1、不同補腎法誘導骨髓間充質干細胞對腦梗死大鼠神經功能恢復促進作用摘要：目的探討不同補腎法誘導的骨髓間充質干細 胞（bmscs）對腦梗死大鼠神經功能恢復的影響。方法用線 栓法制備大鼠大腦中動脈梗死（mcao）模型，隨機分為假手 術組、模型組、單純bmscs移植組及左歸丸、右歸丸、地黃 飲子、維甲酸誘導bmscs移植組。移植后3、7、14 d進行 大鼠神經功能綜合測評，于移植后7、14 d處死大鼠，采用 ttc染色法測定腦梗死面積，并采用免疫組化方法檢測腦組 織神經突觸素（syn）的表達。結果與模型組比較，各移植 組7、14 d的神經功能評分均顯著增高（p 2.6移植 后大鼠神經功能綜合測評神經功能

2、測評方法按文獻3-5從自發運動、輕癱實驗、 角膜反射、耳道反射、痛覺、霍納征6個方面進行，總分為 18分，癥狀越重，得分越少。神經功能測評時間在術后3、 7、14 d進行。測評標準：自發活動：3分，四周活動， 探索環境，至少到達三面墻壁；2分，活動少、遲疑、緩慢, 但最終至少探索一面墻壁；1分，飼養筐內緩慢活動，不探 索筐壁。四肢對稱運動（輕癱實驗）：3分，四肢對稱伸展; 2分，右側肢體伸展較左側差；1分，右側肢體活動明顯減 少。角膜反射：3分，靈敏，左右對稱；2分，右側較左側差；1分，右側反射缺如。耳道反射：3分，左右對稱, 靈敏；2分，右側較左側差；1分，右側反射缺如。痛覺: 3分，針刺疼

3、痛刺激反應兩側對稱靈敏；2分，右側疼痛刺 激反應較左側差；1分，右側疼痛刺激無反應。霍納征：3 分，雙眼瞼等大，對稱；2分，右眼瞼縮小；1分，右眼瞼 閉合，眼球內陷。2.7 2, 3, 5-氯化三苯基四氮哩染色法測定腦梗死面積于移植后7、14 d處死大鼠，斷頭取腦，去除嗅球、小 腦和腦干，立即將腦組織置-20 °c冰箱20 min,取冠狀面均 勻切成1 nun厚腦片56片，將第三切片迅速置于2%ttc溶 液(37 °c)中染色30 min左右，觀察染色效果。數碼相機 拍照。正常腦組織為紅色，梗死區域腦組織為白色，用 autocad軟件計算和測定腦組織梗死面積和總腦片面積，以

4、 腦梗死面積占總腦片面積百分數(%)表示。2.8腦組織神經突觸素表達水平的檢測于移植后7、14 d用10%水合氯醛腹腔麻醉大鼠，手術充分暴露心臟,以9號注射針頭通過左心室心尖部穿刺插管至主動脈弓，切開右心耳。先以0.9%氯化鈉溶液大約120 ml快速灌流，待右心耳流出無色透明液體，再以4%多聚甲醛灌 注固定，直至肝臟退色變硬，四肢、尾變硬，開顱取出全腦, 用4工生理鹽水沖洗3次，除去積血，用濾紙吸去表面水分, 去除嗅球、小腦和腦干。于冰盤上快速分離右側大腦半球, 棄去左側大腦半球，以前囪為中心前后1 mm (病變損害的中 心)冠狀切取大鼠腦組織，置于4%多聚甲醛固定液中，切取 厚約2 mm的腦

5、組織，常規石蠟包埋，用免疫組化法進行測 定。syn陽性反應呈棕黃色，呈細索狀或小圓形分布。每組 觀察6張切片，合計30個視野，計數陽性細胞，計算平均 值。3統計學方法應用spss16.0統計軟件進行統計分析，數據用一x土s 表示，采用方差分析，p0. 05), 7、14 d的神經功能評分均 顯著增高(p 參考文獻：1 yuji k, kazuo m, takenori y, et al. nylonmomofilament for intraluminal middle cerebral artery occlusion in rat j stroke, 1995, 26： 1655-1657

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