1、莫諾苷神經保護作用機制研究王文 通信作者：王文，博士，副研究員，E-mail: lzwwang，Tel李林、艾厚喜、安易、黃文婷、孫芳林 (首都醫科大學宣武醫院藥物研究室，北京，100053)摘要：目的 系統闡述本室從山茱萸提取分離得到的化合物莫諾苷，體外神經保護作用和機制。方法 大孔樹脂分離、硅膠柱層析得到莫諾苷，用H2O2損傷神經SY5Y細胞培養模型研究莫諾苷神經保護作用和機制。結果與結論 莫諾苷可能通過抑制細胞去極化，降低細胞鈣超載，降低活性氧生產，增加細胞小分子抗氧化物質和抗氧化酶活性減小自由基損傷，從而達到抑制細胞凋亡，增加神經營養作用這個途徑產生神經保護

2、作用。關鍵詞：莫諾苷；神經保護；過氧化氫損傷缺血性腦損傷有高發病率、高死亡率、高致殘率的特點，嚴重地威脅著中老年人的身體健康和生活質量，隨著經濟的發展和社會壓力的增加，發病年齡逐步降低，給社會和家庭帶來了沉重的負擔。腦缺血引發腦組織細胞產生級聯反應，引起腦神經細胞凋亡和死亡，難以建立有效的信息聯系，造成患者死亡或者愈后殘疾，因此抑制腦神經細胞凋亡，促進神經細胞再生是解決問題的關鍵，也是當前國際研究的熱點1。人神經母細胞SH-SY5Y細胞系繁殖快，細胞形態、生理和生化功能與正常神經細胞相似，被廣泛應用于神經系統疾病發病機制和藥物作用機制方面的研究。過氧化氫（H2O2）是一種較強的氧化劑，它產生的

3、羥自由基（-OH）可引發脂質過氧化反應，對SY5Y細胞有明顯的損傷作用，模擬腦缺血造成的氧化損傷。我們對33味中藥進行了神經保護作用篩選，發現山茱萸環烯醚萜苷對D-半乳糖致腦老化癡呆小鼠模型及光化學誘導的腦梗塞大鼠模型均具有改善作用，并能提高隔海馬穹隆傘切斷擬Alzheimer病(AD)模型大鼠的學習記憶功能，明顯減少模型鼠內側隔核區和海馬齒狀回多形層神經元的喪失2-3 。對山茱萸環烯醚萜苷進一步分離，得到莫諾苷，有抗氧化、抑制神經細胞損傷的作用4-6，本實驗繼續對莫諾苷對H2O2誘導的SH-SY5Y氧化損傷的神經保護作用機理進行研究。1化學研究 山茱萸水提取，過大孔樹脂，硅膠柱層析，甲醇重結

4、晶，得到純化合物，經過MS、13C-NMR、1H-NMR波普數據確定莫諾苷的結構，HPLC確定莫諾苷的含量大于90%。2 莫諾苷神經保護作用及機制實驗2.1 對正常神經SY5Y細胞的作用 莫諾苷對SY5Y細胞的濃度超過10000 mol/L時產生細胞毒，在1-100mol/L濃度范圍內均可增加SY5Y細胞的MTT代謝率， 10mol/L是增加細胞活性的最適濃度，可以增加SY5Y細胞的MTT代謝率、細胞軸突長度、胞體面積和細胞計數。2.2 對H2O2損傷神經SY5Y細胞的作用 與損傷組相比，莫諾苷3個劑量組顯著減少了乳酸脫氫酶的釋放率，降低細胞膜破損程度。2.3 對H2O2損傷神經SY5Y細胞抗

5、氧化作用 莫諾苷3個劑量組與損傷組相比，用流式細胞儀測定結果顯示減少活性氧的釋放，用試劑盒測定顯著抑制了氧化損傷后一氧化氮（NO）及氧自由基（ROS）產生，提高谷胱甘肽（GSH）和超氧化物歧化酶（SOD）含量。2.4 對H2O2損傷神經SY5Y細胞抗凋亡作用 3個劑量加藥組與損傷組相比，Western Blot試驗顯示促進受損神經細胞凋亡調控因子Bcl-2的持續高表達，抑制Caspase-3與Caspase-9的表達，用流式細胞儀測定顯示抑制細胞凋亡。2.5 對H2O2損傷神經SY5Y細胞神經營養作用 3個劑量的莫諾苷組與損傷組比較，Western Blot試驗顯示提高神經生長因子（NGF）及

6、腦源性神經營養因子（BDNF）的表達水平。2.6 對H2O2損傷神經SY5Y細胞膜電位和鈣離子的影響 莫諾苷3個劑量組與損傷組相比，顯示升高給藥組細胞膜電位，降低細胞內鈣離子濃度。3 結論莫諾苷可能通過抑制細胞去極化，降低細胞鈣超載，降低活性氧生產，增加細胞小分子抗氧化物質和抗氧化酶活性減小自由基損傷，從而達到抑制細胞凋亡，增加神經營養作用這個途徑產生神經保護作用。本項研究已申請國家發明專利。REFERENCE1 王文,黃文婷,艾厚喜,等.中藥誘導腦成體神經干細胞的增殖分化.中國康復理論與實踐, 2007, 13(1):26-28.2 陸華寶,李林,安文林,等.中藥SSY-B2對隔海馬穹窿傘切

7、斷致大鼠學習記憶障礙的改善作用.中國康復理論與實踐, 2003, 9(5):286-288.3 陸華寶,李林,安文林,等.中藥SSY-B2促進中樞神經系統損傷后軸突再生的分子機制.中國康復理論與實踐, 2003, 9(7):410-412.4 Wen Wang, Wenting Huang, Lin Li, et al. Morroniside Prevents Peroxide-induced Apoptosis by Induction of Endogenous Glutathione in Human Neuroblastoma Cell. Cell Mol Neurobiol, 2008, 28(2):293-305.5 黃文婷,王文,艾厚喜,等.莫諾苷對SH-SY5Y神經細胞生長的影響及對過氧化氫誘導損