1、會計學1菌種的傳代與保藏菌種的傳代與保藏一、菌種保藏的意義一、菌種保藏的意義菌菌 種種培培 養(yǎng)養(yǎng) 基基保存溫保存溫度度傳傳 種種 時時 間間細細 菌菌一般多用于營養(yǎng)瓊脂一般多用于營養(yǎng)瓊脂或根據菌種規(guī)定選用或根據菌種規(guī)定選用培養(yǎng)基培養(yǎng)基46芽孢桿菌芽孢桿菌36個月，個月，其它細菌每個月其它細菌每個月酵母菌酵母菌一般用麥芽汁瓊脂或一般用麥芽汁瓊脂或麥芽汁酵母膏瓊脂麥芽汁酵母膏瓊脂46一般一般46個月個月絲狀真絲狀真菌菌一般用PDA瓊脂、蔡氏瓊脂或麥芽汁瓊脂等46每每4個月移植一次（個月移植一次（每每2個月移植一次個月移植一次）（3）特點：）特點： 優(yōu)點是優(yōu)點是簡便，易于推廣；一般不需簡便，易于推廣

2、；一般不需要另選擇保藏用培養(yǎng)基；對大多數微生物都要另選擇保藏用培養(yǎng)基；對大多數微生物都適用。適用。 缺點是缺點是保藏期較短；傳代次數多易保藏期較短；傳代次數多易發(fā)生變異及污染。發(fā)生變異及污染。菌菌 種種菌株數菌株數保存時間保存時間（年）（年）存活率（存活率（%）細菌細菌霉菌霉菌酵母菌酵母菌放線菌放線菌87586400380552420.983.688.991.33. 將沾有少量液體石蠟的接種針浸于將沾有少量液體石蠟的接種針浸于95%酒精中片刻，再燒灼滅菌，以免直接酒精中片刻，再燒灼滅菌，以免直接在酒精燈下燒灼時，液體石蠟四濺，引起在酒精燈下燒灼時，液體石蠟四濺，引起污染。污染。 4. 液體石蠟

3、在菌種管中高出培養(yǎng)基的液體石蠟在菌種管中高出培養(yǎng)基的高度要嚴格控制，如太多，會影響菌種交高度要嚴格控制，如太多，會影響菌種交換氣體，使保藏效果不好；如太少，斜面換氣體，使保藏效果不好；如太少，斜面容易干燥，將縮短保藏期。一般以高出斜容易干燥，將縮短保藏期。一般以高出斜面面1 為宜。為宜。 5. 制備無菌液體石蠟時，每管裝量不制備無菌液體石蠟時，每管裝量不能太多，否則分裝到菌種培養(yǎng)基中易造成能太多，否則分裝到菌種培養(yǎng)基中易造成污染。污染。 半固體瓊脂培養(yǎng)基（半固體瓊脂培養(yǎng)基（0.5%） 液體石蠟保存液體石蠟保存 1 菌種的復蘇菌種的復蘇 參考流程：參考流程：把凍干菌種管、滅菌滴管、雙碟、鑷子、營

4、養(yǎng)肉把凍干菌種管、滅菌滴管、雙碟、鑷子、營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、滅菌生理鹽水、營養(yǎng)瓊脂斜面數支，移入湯培養(yǎng)基、滅菌生理鹽水、營養(yǎng)瓊脂斜面數支，移入接種室或凈化工作臺。接種室或凈化工作臺。先用砂輪將凍干菌種安瓶頸部挫出刻痕先用砂輪將凍干菌種安瓶頸部挫出刻痕,再將凍再將凍干菌種管外壁用碘酒擦洗消毒、稍干，用干菌種管外壁用碘酒擦洗消毒、稍干，用75% 乙醇棉乙醇棉擦凈，放在滅菌雙碟內，待干。點燃酒精燈，將菌種擦凈，放在滅菌雙碟內，待干。點燃酒精燈，將菌種管的封口一端在火焰上，燒灼紅熱，用滅菌滴管吸取管的封口一端在火焰上，燒灼紅熱，用滅菌滴管吸取滅菌生理鹽水，滴在灼熱的菌種管封口一端，使驟冷滅菌生理鹽水，滴在

5、灼熱的菌種管封口一端，使驟冷而炸裂。而炸裂。 取滅菌鑷子，在火焰旁，將炸裂的管口打開取滅菌鑷子，在火焰旁，將炸裂的管口打開，放入滅菌雙碟內，另取，放入滅菌雙碟內，另取1支滅菌滴管，在火焰支滅菌滴管，在火焰旁吸取營養(yǎng)肉湯少許，加至菌種管底部，將凍干旁吸取營養(yǎng)肉湯少許，加至菌種管底部，將凍干菌攪動促使溶解，隨即吸出管內菌液，接種至營菌攪動促使溶解，隨即吸出管內菌液，接種至營養(yǎng)肉湯內，并將滴管及菌種管投入消毒液內，將養(yǎng)肉湯內，并將滴管及菌種管投入消毒液內，將已接種的營養(yǎng)肉湯置已接種的營養(yǎng)肉湯置3537培養(yǎng)培養(yǎng)2224 h。 取出培養(yǎng)物，接種至營養(yǎng)瓊脂斜面于取出培養(yǎng)物，接種至營養(yǎng)瓊脂斜面于353537

6、37培養(yǎng)培養(yǎng)222224h24h，取出后仔細觀察菌苔形態(tài)、，取出后仔細觀察菌苔形態(tài)、有無雜菌、涂片、革蘭氏染色鏡檢，呈典型菌落有無雜菌、涂片、革蘭氏染色鏡檢，呈典型菌落后，轉種后，轉種3 代即可應用。如發(fā)現菌型不典型，可代即可應用。如發(fā)現菌型不典型，可進行平板分離單菌落。進行平板分離單菌落。 方法方法2：菌斜面：菌斜面 營養(yǎng)肉湯營養(yǎng)肉湯 分離平板分離平板 菌斜面菌斜面 如果菌落形態(tài)不典型可純化，按下列方法傳代如果菌落形態(tài)不典型可純化，按下列方法傳代（分離菌落）（分離菌落） ： 用接種環(huán)取上述菌管（斜面）菌苔少許接種置用接種環(huán)取上述菌管（斜面）菌苔少許接種置營養(yǎng)肉湯中營養(yǎng)肉湯中(已滅菌已滅菌),

7、 置置3537培養(yǎng)培養(yǎng)1824小時后，小時后，再用接種環(huán)取培養(yǎng)好的營養(yǎng)肉湯菌懸液（濃菌液）再用接種環(huán)取培養(yǎng)好的營養(yǎng)肉湯菌懸液（濃菌液），接種于分離平板，置，接種于分離平板，置3537培養(yǎng)培養(yǎng)1824小時，用小時，用接種針選典型菌落劃線于營養(yǎng)瓊脂斜面，置接種針選典型菌落劃線于營養(yǎng)瓊脂斜面，置3537培養(yǎng)培養(yǎng)1824小時。一般同時接種幾支管，其中一支用小時。一般同時接種幾支管，其中一支用于以后菌種傳代或接種到半固體瓊脂培養(yǎng)基中，其于以后菌種傳代或接種到半固體瓊脂培養(yǎng)基中，其它用做工作菌種。它用做工作菌種。l金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基l金黃色，圓形凸起，

8、邊緣整齊，外圍有黃色環(huán)金黃色，圓形凸起，邊緣整齊，外圍有黃色環(huán)l沙門菌沙門菌SS瓊脂平板瓊脂平板l無色，透明或半透明，光滑濕潤的圓形菌落無色，透明或半透明，光滑濕潤的圓形菌落菌種菌種菌種菌種工作菌種培養(yǎng)工作菌種培養(yǎng)基基菌懸液菌懸液對照菌液對照菌液大腸桿菌大腸桿菌營養(yǎng)瓊脂斜面營養(yǎng)瓊脂斜面營養(yǎng)肉湯營養(yǎng)肉湯0.9%氯化鈉溶氯化鈉溶液液沙門菌沙門菌營養(yǎng)瓊脂斜面營養(yǎng)瓊脂斜面營養(yǎng)肉湯營養(yǎng)肉湯0.9%氯化鈉溶氯化鈉溶液液金黃色葡萄球金黃色葡萄球菌菌營養(yǎng)瓊脂斜面營養(yǎng)瓊脂斜面營養(yǎng)肉湯營養(yǎng)肉湯0.9%氯化鈉溶氯化鈉溶液液銅綠假單胞菌銅綠假單胞菌營養(yǎng)瓊脂斜面營養(yǎng)瓊脂斜面營養(yǎng)肉湯營養(yǎng)肉湯0.9%氯化鈉溶氯化鈉溶液液生

9、孢梭菌生孢梭菌硫乙醇酸鹽流體硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基培養(yǎng)基硫乙醇酸鹽流體硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基培養(yǎng)基0.9%氯化鈉溶氯化鈉溶液液白色念珠菌白色念珠菌真菌瓊脂斜面真菌瓊脂斜面真菌培養(yǎng)基真菌培養(yǎng)基0.9%氯化鈉溶氯化鈉溶液液 由于驗證試驗中包括黑曲霉菌，在轉由于驗證試驗中包括黑曲霉菌，在轉種或洗菌時應注意關閉無菌室或超凈工種或洗菌時應注意關閉無菌室或超凈工作臺的抽風機并在酒精燈火焰旁操作，作臺的抽風機并在酒精燈火焰旁操作，以免菌孢子飛揚。從事微生物檢查的工以免菌孢子飛揚。從事微生物檢查的工作人員也應該注意個人防護，避免由操作人員也應該注意個人防護，避免由操作不當而導致的生物危險。除生物危險作不當而導致的生物危險。除生物危險外，還應加強微生物檢查的安全管理。外，還應加強微生物檢查的安全管理。 1 菌種的復蘇菌種的復蘇 參考流程：參考流程：把凍干菌種管、滅菌滴管、雙碟、鑷子、營養(yǎng)肉把凍干菌種管、滅菌滴管、雙碟、鑷子、營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、滅菌生理鹽水、營養(yǎng)瓊脂斜面數支，移入湯培養(yǎng)基、滅菌生理鹽水、營養(yǎng)瓊脂斜面數支，移入接種室或凈化工作臺。接種室或凈化工作臺。先用砂輪將凍干菌種安瓶頸部挫出刻痕先用砂輪將凍干菌種安瓶頸部挫出刻痕,再將凍再將凍干菌種管外壁用碘酒擦洗消毒、稍干，用干菌種管外壁用碘酒擦洗消毒、稍干，用7