1、非生物及生物脅迫下脫水蛋白非生物及生物脅迫下脫水蛋白研究進展研究進展Progress in Research of Dehydrins Response to Abiotic and Biotic Stresses 非生物及生物脅迫下脫水蛋白的研究進展非生物及生物脅迫下脫水蛋白的研究進展 23與大分子結合的脫水蛋白與大分子結合的脫水蛋白與小分子結合的脫水蛋白與小分子結合的脫水蛋白無序結構的脫水蛋白無序結構的脫水蛋白14參與生物脅迫的脫水蛋白參與生物脅迫的脫水蛋白植物與非生物逆境脅迫植物與非生物逆境脅迫膜脂相變膜脂相變排列紊亂排列紊亂形成孔隙形成孔隙脂質過氧化脂質過氧化疏水基團外翻疏水基團外翻從

2、膜上脫落從膜上脫落流動性降低流動性降低膜脂、蛋白解體膜脂、蛋白解體細胞內容物外漏細胞內容物外漏離子、滲透平衡破壞離子、滲透平衡破壞植物與非生物逆境脅迫植物與非生物逆境脅迫第一個脫水蛋白的發現第一個脫水蛋白的發現4個干旱誘個干旱誘導蛋白導蛋白 ABA處理處理的大麥胡的大麥胡粉粒粉粒 干旱處理干旱處理的玉米幼的玉米幼苗苗 &1989年年脫水蛋白脫水蛋白Dehydrin植物應對逆境脅迫的代謝和分子基礎植物應對逆境脅迫的代謝和分子基礎脫水蛋白相關背景脫水蛋白相關背景-1980s，第一次報道脫水蛋白，第一次報道脫水蛋白-Late embryogenesis abundant protein, 第

3、第2組組LEA蛋白蛋白-第第2組組-Y，S和和K片段片段-5個亞類個亞類(Kn、SKn、KnS、YnKn和和YnSKn )三個保守片段三個保守片段脫水蛋白相關背景脫水蛋白相關背景堿性或酸性堿性或酸性干旱干旱&ABA酸性酸性低溫低溫&干旱干旱酸性或中性酸性或中性低溫低溫酸性酸性干旱干旱&低溫低溫酸性酸性低溫低溫無序結構的脫水蛋白無序結構的脫水蛋白 缺乏有序的高級結構是脫水蛋白最基本的缺乏有序的高級結構是脫水蛋白最基本的生化特征之一生化特征之一 脫水蛋白富含甘氨酸、帶電荷氨基酸和極脫水蛋白富含甘氨酸、帶電荷氨基酸和極性氨基酸性氨基酸 大部分脫水蛋白不含有半胱氨酸殘基或其大部

4、分脫水蛋白不含有半胱氨酸殘基或其他疏水結構域他疏水結構域 無序結構的脫水蛋白無序結構的脫水蛋白 無序蛋白無序蛋白生理狀態或天然狀態下沒有特定高級結構的生理狀態或天然狀態下沒有特定高級結構的蛋白質總稱，蛋白質總稱， 約占真核生物總蛋白的約占真核生物總蛋白的1/3 細胞內的無序蛋白可以分為完全無序蛋白和部分無序蛋白細胞內的無序蛋白可以分為完全無序蛋白和部分無序蛋白 無序蛋白的發現是對經典的無序蛋白的發現是對經典的“結構結構-功能功能”范式的挑戰范式的挑戰 無序蛋白靈活易變，有與多種底物結合的潛能，是細胞中無序蛋白靈活易變，有與多種底物結合的潛能，是細胞中的高效部隊，是目前蛋白質組學研究中的重點與熱

5、點的高效部隊，是目前蛋白質組學研究中的重點與熱點無序蛋白無序蛋白無序蛋白的基本特征無序蛋白的基本特征 以無序卷曲的形式存在于水溶液中以無序卷曲的形式存在于水溶液中 100.00Total100.00無序卷曲無序卷曲0.00-轉角轉角0.00-折疊折疊0.00-螺旋螺旋占肽鏈的百分百占肽鏈的百分百 (%) 二級結構名稱二級結構名稱無序蛋白的基本特征無序蛋白的基本特征 高溫處理不發生沉淀高溫處理不發生沉淀無序蛋白無序蛋白 vs 蛋白變性聚集蛋白變性聚集MpASR熱穩定性分析熱穩定性分析無序蛋白熱穩定性分析無序蛋白熱穩定性分析BSA(-)表示未經表示未經100熱處理的熱處理的BSA蛋白；蛋白；BSA

6、(+)表示經表示經100熱處理熱處理30分鐘的分鐘的BSA蛋白；蛋白；MpASR(-)表示未經表示未經100熱處理的熱處理的MpASR蛋白；蛋白；MpASR(+)表示經表示經100熱處理熱處理30分鐘的分鐘的MpASR蛋白。蛋白。 無序蛋白的基本特征無序蛋白的基本特征 SDS-PAGE電泳遷移率較小電泳遷移率較小 對蛋白酶高度敏感對蛋白酶高度敏感 結構柔韌，可在無序與有序間變換結構柔韌，可在無序與有序間變換 無序蛋白的生物學優勢無序蛋白的生物學優勢 易結合性：由于無序結構呈線狀延伸，使得它很容易被其易結合性：由于無序結構呈線狀延伸，使得它很容易被其他分子所識別和結合；可以在較大范圍內與其他蛋白

7、質或他分子所識別和結合；可以在較大范圍內與其他蛋白質或大分子結構結合，其功能位點能夠高效的與其他大分子進大分子結構結合，其功能位點能夠高效的與其他大分子進行結合和組裝行結合和組裝 空間優越性：無序結構可以節省空間，未折疊多肽在細胞空間優越性：無序結構可以節省空間，未折疊多肽在細胞中所占據的空間與具高級結構的大分子相比要小的多；當中所占據的空間與具高級結構的大分子相比要小的多；當多個蛋白質同時結合于某一位點時，無序結構可以使這種多個蛋白質同時結合于某一位點時，無序結構可以使這種結合更緊密；同時還有利于完成互作后，不同成分的轉換結合更緊密；同時還有利于完成互作后，不同成分的轉換 高度協調性，大范圍

8、、多組分的互作結合需要高度的協調，高度協調性，大范圍、多組分的互作結合需要高度的協調，無序蛋白中所含的多個重復結合基序可以有效地協調蛋白無序蛋白中所含的多個重復結合基序可以有效地協調蛋白間的相互作用，使得大分子的組裝與分解更加高效間的相互作用，使得大分子的組裝與分解更加高效與大分子結合的脫水蛋白與大分子結合的脫水蛋白 脫水蛋白高度保守結構基元脫水蛋白高度保守結構基元K片段可以形成片段可以形成雙親性雙親性-螺旋，與大分子膜脂結合螺旋，與大分子膜脂結合 利用去垢劑，可以從膜碎片小泡中分離到脫水蛋利用去垢劑，可以從膜碎片小泡中分離到脫水蛋白白 氨基端的氨基端的Y-片段含有核酸結合結構域，因此脫水片段

9、含有核酸結合結構域，因此脫水蛋白還可能與核酸結合蛋白還可能與核酸結合 柑橘脫水蛋白柑橘脫水蛋白CuCOR5具有鋅離子依賴的核酸結具有鋅離子依賴的核酸結合功能合功能 與核酸的結合不是脫水蛋白的保守功能與核酸的結合不是脫水蛋白的保守功能與大分子結合的脫水蛋白與大分子結合的脫水蛋白 利用哺乳動物纖維母細胞篩選系統的研究表明擬利用哺乳動物纖維母細胞篩選系統的研究表明擬南芥南芥ERD10與與COR47是與細胞骨架互作的蛋白是與細胞骨架互作的蛋白 ERD10可以直接與肌動蛋白微絲結合，抑制肌動可以直接與肌動蛋白微絲結合，抑制肌動蛋白聚合蛋白聚合 磷脂質，核酸和細胞骨架這一類的大分子是細胞磷脂質，核酸和細胞

10、骨架這一類的大分子是細胞遭受脅迫時比較敏感的大分子。對脫水蛋白的研遭受脅迫時比較敏感的大分子。對脫水蛋白的研究表明，與這些大分子的結合可能是脫水蛋白在究表明，與這些大分子的結合可能是脫水蛋白在植物細胞遭受脅迫時發揮保護功能的關鍵植物細胞遭受脅迫時發揮保護功能的關鍵與小分子結合的脫水蛋白與小分子結合的脫水蛋白 水分脅迫可能引起從細胞器或膜上釋放金水分脅迫可能引起從細胞器或膜上釋放金屬離子，從而導致細胞內自由金屬離子濃屬離子，從而導致細胞內自由金屬離子濃度增大，而脫水蛋白與金屬離子的結合可度增大，而脫水蛋白與金屬離子的結合可以減輕由自由離子造成的傷害以減輕由自由離子造成的傷害金屬離金屬離子結合性子

11、結合性 分離得到的玉米胚的分離得到的玉米胚的Rab17蛋白是磷酸化形蛋白是磷酸化形式的，這是第一次報道脫水蛋白的磷酸式的，這是第一次報道脫水蛋白的磷酸化化 與磷酸基團結合性與磷酸基團結合性與小分子結合的脫水蛋白與小分子結合的脫水蛋白 各種逆境脅迫還會引起活性氧的積累各種逆境脅迫還會引起活性氧的積累 活性氧首先是對生物膜系統造成損傷，導致細胞膜過氧化，活性氧首先是對生物膜系統造成損傷，導致細胞膜過氧化，超氧化物歧化酶和其他清除自由基的酶類活力下降，同時超氧化物歧化酶和其他清除自由基的酶類活力下降，同時產生大量的膜脂過氧化產物，破壞膜脂的完整性和穩定性；產生大量的膜脂過氧化產物，破壞膜脂的完整性和

12、穩定性；膜系統的破壞會引起一系列生理生化紊亂。膜系統的破壞會引起一系列生理生化紊亂。ROS還對生物還對生物大分子如蛋白質和核酸造成氧化損傷大分子如蛋白質和核酸造成氧化損傷 脫水蛋白具有與活性氧分子結合的能力，對柑橘脫水蛋白具有與活性氧分子結合的能力，對柑橘CuCOR19蛋白的研究表明，蛋白的研究表明，CuCOR19蛋白能特異結合羥蛋白能特異結合羥基自由基和過氧化自由基的能力，羥基自由基作用的靶位基自由基和過氧化自由基的能力，羥基自由基作用的靶位點主要是點主要是Gly、His和和Lys，而脫水蛋白中富含這些氨基酸，而脫水蛋白中富含這些氨基酸，因此脫水蛋白可能在活性氧爆發的情況下通過自我犧牲的因此

13、脫水蛋白可能在活性氧爆發的情況下通過自我犧牲的方式消耗活性氧從而保護其它蛋白質免受損傷方式消耗活性氧從而保護其它蛋白質免受損傷 脫水蛋白具有活性氧結合與清除能力脫水蛋白具有活性氧結合與清除能力與小分子結合的脫水蛋白與小分子結合的脫水蛋白 脫水蛋白還可以與水分子結合脫水蛋白還可以與水分子結合 在水分脅迫細胞中維持水分，維持滲透壓在水分脅迫細胞中維持水分，維持滲透壓 保護蛋白在細胞內離子平衡打破時不發生保護蛋白在細胞內離子平衡打破時不發生變性變性脫水蛋白可能發揮功能示意圖脫水蛋白可能發揮功能示意圖參與生物脅迫的脫水蛋白參與生物脅迫的脫水蛋白 不同的研究小組發現，水楊酸不同的研究小組發現，水楊酸(S

14、A)和茉莉酸和茉莉酸(JA)可以誘導特殊的脫水蛋白如厚葉旋蒴苣苔的可以誘導特殊的脫水蛋白如厚葉旋蒴苣苔的BcDh2表達表達 值得引起注意的是，值得引起注意的是，SA和和JA通常與植物抗生物脅通常與植物抗生物脅迫相關迫相關 同時，同時，Turco等人發現在抗旱櫟樹等人發現在抗旱櫟樹Quercus ilex受受到疫霉菌到疫霉菌Phytophthora cinnamomi侵染時，會表達侵染時，會表達若干個類脫水蛋白若干個類脫水蛋白 這些實驗結果均表明，除了參與水分脅迫外，脫這些實驗結果均表明，除了參與水分脅迫外，脫水蛋白還可能與生物脅迫相關水蛋白還可能與生物脅迫相關參與生物脅迫的脫水蛋白參與生物脅迫

15、的脫水蛋白 小麥脫水蛋白DHN-5異源表達于擬南芥中時，不僅可以幫助植物抗水分脅迫，還具有多重抗脅迫功能 參與生物脅迫的脫水蛋白參與生物脅迫的脫水蛋白 DHN-5異源過表達還影響了茉莉酸異源過表達還影響了茉莉酸(JA)信號通路信號通路 茉莉酸茉莉酸ZIM結構域結構域(JAZ)家族三個成員，家族三個成員，JAZ10、JAZ7和和JAZ5均下調表達均下調表達2.5至至10倍不等倍不等 病程相關蛋白家族的病程相關蛋白家族的PR1、PR13和和PR14的轉錄分的轉錄分別上調別上調2、2.6和和3.38倍倍 DHN-5轉基因株與野生型相比更加耐受轉基因株與野生型相比更加耐受JA的處理的處理 參與生物脅迫

16、的脫水蛋白參與生物脅迫的脫水蛋白參與生物脅迫的脫水蛋白參與生物脅迫的脫水蛋白小結小結 脫水蛋白在非生物脅迫過程中發揮重要作用，具有脫水蛋白在非生物脅迫過程中發揮重要作用，具有多種功能。有些脫水蛋白可能同時發揮多種功能，多種功能。有些脫水蛋白可能同時發揮多種功能，而一些脫水蛋白只能發揮單一功能。而一些脫水蛋白只能發揮單一功能。 結合酸性磷酸脂、離子和抗凍保護能力被認為是脫結合酸性磷酸脂、離子和抗凍保護能力被認為是脫水蛋白的基本功能。水蛋白的基本功能。 逆境脅迫和病害是影響植物生長發育的一個重要因逆境脅迫和病害是影響植物生長發育的一個重要因素，深入研究脫水蛋白在非生物脅迫和生物脅迫中素，深入研究脫

17、水蛋白在非生物脅迫和生物脅迫中發揮的確切功能不僅有助于更全面的了解植物應對發揮的確切功能不僅有助于更全面的了解植物應對逆境脅迫的機制，還能為開發脫水蛋白在作物改良逆境脅迫的機制，還能為開發脫水蛋白在作物改良中的應用奠定理論基礎。中的應用奠定理論基礎。博士后期間工作博士后期間工作研究目的、意義及研究路線研究目的、意義及研究路線煙草是重要的經濟作物，是云南省財稅的重要經濟來源。煙草是重要的經濟作物，是云南省財稅的重要經濟來源。干旱等自然災害給煙草等經濟作物的生產造成了重大的損失。干旱等自然災害給煙草等經濟作物的生產造成了重大的損失。探索抗旱等非生物脅迫相關基因資源并闡明其功能對經濟作物的生長探索抗

18、旱等非生物脅迫相關基因資源并闡明其功能對經濟作物的生長及財政收入有著重要的戰略意義及廣闊的應用前景。及財政收入有著重要的戰略意義及廣闊的應用前景。 脫水蛋白響應植物體內多種造成生理性干旱的脅迫脫水蛋白響應植物體內多種造成生理性干旱的脅迫具體功能未知具體功能未知優良的候選基因優良的候選基因研究目的、意義及研究路線研究目的、意義及研究路線研究研究目的目的脫水蛋白在煙草逆境脅迫響應脫水蛋白在煙草逆境脅迫響應過程中發揮的生物學功能過程中發揮的生物學功能研究研究意義意義研究脫水蛋白在脅迫應答過程研究脫水蛋白在脅迫應答過程中發揮的生物學功能，不僅能中發揮的生物學功能，不僅能增加對植物抗逆機理的了解，增加對

19、植物抗逆機理的了解，還可為作物改良提供候選基因，還可為作物改良提供候選基因，具有研究和應用價值具有研究和應用價值研究目的、意義及研究路線研究目的、意義及研究路線研究路線研究路線RACE自然干旱處理自然干旱處理克隆到克隆到contig1045基因基因編碼蛋白編碼蛋白-17kDaNtDhn17煙草煙草Annotations Nicotiana tabacum Genbank 0502062個注釋為脫水蛋個注釋為脫水蛋白基因克隆白基因克隆contig1045contig9354 Dehydrin1 煙草脫水蛋白基因克隆及表達譜分析煙草脫水蛋白基因克隆及表達譜分析1 煙草脫水蛋白基因克隆及表達譜分析煙

20、草脫水蛋白基因克隆及表達譜分析contig1045片段的獲得片段的獲得 contig1045克隆的克隆的cDNA全長及編碼蛋白序列全長及編碼蛋白序列 contig1045克隆的克隆的cDNA全長及編碼蛋白序列全長及編碼蛋白序列 1 煙草脫水蛋白基因克隆及表達譜分析煙草脫水蛋白基因克隆及表達譜分析表達譜分析表達譜分析DMP,青霉菌滅活菌絲體青霉菌滅活菌絲體,微生物代謝產物微生物代謝產物,植物系統抗病性誘導劑植物系統抗病性誘導劑1 煙草脫水蛋白基因克隆及表達譜分析煙草脫水蛋白基因克隆及表達譜分析啟動子分析啟動子分析啟動子序列克隆啟動子序列克隆-熱不對稱熱不對稱PCR1 煙草脫水蛋白基因克隆及表達譜

21、分析煙草脫水蛋白基因克隆及表達譜分析啟動子分析啟動子分析啟動子順式作用元件分析及表達活性檢測啟動子順式作用元件分析及表達活性檢測順式作用元件名稱順式作用元件名稱可能的功能可能的功能出現頻率出現頻率ABRE響應響應ABA2ATCT-motif光響應元件光響應元件1BoxI光響應元件光響應元件1BoxIII蛋白結合位點蛋白結合位點1Box-W1真菌激活子響應元件真菌激活子響應元件2CGTCA-motif茉莉酸響應元件茉莉酸響應元件3G-BoxABA響應元件響應元件4GARE-motif赤霉素響應元件赤霉素響應元件2HSE分子伴侶結合元件分子伴侶結合元件2MBS干旱響應元件干旱響應元件3TC-ric

22、h repeat生物脅迫響應元件生物脅迫響應元件3TCA-element水楊酸響應元件水楊酸響應元件4TGACG-motif茉莉酸響應元件茉莉酸響應元件3啟動子順式作用元件分析及表達活性檢測啟動子順式作用元件分析及表達活性檢測順式作用元件名稱順式作用元件名稱可能的功能可能的功能出現頻率出現頻率ABRE響應響應ABA2ATCT-motif光響應元件光響應元件1BoxI光響應元件光響應元件1BoxIII蛋白結合位點蛋白結合位點1Box-W1真菌激活子響應元件真菌激活子響應元件2CGTCA-motif茉莉酸響應元件茉莉酸響應元件3G-BoxABA響應元件響應元件4GARE-motif赤霉素響應元件赤

23、霉素響應元件2HSE分子伴侶結合元件分子伴侶結合元件2MBS干旱響應元件干旱響應元件3TC-rich repeat生物脅迫響應元件生物脅迫響應元件3TCA-element水楊酸響應元件水楊酸響應元件4TGACG-motif茉莉酸響應元件茉莉酸響應元件3小結小結RACE - contig1045 - NtDhn17 NtDhn17基因在正常生長植物體內存在本底表達 NtDhn17基因受ABA；自然干旱和高滲脅迫；JA和SA；過氧化氫；微生物代謝產物（DMP）上調表達1 煙草脫水蛋白基因克隆及表達譜分析煙草脫水蛋白基因克隆及表達譜分析2 NtDHN17蛋白生物信息學分析蛋白生物信息學分析NtDHN

24、17二級結構預測二級結構預測在線工具在線工具HNNC、MLRC、PHD和和Predator 二級結構以無序卷曲為二級結構以無序卷曲為主主2 NtDHN17蛋白生物信息學分析蛋白生物信息學分析NtDHN17蛋白由蛋白由169個氨基酸組成個氨基酸組成為為Y2SK2類脫水蛋白類脫水蛋白NtDHN17(MW):17,773DaMtDHN(pI):6.81YSK類脫水蛋白保守結構域比對類脫水蛋白保守結構域比對2 NtDHN17蛋白生物信息學分析蛋白生物信息學分析在線工具在線工具/molkit/hydropathy/index.htmlGly 21.

25、3%,親水值親水值 1NtDHN17蛋白是親水素蛋白是親水素NtDHN17蛋白氨基酸序列分析蛋白氨基酸序列分析在線工具在線工具/molkit/hydropathy/index.htmlGly 21.3%,親水值親水值 1NtDHN17蛋白是親水素蛋白是親水素NtDHN17蛋白氨基酸序列分析蛋白氨基酸序列分析NtDHN17是無序蛋白是無序蛋白80%氨基酸序列為無序結構氨基酸序列為無序結構 NtDHN17蛋白無序性預測蛋白無序性預測在線工具在線工具http:/prdos.hgc.jp/cgi-bin/top.cgi小結小結NtDHN17蛋白是

26、一個Y2SK2類中性脫水蛋白 NtDHN17蛋白二級結構以無序卷曲為主NtDHN17蛋白是一個高度親水的無序蛋白2 NtDHN17蛋白生物信息學分析蛋白生物信息學分析3 NtDHN17蛋白功能初步研究蛋白功能初步研究 NtDHN17亞細胞定位亞細胞定位細胞核細胞核3 NtDHN17蛋白功能初步研究蛋白功能初步研究原核表達獲得體外重組原核表達獲得體外重組NtDHN17蛋白蛋白IPTG濃度濃度誘導時間誘導時間過柱純化過柱純化預測大小：預測大小：17.7kDaSDS-PAGE：25kDa無序蛋白特征之一：遷移率無序蛋白特征之一：遷移率NtDHN17蛋白蛋白生化性質生化性質研究方法研究方法高溫誘導變性

27、沉淀高溫誘導變性沉淀胰蛋白酶敏感實驗胰蛋白酶敏感實驗3 NtDHN17蛋白功能初步研究蛋白功能初步研究蛋白聚集沉淀實驗蛋白聚集沉淀實驗無序性無序性親水性親水性3 NtDHN17蛋白功能初步研究蛋白功能初步研究NtDHN17蛋白無序結構驗證蛋白無序結構驗證-熱穩定性熱穩定性熱聚集實驗表明熱聚集實驗表明NtDHN17蛋白具有無序蛋白蛋白具有無序蛋白典型特征，在高溫處理后不發生聚集沉淀；典型特征，在高溫處理后不發生聚集沉淀；與鋅離子結合后，獲得高級構象，失去了與鋅離子結合后，獲得高級構象，失去了無序蛋白在高溫條件下保持水溶性的特征。無序蛋白在高溫條件下保持水溶性的特征。 DHN(-)表示未經熱處理的

28、表示未經熱處理的NtDHN17蛋白；蛋白；DHN(+)表示經表示經100熱處理熱處理30分鐘的分鐘的NtDHN17蛋白；蛋白；DHN-Zn2+(+)表示與鋅離子結合后熱處理表示與鋅離子結合后熱處理30分鐘的分鐘的NtDHN17蛋白；蛋白；BSA(-)表示未經熱處理的表示未經熱處理的BSA蛋白；蛋白；BSA(+)表示經表示經100熱處理熱處理30分鐘的分鐘的BSA蛋白；蛋白；BSA-Zn2+(+)表示與鋅離子結合后熱處理表示與鋅離子結合后熱處理30分鐘的分鐘的BSA蛋白；蛋白；DHN(-)表示未經熱處理的表示未經熱處理的NtDHN17蛋白；蛋白；DHN(+)表示經表示經100熱處理熱處理30分鐘

29、的分鐘的NtDHN17蛋白；蛋白；DHN-Zn2+(+)表示與鋅離子結合后熱處理表示與鋅離子結合后熱處理30分鐘的分鐘的NtDHN17蛋白；蛋白；BSA(-)表示未經熱處理的表示未經熱處理的BSA蛋白；蛋白；BSA(+)表示經表示經100熱處理熱處理30分鐘的分鐘的BSA蛋白；蛋白；BSA-Zn2+(+)表示與鋅離子結合后熱處理表示與鋅離子結合后熱處理30分鐘的分鐘的BSA蛋白；蛋白；DHN(-)表示未經熱處理的表示未經熱處理的NtDHN17蛋白；蛋白；DHN(+)表示經表示經100熱處理熱處理30分鐘的分鐘的NtDHN17蛋白；蛋白；DHN-Zn2+(+)表示與鋅離子結合后熱處理表示與鋅離子

30、結合后熱處理30分鐘的分鐘的NtDHN17蛋白；蛋白；BSA(-)表示未經熱處理的表示未經熱處理的BSA蛋白；蛋白；BSA(+)表示經表示經100熱處理熱處理30分鐘的分鐘的BSA蛋白；蛋白；BSA-Zn2+(+)表示與鋅離子結合后熱處理表示與鋅離子結合后熱處理30分鐘的分鐘的BSA蛋白；蛋白；3 NtDHN17蛋白功能初步研究蛋白功能初步研究NtDHN17蛋白無序結構驗證蛋白無序結構驗證-蛋白酶敏感實驗蛋白酶敏感實驗NtDHN17蛋白預測是一個無序蛋白實驗證明其的確是一個無序蛋白1. SDS-PAGE遷移率2. 熱聚集性3. 蛋白酶敏感性3 NtDHN17蛋白功能初步研究蛋白功能初步研究脫水蛋白脫水蛋白-抗凍保護能力抗凍保護能力均是體外實驗獲得的結果均是體外實驗獲得的結果BY-2細胞系細胞系BY-2細胞系細胞系體內