1、1實驗八MS培養基的配制和滅菌一、實驗目的：了解培養基的配制原理和方法，掌握其配制過程和分裝方法。、實驗材料:天平、牛角匙、量筒、燒杯、攪拌機、膠桶、組培瓶、6種母液、白沙糖、活性炭、卡拉膠三、方法步驟1、母液配制大量元素(母液I) mg/L 100ml。 微量元素(母液U) (3)鐵鹽(母液m) 有機成分(母 液IV)IVA和IVB植物生長調節物質(2, 4-D, NAA)以上各種營養成分的用量，除了母液I為10倍濃縮液外，其余的均為100倍濃縮液。其中，母液I、母液皿及母液IV的配制方法是：每種母液中的幾種成分稱量完畢后，分別用少量的蒸僻水徹底溶解，然后再將它們混溶，最后定容到1 L。母液

2、用的配制方法是：將稱好的FeSO4 7H2O和Na2-EDTA 2H2O分別放到450 mL蒸僻水 中，邊加熱邊不斷攪拌使它們溶解， 然后將兩種溶液混合， 并將pH調至5.5,最后定容到1 L,保存在棕色玻璃瓶中。各種母液配完后，分別用玻璃瓶貯存，并且貼上標簽，注明母液號、配制倍數、日期等，保 存在冰箱的冷藏室中。MS培養基中還需要加入2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、蔡乙酸(NAA)、6節基喋吟(6BA)等 植物生長調節物質，并且分別配成母液(0.1mg/mL)。其配制方法是：分別稱取這3種物質各10 mg ,將2,4-D和NAA用少量(1 mL)無水乙醇預溶，將6BA用少量(1 mL)的

3、物質的量濃 度為0.1 mol/L的NaOH溶液溶解，溶解過程需要水浴加熱，最后分別定容至100 mL ,即得 質量濃度為0.1 mg/mL的母液。2、培養基配制(1)配制培養液用量筒從各種母液中分別取出所需的用量：母液為100 ml,母液U、m、IVA和IVB各10ml。再取2, 4-D 10ml、NAA 2ml,與各種母液一起放入燒杯中。(2)稱取54g卡拉膠；300g蔗糖；活性炭1g。(3)在膠桶中加入規定量的各種母液，包括生長調節物質。(4)加水定容至1升，開攪拌機，攪勻混合液。定容至10升，攪勻。2(5)向母液混合物加入白沙糖，繼續攪拌；然后停一下攪拌機再加卡拉膠，開攪拌機混勻； 接

4、著再停攪拌機加活性炭，開攪拌機攪勻。(6)調pH用滴管吸取物質的量濃度為1 mol/L的NaOH溶液，逐滴滴入溶化的培養基中， 邊滴邊攪拌，并隨時用精密的pH試紙(5.47.0)測培養基的pH,一直到培養基的pH為5.8為止(培養基的pH必須嚴格控制在5.8)(7)將培養基分裝到所選用的培養容器中，約30ml/瓶。(8)蓋住瓶口(9)滅菌。待需要滅菌的物品碼放完畢，蓋上鍋蓋。在98 kPa、121.3 CT,滅菌20 min。滅菌后取出錐形瓶，讓其中的培養基自然冷卻凝固。最好放置1d后再使用。四、分析1. MS母液分得更加細，一般實驗室只分大量元素、微量元素、鐵鹽、有機成分四大類。這里將大量元

5、素中鈣離子與硫酸根離子分開配，避免產生不溶物，將硼酸也單獨列出來。另外， 培養基中各營養物質之間的濃度配比也直接影響微生物的生長繁殖和(或)代謝產物的形成和積累。2.在配制培養基時應盡量利用廉價且易丁獲得的原料作為培養基成分。例如能用卡拉膠就不 用瓊脂。3.用攪拌機比較方便。但要人工不好，分配溶液缺乏量化。4.加入活性炭可使培養基變黑，有利丁離體生根，還可以降低分泌物的蠹害作用。3附：MS培養基配方:成分分子量使用濃度（mg/L）大量元素（母液I）硝酸鉀101.111900硝酸鉉80.041650磷酸二氫鉀136.09170硫酸鎂246.47370氯化鈣147.02440微量元素（母液U）碘化鉀166.010.83硼酸61.836.2硫酸鋌223.0122.3硫酸鋅287.548.6鉗酸鈉241.950.25硫酸銅249.680.025氯化鉆237.930.025鐵鹽（母液m）乙二胺四乙酸二鈉372.2537.3硫酸業鐵