升練11 .使用SDS一聚丙烯酰胺凝膠電泳測定蛋白質相對分子質量時，可選用一組已知相對 分子質量的標準蛋白同時進行電泳，根據已知相對分子質量的標準蛋白的電泳區帶位置，用電泳遷移率和相對分子質量的對數作標準曲線，可以測出未知蛋白的相對分子質量。下列說 法不正確的是（）A. SDS能與蛋白質形成復合物而掩蓋不同蛋白質間的電荷差別，使電泳遷移率取決于分 子的大小B.與已知相對分子質量的標準蛋白的電泳帶相比，只能大概估計出待測蛋白質的相對 分子質量C. SDS在引發劑和催化劑的作用下參與構成聚丙烯酰胺凝膠D.

6、如果只是分離混合物而不需測定蛋白質的相對分子質量時，就無需加入SDS,此時蛋 白質的電泳遷移率取決于所帶電荷和分子的大小11 .已知某樣品中存在甲、乙、丙、丁、戊五種物質，其分子大小、電荷的性質和數量 情況如圖所示。下列敘述正確的是（）H相對分子質量0 電荷量A.將樣品裝入透析袋中透析12 h,若分子乙保留在袋內，則分子甲也保留在袋內B.若五種物質為蛋白質，則用凝膠色譜柱分離時，甲的移動速度最快C.將樣品以2 000 r/min的速度離心10 min,若分子戊存在于沉淀中，則分子丙也存 在于沉淀中D.若五種物質為蛋白質，用SDS一聚丙烯酰胺凝膠電泳分離樣品中的蛋白質分子，則分 子甲和分子戊形成

7、的電泳帶相距最近12 .下圖是用除去DNA的濾液進行血紅蛋白的提取和分離實驗的裝置，下列有關敘述不 正確的是（）陰極陽極U紅褐色Fc（OHh膠體丙A.首先用圖甲裝置對濾液進行處理，其目的是去除相對分子質量較小的雜質B.圖乙裝置的試管中收集到的液體中最先出現的是相對分子質量較小的蛋白質C.用圖乙裝置分離血紅蛋白時，待紅色的蛋白質接近色譜柱底端時，用試管收集流出 液，每管收集5 mL,連續收集D.圖丙裝置中電泳法分離提純血紅蛋白的原理是血紅蛋白帶有一定量的電荷，在電場的作用下向一極移動13 .以下關于血紅蛋白提取和分離的過程及原理敘述正確的是()A.紅細胞洗滌過程中要加入5倍體積的蒸馀水，重復洗滌

8、3次B.將血紅蛋白溶液放在質量分數為0. 9%的NaCl溶液中透析12小時C.凝膠裝填在色譜柱內要均勻，不能有氣泡存在D.蛋白質通過凝膠時，相對分子質量較大的移動速度慢14 .下圖為凝膠色譜法分離蛋白質的示意圖和SDS一聚丙烯酰胺凝膠電泳示意圖。據圖 分析不正確的是()-8 -A.在裝填圖甲中凝膠色譜柱時一旦發現柱內有氣泡存在，就需要重裝B.圖甲中大分子蛋白質因阻力大而移動得慢，所以最后從層析柱中流出來C.圖乙中凝膠中加入的SDS可以使蛋白質遷移速率完全取決于分子大小D.已知凝膠中的SDS帶負電，則應在電泳槽的處接電源負極，處接電源正極15 .隨著人類基因組計劃的進展和多種生物基因組測序工作的

9、完成，人類跨入了后基因 組和蛋白質組時代。對蛋白質進行研究時，首先要獲得純度較高的蛋白質。圖1是某生物興 趣小組在“蛋白質的提取和分離”實驗中，準備從豬的血液中初步提取血紅蛋白，設計的“血 紅蛋白提取、分離流程圖”：實驗準備 配制緩沖 液血細胞 懸液樣品處理洗滌、破碎、離心等純化、純度蛋白質粗 鑒定凝膠 分離透析|一色譜法、電泳等圖1請回答(1)(4)有關問題:(D樣品處理中紅細胞的洗滌要用 反復沖洗、離心。向紅細胞懸液中加入一定量的低濃度pH = 7.0的緩沖液并充分攪拌，可以破碎紅細胞，破碎細胞的原理是(2)血紅蛋白粗分離階段，透析的目的是,若要盡快達到理想的透析效果，可以(寫出一種方法)

10、。(3)血紅蛋白的純化是通過法將相對分子質量大的雜質蛋白除去。(4)電泳利用了待分離樣品中各種分子的 等的差異，而產生不同遷移速度，實現各種分子的分離。(5)一同學通過血紅蛋白醋酸纖維薄膜電泳，觀察到正常人和鐮刀型細胞貧血癥患者的血紅蛋白電泳結果如圖2所示。由圖可知攜帶者有 種血紅蛋白，從分子遺傳學的角度作出的解釋是正極正常人麗極,旭*負極正極圖2攜帶者素養養成練16 .下面是某研究小組開展的“豬血漿某白蛋白的提取及分子量測定”的研究，請完成下列有關問題。材料儀器：新鮮豬血、低速冷凍離心機、透析袋、電泳儀等。化學試劑：pH為7. 4的緩沖液、檸椽酸鈉、奈氏試劑(與NH；反應出現黃色或紅棕色沉

11、淀)、飽和度為55席的(NH：)：SOi溶液、生理鹽水等。實驗步驟：(D樣品獲取：向新鮮豬血中加入 以防止血液凝固，靜置一段時間后取上層血漿。(2)鹽析法粗提蛋白質：向血漿中加入一定體積的飽和度為55席的(NHJSOi溶液，充分混合后靜置、離心，取 沉淀物，向沉淀物中加入適量生理鹽水使之溶解：重復步驟23次，最后用生理鹽水將沉淀溶解即得到粗提品，鹽析粗提“血漿某白 蛋 白”的 主 要 原 理 是重 復 步 驟 的 主 要 目 的 是(3)透析除鹽：將粗提品裝入透析袋，以pH為7. 4的緩沖液作透析液，每隔4 h更換一 次透析液，每次更換前利用奈氏試劑檢測透析液中NH：的量。利用緩沖液作透析液的

12、原因是檢測中，若觀察到透析液 時，即可終止透析°凝膠色譜法分離：透析后的樣品經凝膠柱洗脫，獲得純凈血漿某白蛋白樣品。(5)分子量測定：化學物質SDS能使蛋白質變性并解聚成單條肽鏈，在聚丙烯酰胺凝膠 電泳中加入一定量的SDS,使電泳遷移率完全取決于肽鏈的分子大小。下圖為本實驗中用SDS- 聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定血漿某白蛋白的結果。根據電泳結果，某同學得到“提取的血漿某 白蛋白有兩條肽鏈”的結論，這種說法可靠嗎？理由是：加樣孔b課后分層檢測案12血紅蛋白的提取和分離L解析：相對分子質量較小的蛋白質能進入凝膠內部通道，路程較長，移動速度較慢：相對分子質量大的蛋白質不能進入凝膠內部通道，路程

13、較短，移動速度較快，首先洗脫 出來。答案：A17 解析：多種在凝膠分離范圍之外的分子，在不改變凝膠種類的情況下是很難分離 的。對于相對分子質量不同，但同屬于凝膠分離范圍內的各種分子，在凝膠珠中的分布情況 是不同的，相對分子質量較大的只能進入孔徑較大的那一部分凝膠。答案：C18 解析：凝膠的種類較多，但每種凝膠內部都有通道。相對分子質量不同的蛋白質 通過凝膠時，相對分子質量較小的蛋白質分子可以進入凝膠內部，通過的路程較長，洗脫時 從凝膠柱中出來得較晚，相對分子質量較大的蛋白質分子則可以較早地洗脫出來，從而達到 分離蛋白質的目的。答案：A19 解析：高速或長時間離心，會導致白細胞和淋巴細胞一同沉淀

14、，得不到純凈的紅 細胞，而影響后而血紅蛋白的提取純度。答案：B20 解析：混合液經離心后按密度大小排列，在離心管中從上到下的順序依次是：第 1層為無色透明的甲苯層，第2層白色薄層固體是脂溶性物質沉淀層，第3層紅色透明液體是 血紅蛋白水溶液，第4層暗紅色沉淀物主要是紅細胞破碎物沉淀。答案：D21 解析：相對分子質量較大的蛋白質留在顆粒外面，相對分子質量較小的蛋白質進 入顆粒內部；相對分子質量大的蛋白質因路徑短先被洗脫出來，相對分子質量小的蛋白質因 路徑長而后被洗脫出來，相對分子最小的最后被洗脫出來。答案：B22 解析：在血紅蛋白的整個提取過程中，不斷用磷酸緩沖液處理的目的是防止色譜 柱內產生氣泡

15、，影響洗脫效果，同時也是為了讓血紅蛋白處在穩定的pH范圍內，維持其結構 和功能。答案：D23 解析：紅細胞洗滌步驟中應加入生理鹽水而不是蒸馀水：血紅蛋白釋放過程中加 入蒸譚水和甲苯；透析時緩沖液pH應為7.0,而不是4.0。答案：C24 解析：（1）檸椽酸鈉是一種抗凝血劑，加入檸檬酸鈉可以防止血液凝固：樣品處 理包括紅細胞的洗滌、血紅蛋白的釋放、分離血紅蛋白溶液。（2）透析袋能使小分子自由進出， 而將大分子保留在袋內，透析可以去除樣品中分子量較小的雜質。（3）凝膠色譜法是根據相對 分子質量的大小分離蛋白質的方法。答案：（1）防止血液凝固 紅細胞的洗滌 血紅蛋白的釋放（2）去除分子量較小的雜質磷

16、酸（3）相對分子質量的大小分子的大小25 .解析：聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰胺和交聯劑N, N'一亞甲基雙丙烯酰胺 在引發劑和催化劑的作用下聚合交聯成的具有三維網狀結構的凝膠。答案：C26 .解析：透析的原理是相對分子質量小的物質能透過半透膜，相對分子質量大的 物質不能透過，乙保留在袋內，甲則不一定保留在袋內；凝膠色譜柱分離時，相對分子質量 小的物質路程長、移動慢：離心時相對分子質量大的物質先沉淀，戊沉淀，則乙、丁、丙均 已沉淀；用SDS一聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白質時，電泳遷移率主要取決于分子大小。答案：C27 .解析：圖乙裝置表示通過凝膠色譜法分離蛋白質的過程，蛋白質的相對分子質

17、 量較大時，被排阻在凝膠顆粒的外而，在顆粒之間迅速通過，最先出現在收集液中。答案：B28 .解析：低滲溶液中細胞會吸水漲破，所以紅細胞的洗滌過程應該用生理鹽水洗 滌，不能用蒸儲水洗滌，A錯誤；將血紅蛋白溶液通過透析進行粗分離時應該選用磷酸緩沖液, B錯誤；裝填色譜柱時，凝膠填在色譜柱內要均勻，不能有氣泡存在，因為氣泡會影響蛋白質 洗脫的次序，C正確：蛋白質通過凝膠時，相對分子質量較大的移動速度快，D錯誤。答案：C29 .解析：在裝填凝膠色譜柱時，凝膠裝填在色譜柱內要均勻，不能有氣泡存在， 因為氣泡會影響蛋白質洗脫的次序，A正確：圖甲中大分子蛋白質不容易進入凝膠內部的通道, 路程短，移動速度快，

18、所以最先從層析柱中流出來，B錯誤：圖乙中凝膠中加入的SDS所帶負 電荷的量大大超過蛋白質分子原有的電荷量，故可以使蛋白質遷移速率完全取決于分子大小, C正確：凝膠中的SDS帶負電，所以電泳槽的處接電源負極，處接電源正極，D正確。答案：B30 .解析：（1）樣品處理中紅細胞的洗滌要用生理鹽水反復沖洗、離心。向紅細胞懸 液中加入一定量的低濃度pH=7.0的緩沖液并充分攪拌，可以破碎紅細胞，破碎細胞的原理 是滲透原理（當外界溶液濃度低于動物細胞內液濃度時，細胞吸水漲破）。（2）血紅蛋白粗分離 階段，透析的目的是除去小分子雜質。（3）電泳利用了待分離樣品中各種分子的帶電性質以及 分子大小、形狀等的差異，而產生不同的遷移速度，實現各種分子的分離。（4）由圖2