1、計算見單向展開法 1原理 樣品中的黃曲霉毒素b1經提取、脫脂、濃縮后與定量特異性抗體反應，多余的游離抗體則與酶標板內的包被抗原結合，加入酶標志物和底物后顯色，與標準比較來測定含量。 2試劑 抗黃曲霉毒素b1單克隆抗體、人工抗原(afb1-牛血清白蛋白結合物)、三氯甲烷、甲醇、石油醚、牛血清白蛋白(bsa)、鄰苯二胺(opd)、辣根過氧化物酶(hrp)標志羊抗鼠igg、碳酸鈉、碳酸氫鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉、氯化鈉、氯化鉀、過氧化氫(h2o2)、硫酸。 黃曲霉毒素b1標準溶液：用甲醇將黃曲霉毒素b1配制成lmgml溶液，再用甲醇pbs溶液(20+80)稀釋至約10gml，紫外分光光度計測此溶液

2、最大汲取峰的光密度值， 代入式(105)計算： a×m×1000×f x一一一一一一一一 式中，x為該溶液中黃曲霉毒素b·的濃度，,ugml；a為測得的光密度值；m為黃曲霉毒素b1的相對分子質量312；為摩爾吸光系數，21800；f為用法儀器的校正因素。 按照計算將該溶液配制成10gml標準溶液，檢測時，用甲醇-pbs溶液將該標準溶液稀釋至所需濃度。 elisa緩沖液。 a包被緩沖液(ph96碳酸鹽緩沖液)的制備：159g na2co3與2.93g nahco3用蒸餾水溶解，定容至1000ml。 b磷酸鹽緩沖液(ph74 pbs)的制備：0.2g kh2

3、po4、2.9g na2hpo4、12h2o、8.0g nacl加0.2g kcl，用蒸餾水溶解，定容至1000ml。 c洗液(pbs-t)的制備：pbs加005(體積分數)tween-20。 d抗體稀釋液的制備：bsa 1.0g加pbs-t至1000ml。 e底物緩沖液的制備。a液(0.1moll檸檬酸水溶液)：檸檬酸(c6h8o7.h2o)2.01g，加蒸餾水至1000ml。b液(0.2moll磷酸氫二鈉水溶液)：na2 hpo4.12h2o71.6g，加蒸餾水至1000ml。用前按a液+b液十蒸餾水為243+257+50的比例(體積比)配制。 f封閉液的制備：同抗體稀釋液。 3儀器 小型

4、粉碎機、電動振蕩器、酶標儀(內置490nto濾光片)、恒溫水浴鍋、恒溫培養箱、酶標微孔板、微量加樣器及配套吸頭。 4分析步驟 (1)取樣取樣辦法與薄層色譜法測定食品中的黃曲霉毒素b1的辦法相同。 (2)提取 大米和小米(脂肪含量小于3.0)的提取 試樣粉碎后過20日篩，稱取20.0g，加入250ml具塞錐形瓶中。精確加入60ml三氯甲烷，蓋塞后滴水封嚴，150rmin振蕩30min。靜置后，用迅速定性濾紙過濾于50ml燒杯中。立刻取12ml濾液(相當于4.0g樣品)于75ml蒸發皿中，65水浴通風揮干。用2.0mi20甲醇-pbs分3次(0.8ml、0.7ml、0.5ml)溶解并徹底沖洗蒸發皿

5、中凝聚物，移至小試管，加蓋振蕩后靜置待測。此液lml相當于2.0g樣品。 玉米的提取(脂肪含量3050) 樣品粉碎后過20目篩，稱取20.0g，加入250ml具塞錐形瓶中，精確加入50.0ml甲醇一水(80+20)溶液和15.0ml石油醚·蓋塞后滴水封嚴。150rmin振蕩30min。用迅速定性濾紙過濾于125ml分液漏斗中。待分層后，放出下層甲醇一水溶液于50ml燒杯中，從中取10.0ml(相當于4.0g樣品)于75ml蒸發皿中。65水浴通風揮干。用2.0ml 20甲醇-pbs分3次(08ml、07ml、05ml)溶解并徹底沖洗蒸發皿中凝聚物，移至小試管，加蓋振蕩后靜置待測。此液l

6、ml相當于2.0g樣品。 花生的提取(脂肪含量150450) 樣品去殼去皮粉碎后稱取20.0g，加入250ml具塞三角瓶中，精確加入100.0ml甲醇水溶液(55+45)和30ml石油醚。蓋塞后滴水封嚴。150rmin振蕩30min。靜置15min后用迅速定性濾紙過濾于125ml分液漏斗中。 待分層后，放出下層甲醇水溶液于l00ml燒杯中，從中取20.0ml(相當于4.0g樣品)置于另一125ml分液漏斗中，加入20.0ml三氯甲烷，振搖2min，靜置分層(如有乳化現象可滴加甲醇促使分層)。放出三氯甲烷于75ml蒸發皿中。再加5.0ml三氯甲烷于分液漏斗中重復振搖提取后，放出三氯甲烷一并于蒸發皿中，65水浴通風揮干。用2.0ml 20甲醇-pbs分3次(0.8ml、0.7ml、0.5ml)溶解并徹底沖洗蒸發皿中凝聚物，移至小試管，加蓋振蕩后靜置待測。此液lml相當于2.0g樣品。 植物油的提取用小燒杯稱取40g樣品，用20.0ml石油醚，將樣品移于125ml分液漏斗中，用20.0ml甲醇水溶液(55+45)分次洗燒杯，溶液一并移于分液漏斗中(精煉油4.0g樣為4525ml，挺直用移液器加入分液漏斗，再加溶劑后振搖)，振搖2min。靜置分層后放出下層甲醇水溶液于75ml蒸發皿中，再用5.0ml甲醇水溶液重復振搖提取一次，提取液一并加入蒸發皿中，65水浴