1、實驗一 MS培養基配制和滅菌一.目的和要求：1 .學會MS培養基的制作方法；2 .掌握高壓滅菌的方法和基本操作。二、儀器與試劑1 .儀器：滅菌鍋、解剖刀、槍狀銀子、燒杯（500ml）、培養皿、移液管等2 .試齊1J: MS白Macro-e、Micro-e、有機母液、F祈、肌醇蔗糖，瓊脂粉，1N NaoH和 1N HCl三、方法步驟（一）配方設計：以MS為基本培養基（mg/L）No.6-BANAAIBACK0012345（二）配制培養基（1）溶化瓊脂：量取300ml左右蒸儲水，加入4.8g瓊脂粉，加熱溶解直至完全 融化。（2）各種母液的吸取：Macro-e 50mlMicro-e 1ml有機成分

2、1mlFelt5ml肌醇10ml加在一起，倒入燒杯（1L）（3）加入糖：稱取30g蔗糖，溶于溶有瓊脂的 300ml蒸儲水中。(4)根據實驗設計，量取生長調節劑：加在一起，倒入燒杯。(5)定容:加蒸儲水(用量杯)。(6)調節pH至，用pH試紙進行測定，用ImolHcl或1Mol NaoH調節。(7)分裝:3040 ml/瓶6,培養基勿碰三角瓶口。(8)用具清理和洗滌：各種母液按原位置擺整齊，用過的量筒，移液管、燒杯、鋁鍋等用水洗滌干凈，然后按次序放回原處。(三)滅菌：用高壓蒸汽消毒器滅菌，其壓力為，溫度為120126C,保持1520 min。具體操作步驟：1. 加水；2. 把包扎好的培養基裝入高

3、壓鍋；3. 蓋上熱壓鍋蓋，上緊螺帽(注意對角才?緊螺帽)關上氣閥和安全閥；4. 加熱；5. 排除冷空氣；6. 排除冷空氣后，關閉放氣閥，待壓力升到1Kg位置時，開始計算滅菌時間， 一般在1Kg壓力(121 C)下滅菌1520分鐘即可，但要注意保持穩定壓力。7. 滅菌時間達到20分鐘后，停止加熱，待壓力自動降到0磅時，打開放氣閥， 打開熱壓滅菌鍋蓋(注意對角扭松螺帽)稍待冷后再把培養基取出。四.作業1 .總結配制培養基的注意事項。2 .制作培養基前為何要提前配制母液實驗二短柄五加無性系建立一.目的和要求：1 .學習并掌握外植體的消毒方法及具體操作；2 .掌握無菌操作技術。二、材料、儀器與試劑1

4、.材料：短柄五加休眠枝短柄五加（Eleutherococcus brachypuSHarms.）為五加科五加屬灌木，在我國的 分布范圍極其狹窄，主要分布于西北黃土高原，逐漸被認為是瀕危植物。具莖具 有較高的藥用價值，有治療神經衰弱、婦女更年期綜合癥、繼發性高血壓、白細 胞減少等功效。2 .儀器：超凈工作臺、滅菌鍋、彎頭剪、槍狀銀子、燒杯（500ml）、培養皿 等3 .試劑：配制好的 MS培養基各種母液、1mol/L的NaOH、1mol/LHCL %的升 汞、70%勺乙醇。三、方法步驟（一）無菌操作準備階段接種室：1、紫外燈提前照20-30min。2、70%乙醇或新潔爾噴霧消毒。操作人員：1、穿

5、專用實驗服，戴口罩。2、剪短指甲，流水洗手三次。操作階段1、 清理工作臺面，70%乙醇擦三次。2、 70%乙醇擦手三次。3、避免說話和來回走動（二）無性系建立1 .配制啟動培養基CK MS MS+6-BA 0. 5 mg/L + L MS+6-BA mg/L + L MS+6-BA 2. 0 mg/L + L MS+6-BA 1.0 mg/L + L MS+6-BA 2. 0 mg/L + L2 .材料的選擇：選用的枝條要求表面光滑、無病蟲害。3 .培養步驟：(1)外植體消毒：去雜一流水水洗 12h70%乙醇(8-10s) 一無菌水洗 3-5次一 HgC2 (10min) 一無菌水水洗5次(2)接種：用剪刀將滅菌后的枝條剪成 長約11.5 cm的單芽莖段。將莖段按其自然 極性方向垂直插入培養基，每瓶只接一個。對接種用具、超凈臺面、操作者手等 進行適當滅菌處理，繼續接種。(3)培養：培養物置于 25C左右的培養室中，每天光照 12小時，光照度 為 850-1200lx。(4)觀察：定期觀察培養物的生長情況，及時將污染材料取出。四、作業1、總結本實驗外植體的消毒過程及關鍵步驟。2、進行試驗結果的觀測、比較和記錄，并通過分析篩選出月季無性系