1、2009-11-031炔孕酮的含量測定：精密稱取炔孕酮0.1g，加無水乙醇溶解并定量轉移至100ml量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ml置另一100ml的量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻(成每1ml含10g的溶液)。照分光光度法，在240nm波長處測定吸收度為0.51。按c21h28o2的吸收系數(e1%1cm)為520，計算炔孕酮的含量。(98.08%)cleacm%11a=0.51520%11cme%11%11cmcmealeac？c配g/100ml%100%100%11配配ceacccm2009-11-032第十一章第十一章 抗生素類藥物分析抗生素類藥物分析2009-11

2、-033在低微濃度下即可對某些生物的生命活動在低微濃度下即可對某些生物的生命活動有特異抑制作用的化學物質的總稱。有特異抑制作用的化學物質的總稱。第一節第一節 概述概述是某些微生物例如細菌、放線菌、真菌等的代謝產物或合成的類似物，小劑量時對各種病原微生物有強力的殺滅或抑制作用，而對宿主不會產生嚴重的毒性。臨床上多數抗生素用于治療細菌感染性疾病。某些抗生素還可抗腫瘤，有些具有免疫抑制(環孢素、雷帕霉素、霉酚酸，為器官移植抗排斥和自身免疫性疾病藥物)和刺激植物生長(赤霉素、多氧霉素)的作用。應用于醫療、農業、畜牧和食品工業。 抗生素抗生素2009-11-034經化學純化、精制、化學修飾等過程，最后制

3、成適當制劑。其結構和組成比一般的化學合成藥物更為復雜。一、抗生素藥物的主要來源及特點一、抗生素藥物的主要來源及特點抗生素的來源化學全合成和半合成方法生物合成(微生物發酵)少數絕大多數2009-11-035特點：特點：u化學純度較低。原因：化學純度較低。原因：同系物多同系物多，異構體多異構體多，降解物多降解物多。u活性組分易發生變異：生物合成時，微生物菌株的變化、活性組分易發生變異：生物合成時，微生物菌株的變化、發酵條件改變等均可導致產品質量發生變化，如組成或比發酵條件改變等均可導致產品質量發生變化，如組成或比例發生改變。例發生改變。u穩定性差穩定性差：抗生素分子結構中含有的活潑基團會發生變：抗

4、生素分子結構中含有的活潑基團會發生變化，導致抗生素穩定性變差。化，導致抗生素穩定性變差。 慶大霉素是慶大霉素c的復合物(c1,c2,c1a, c2a)，也有極少量慶大霉素a、b、x等很多抗生素具有旋光性，如果用合成的方法得到，產物中不可避免會有異構體存在；四環素類在水溶液中會發生差向異構化，產生異構體。降解物多是與抗生素的不穩定性有關，會降解產生一些降解產物。如：-內酰胺類抗生素的-內酰胺環是結構活性中心，性質活潑，是分子結構中最不穩定的部分，降解后會失去抗菌活性。2009-11-036分類依據l來源l作用對象作用對象細菌(革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌)、真菌。為臨床選用抗生素帶來一定為臨床選用

5、抗生素帶來一定方便方便l作用機制干擾細菌細胞壁的合成；影響細菌蛋白質的合成；與細胞膜相互作用；抑制核酸的轉錄和復制 l生物合成途徑l化學結構化學結構有利于抗生素工業生產和質量分有利于抗生素工業生產和質量分析研究析研究二、抗生素類藥物的分類：二、抗生素類藥物的分類：常見的革蘭氏陽性菌有：葡萄球菌、鏈球菌、肺炎雙球菌、炭疽桿菌、白喉桿菌、破傷風桿菌等；常見的革蘭氏陰性菌有痢疾桿菌、傷寒桿菌、大腸桿菌、變形桿菌、綠膿桿菌、百日咳桿菌、霍亂弧菌及腦膜炎雙球菌等 2009-11-037l內酰胺類內酰胺類(青霉素類，頭孢菌素類)l氨基糖苷類氨基糖苷類 (鏈霉素，慶大霉素，卡那霉素等)l四環素類四環素類 (

6、四環素，土霉素等) l大環內酯類 (紅霉素，麥迪霉素，螺旋霉素等) l多烯大環類 (兩性霉素b等) l多肽類 (放線菌素等)l苯烴胺類 (氯霉素等)l蒽環類 (阿霉素等)l其他 (不屬于上述類型的抗生素)化學結構化學結構影響細菌蛋白質的合成干擾細菌細胞壁的合成以上分類僅對常用的重要的抗生素進行了歸類，遠遠不能包括所有抗生素2009-11-038僅討論內酰胺類、氨基糖苷類 、四環素類 的理化性質、鑒別反應、雜質檢查、含量測定方法和原理，對生物學方法(如異常毒性、熱原、降壓物質、無菌、生物效價測定法等)不討論2009-11-039三、抗生素藥物的質量分析：三、抗生素藥物的質量分析：抗生素藥物的質量

7、控制方法鑒別檢查含量(效價)測定2009-11-0310官能團的顯色反應：-內酰胺環的羥肟酸鐵反應；鏈霉素的麥芽酚反應，坂口反應。通常有酸根或金屬離子或有機堿，需要鑒別。光譜法：uv，ir。ir時，對于存在多晶現象的抗生素，有時對照品與供試品圖譜或對照圖譜不一致，需用相同溶劑同時對供試品和對照品重結晶，使處于相同晶型后再進行測定；若多晶效應是由于研磨和壓片過程中的晶相轉變所致，則應采用溶液法測定。色譜法：tlc，hplc。用標準品作對照。1 1、鑒別方法、鑒別方法生物學法檢查抗生素滅活前后的抑菌能力，并與已知含量的對照品對照后進行鑒別。 已很少使用理化方法理化方法官能團的顯色反應光譜法色譜法2

8、009-11-0311影響產品穩定性的： 結晶度，酸堿度，水分或干燥失重等。控制有機和無機雜質的： 溶液的澄清度與顏色，有關物質，殘留溶劑，熾灼殘渣，重金屬等。特殊檢查項目普通檢查項目2 2、檢查項目、檢查項目與臨床安全性密切相關的： 異常毒性、熱源或細菌內毒素、降壓物質、無菌其他：組分分析(如硫酸慶大霉素的“慶大霉素c組分的測定”) ，懸浮時間與抽針試驗(如注射用普魯卡因青霉素)，聚合物(如內酰胺類抗生素)，雜質吸收度(如四環素類抗生素)等。2009-11-03123 3、含量、含量( (效價效價) )測定測定(1) 微生物檢定法微生物檢定法在適宜條件下，檢測抗生素對微生物的抑制作用，計算抗

9、生素的活性(效價)。微生物檢定法理化方法方法方法濁度法管碟法(管碟瓊脂擴散法管碟瓊脂擴散法)利用抗生素在液體培養基中對試驗菌生長的抑制作用，通過測定培養后細菌濁度值的大小，比較標準品與供試品對試驗菌生長抑制的程度，以測定供試品效價的一種方法 利用抗生素在瓊脂培養基內的擴散作用，比較標準品與供試品兩者對接種的試驗菌產生抑菌圈的大小，以測定供試品效價的一種方法 抗生素在攤布特定試驗菌的固體培養基內呈球面擴散，形成含一定濃度抗生素的球形區，抑制了試驗菌的繁殖而呈現出透明的抑菌圈2009-11-0313微生物檢定法的優點：微生物檢定法的優點：l靈敏度高、用量小，結果直觀l其測定原理恰好與臨床應用要求一

10、致，更能確定抗生素的醫療價值l適用范圍廣：純度好的、差的制品，已知或新發現的抗生素均適用，同一類型的抗生素不需分離，可一次測定其總效價l是抗生素藥物效價測定的最基本的方法缺點：缺點：操作步驟多，測定時間長，誤差大等抗生素類藥物不斷發展，分析方法不斷進步，理化方法逐漸取代生物學法，但對于分子結構復雜、多組分的抗生素，生物學法仍是首選的效價測定方法2009-11-0314(2)(2) 理化方法理化方法適用于提純的產品以及化學結構已確定的抗生素。根據抗生素的分子結構特點，利用其特有的化學或物理化學性質及反應進行測定。優點：優點：迅速、準確、有較高的專屬性缺點：缺點：對含有具同樣官能團雜質的供試品不適

11、用，或需采取適當方法加以校正。而且當該法是利用某一類型抗生素的共同結構部分的反應時，所測得的結果，往往只能代表藥物的總的含量，并不一定能代表抗生素的生物效價。藥典收載的理化方法主要是hplc法內酰胺類，四環素類，大環內酯類大多采用hplc法測定含量2009-11-0315以效價單位表示，指每毫升或每毫克中含有某種抗生素的有效成分的多少。用單位(u)或微克(g)表示。如：1mg慶大霉素 定為 590單位； 1mg青霉素鈉 定為1670單位3、抗生素活性表示方法：、抗生素活性表示方法：對于維生素類藥物，其效價為每克供試品中所含維生素的國際單位數(iu/g)一種抗生素有一個效價基準，它們是為生產科研

12、的方便而規定的，稱為抗生素的理論效價，實際上樣品的效價往往低于理論效價。2009-11-0316第二節第二節 -內酰胺類抗生素的分析內酰胺類抗生素的分析2009-11-0317-內酰胺類抗生素青霉素族頭孢菌素族非典型的-內酰胺類抗生素碳青霉烯類 單環內酰胺類-內酰胺環結構是抗菌活性的基內酰胺環結構是抗菌活性的基本藥效團本藥效團青霉素是從青霉菌培養液中提煉得到，天然的青霉素有7種，其中青霉素g含量最高，療效最好。青霉素的鈉鹽或鉀鹽均易溶于水，但是其鈉鹽或鉀鹽的水溶液在室溫下不穩定，易被水解失效，因此注射用青霉素為其鈉鹽或鉀鹽的滅菌粉末。 此外有半合成青霉素，如阿莫西林，氨芐西林等，擴大抗菌譜，增

13、強抗菌活性。頭孢菌素是由與青霉菌近緣的頭孢菌屬真菌產生的抗生素之一，對其進行結構改造，得到抗菌譜廣，抗菌活性強的類似物。2009-11-0318nnrooh h15678234hscoohch2r1nsnrooch3ch3hcoohh1234567h頭孢菌素族青霉素族一、化學結構與性質一、化學結構與性質*母核：6-氨基青霉烷酸(6-apa)母核：7-氨基頭孢烷酸(7-aca)側鏈：酰胺基，羧基；環：內酰胺環與氫化噻唑環并合側鏈：酰胺基，羧基；環：內酰胺環與氫化噻嗪環并合手性碳原子：3個手性碳原子：2個*2009-11-0319青霉素族青霉素族nsoch3ch3coohhhnhohnh2nsoc

14、h3ch3coohhhnhohohnh2磺芐西林鈉磺芐西林鈉nsoch3coohhhnhohnhnnooh3ch2coch3哌拉西林哌拉西林(鈉鈉)阿莫西林阿莫西林(鈉鈉)氨芐西林氨芐西林(鈉鈉)青霉素鈉青霉素鈉(鉀鉀)苯唑西林苯唑西林鈉鈉nsoch3cookhhnhoch3o青霉素青霉素v鉀鉀2009-11-0320普魯卡因青霉素普魯卡因青霉素氯唑西林氯唑西林鈉鈉芐星青霉素芐星青霉素2009-11-0321頭孢菌素族頭孢菌素族-ch2ococh3nnnoohch2s頭孢噻肟鈉頭孢噻肟鈉頭孢曲松鈉頭孢曲松鈉ch3hoch3clch3頭孢氨芐頭孢氨芐頭孢羥氨芐頭孢羥氨芐頭孢克洛頭孢克洛頭孢拉定頭

15、孢拉定2009-11-0322頭孢他啶頭孢他啶頭孢地尼頭孢地尼頭孢呋辛鈉頭孢呋辛鈉頭孢呋辛酯頭孢呋辛酯頭孢哌酮頭孢哌酮(鈉鈉)2009-11-0323頭孢硫脒頭孢硫脒頭孢替唑鈉頭孢替唑鈉頭孢噻吩鈉頭孢噻吩鈉青霉素族與青霉素族與頭孢菌素族藥物的性質、鑒別、特殊雜質頭孢菌素族藥物的性質、鑒別、特殊雜質檢查、含量測定方法見教材表檢查、含量測定方法見教材表11-1頭孢唑啉鈉頭孢唑啉鈉2009-11-0324(1)酸性與溶解性：有游離羧基，酸性強，能與無機堿或有機堿形成鹽。堿金屬鹽溶于水，其水溶液遇酸又析出游離基的白色沉淀。臨床常用其堿金屬鹽（水溶性好）。有機堿鹽難溶于水，易溶于甲醇等有機溶劑 (2)旋

16、光性：存在手性碳，具有旋光性。可用于定性和定量分析。(3)uv吸收特性：頭孢菌素族母核有共軛結構，側鏈有共軛系統；青霉素族母核雖無共軛結構，但側鏈有苯環等取代基。(4)-內酰胺環的不穩定性： -內酰胺環是結構活性中心，性質活潑，最不穩定。穩定性與含水量和純度關系很大。干燥條件下性質較穩定(室溫條件下密封保存可貯存3年以上)，水溶液很不穩定，隨ph和溫度不同有很大變化。青霉素在ph66.8時較穩定。在酸、堿、青霉素酶、羥胺、重金屬離子或氧化劑作用下，易水解，重排，使-內酰胺環破壞，失去抗菌活性(降解反應見課本p268-269)。性質性質nnrooh h15678234hscoohch2r1*ns

17、nrooch3ch3hcoohh1234567h* *2009-11-0325羥肟酸鐵反應類似肽鍵的反應(茚三酮反應茚三酮反應)其他呈色反應二、鑒別試驗二、鑒別試驗呈色反應各種鹽的反應光譜法色譜法藥典中的鑒別方法主要為：光譜法(ir)、色譜法(hplc, tlc)2009-11-03261、呈色反應、呈色反應(1) 羥肟酸鐵反應羥肟酸鐵反應青霉素及頭孢菌素在堿性中與羥胺作用，-內酰胺環破裂生成羥肟酸鈉，將其調成酸性后，可與高鐵離子呈色。如chp(2005)中頭孢哌酮、磺芐西林鈉、哌拉西林(鈉)用此法鑒別nsorcohncoohch2r1hnsorcohncoonach2r1hohnnh2oh.

18、hclnaoh, c2h5ohhnsrcohncoohch2r1fenh4(so4)2 h+o3/feonh2009-11-0327頭孢氨芐，頭孢羥氨芐，頭孢拉定，頭孢克洛等有-氨基酸結構，能顯茚三酮反應，顯紫色或蘭紫色。用于tlc鑒別或檢查時作顯色劑。 (2) 茚三酮反應茚三酮反應(3) 其它呈色反應其它呈色反應與重氮苯磺酸的偶合反應與重氮苯磺酸的偶合反應鍘鏈有酚羥基結構時，能與重氮苯磺酸偶合顯色。如阿莫西林，頭孢羥氨芐硫酸硫酸- -甲醛顯色甲醛顯色(bp)(bp)ch3hoch3clch3頭孢氨芐頭孢氨芐頭孢羥氨芐頭孢羥氨芐頭孢克洛頭孢克洛頭孢拉啶頭孢拉啶2009-11-03282、各種鹽

19、的反應、各種鹽的反應鉀、鈉離子的焰色反應：臨床上常用堿金屬鹽，可用焰色反應來鑒別堿金屬。3、光譜法、光譜法ir各國藥典對收載的-內酰胺類抗生素幾乎均采用了ir法進行鑒別uv測定供試液的最大吸收波長或最大吸收波長處的吸收度進行鑒別例：頭孢唑林鈉例：頭孢唑林鈉(chp2005)的鑒別方法中用的鑒別方法中用uv鑒別：鑒別： 取本品適量，加水制成每取本品適量，加水制成每1ml 中約含中約含16g 的溶液，照紫的溶液，照紫外外-可見分光光度法（附錄可見分光光度法（附錄 a ）測定，在）測定，在272nm 的波長處有的波長處有最大吸收最大吸收2009-11-0329例： (chp2005)的鑒別方法中頭孢

20、拉定的鑒別： 取本品與頭孢拉定對照品適量，分別加水溶解并稀釋制成每1ml中約含6mg 的溶液，作為供試品溶液與對照品溶液。照薄層色譜法(附錄 b)試驗，吸取上述兩種溶液各5l，分別點于同一硅膠g薄層板經105活化后，置5%(ml/ml)正十四烷的正己烷溶液中，展開至薄層板的頂部，晾干上，以0.1mol/l枸櫞酸溶液-0.2mol/l磷酸氫二鈉溶液-丙酮(60：40：1.5)為展開劑，展開，晾干，于105加熱5分鐘，取出，立即噴以用展開劑制成的0.1%茚三酮溶液，在105加熱15分鐘后，檢視。供試品溶液所顯主斑點的顏色與位置 應與對照品溶液所顯主斑的顏色與位置相同。4、色譜法、色譜法高效液相色譜

21、法（高效液相色譜法（hplc）一般規定在含量測定項下的色譜圖中，供試品與對照品主峰的保留時間一致。中國藥典收載的頭孢菌素族藥物和大多數青霉素族藥物采用hplc法進行鑒別。薄層色譜法（薄層色譜法（tlc） 比較供試品與對照品主斑點的比移值與顏色。比較供試品與對照品主峰的保留時間。2009-11-0330三、特殊雜質的檢查三、特殊雜質的檢查高分子聚合物高分子聚合物有關物質有關物質異構體異構體抽針與懸浮時間(注射用普魯卡因青霉素)一般采用hplc法控制其量有效性試驗也有測定雜質的吸光度控制雜質量也有測定雜質的吸光度控制雜質量取本品1 瓶，按每40萬單位加水1ml 使成混懸液，搖勻，靜置2 分鐘，不得

22、有顆粒下沉或明顯的分層。用裝有41/2號針頭的注射器抽取，應能順利通過，不得阻塞 2009-11-0331色譜柱色譜柱 葡聚糖凝膠柱流動相流動相a：含3.5%硫酸銨的0.01mol/l磷酸鹽緩沖液（取磷酸氫二鈉2.19g和磷酸二氫鈉0.54g，加水1000ml使溶解，調節ph值至7.0）流動相流動相b：0.01%十二烷基硫酸鈉溶液流速：流速：每分鐘1ml；檢測波長檢測波長：254nm。對照品溶液的制備對照品溶液的制備 取頭孢他啶對照品適量，精密稱定，加水制成含頭孢他啶100g/1ml的溶液，搖勻。測定法測定法 取本品適量，精密稱定，加水制成含頭孢他啶20mg/1ml的溶液，立即進樣200l，以

23、流動相a為流動相進行測定，記錄色譜圖；另取對照品溶液200l注入液相色譜儀，以流動相b為流動相，記錄色譜圖，按外標法計算，本品含頭孢他啶聚合物以頭孢他啶計不得過0.3%。1、聚合物、聚合物hplc法法例：chp2005中頭孢他啶聚合物的檢查： - -內酰胺類抗生素檢查聚合物的藥物內酰胺類抗生素檢查聚合物的藥物見教材表見教材表11-12009-11-03322、有關物質和異構體、有關物質和異構體-內酰胺類抗生素中的有關物質和異構體常采用色譜法檢查。例1： 頭孢呋辛酯中有關物質和異構體的檢查用hplc法檢查例2：頭孢氨芐中有關物質檢查 - -內酰胺類抗生素檢查有關物質和異構體的藥物內酰胺類抗生素檢

24、查有關物質和異構體的藥物見見教材表教材表11-1(見教材)2009-11-0333取本品，加水制成每1ml中含1.80mg的溶液，照分光光度法，在280nm的波長處測定吸收度，不得大于0.10；在264nm的波長處有最大吸收，吸光度應為0.800.88。用來控制青霉素用來控制青霉素鈉（鉀）的含量鈉（鉀）的含量用來控制雜質的量3、吸光度、吸光度例：chp2005中青霉素鈉（鉀）的吸光度檢查：4、有機溶劑、有機溶劑一般用gc法檢查，個別用hplc法檢查2009-11-0334少數樣品用微生物檢定法，大多采用理化測定法。四、含量測定四、含量測定中國藥典中收載的本類藥物，除磺芐西林鈉采用微生物檢定法外

25、，其他均用hplc法此外，中國藥典曾用過降解后剩余碘量法、電位配位滴定法、硫醇汞鹽測定本類藥物的含量2009-11-0335hplc法是-內酰胺類抗生素含量測定的最主要方法。近年來發展快速，能有效分離供試品中可能存在的降解產物、未除盡的原料及中間體等雜質，并能準確定量，對本類藥物的原料藥、制劑、生物樣本均能測定。本類藥物的hplc法通常采用反相hplc，以外標法計算含量2009-11-0336色譜條件與系統適用性試驗 色譜柱：色譜柱：ods柱流動相：流動相：緩沖液取磷酸二氫鉀14g和40%氫氧化四丁基胺溶液6.5g 溶解于約 70ml水中，用1mol/l氫氧化鉀溶液調節ph至7.0，用水稀釋至

26、1000ml，混勻-水-乙腈（52：23：25）并用1mol/l氫氧化鉀溶液或10%稀磷酸溶液調節ph至7.50.05檢測波長：檢測波長：235nm。取青霉素v鉀對照品適量，用流動相溶解并稀釋成每1ml中含青霉素v鉀2.4mg的溶液，將此溶液與對照品溶液以1：3體積比混合，進樣測定，青霉素和青霉素v的分離度應不小于2.0。 例：注射用普魯卡因青霉素的含量測定例：注射用普魯卡因青霉素的含量測定測定法測定法 供試品溶液：取裝量差異項下的內容物，精密稱取適量，配成1.4mg/ml(流動相溶解并稀釋)對照品溶液(1)：青霉素對照品溶液：含青霉素0.8mg/ml，流動相溶解并稀釋。 對照品溶液(2)：

27、鹽酸普魯卡因對照品溶液：含普魯卡因0.54mg/ml，流動相溶解并稀釋。各精密量取10l注入液相色譜儀，記錄色譜圖。計算：計算：按外標法以峰面積計算供試品中c13h20n2o2(普魯卡因)和c16h18n2o4s(青霉素)的含量：每1mg的c16h18n2o4s相當于1780青霉素單位。規定：按無水物計算，含青霉素應為59.0%66.3%，含普魯卡因應為29.1%35.6%，每1mg 含青霉素應為10501180單位，按平均裝量計算，含青霉素應為標示量(40萬單位 或或80萬單位 )的95.0105.0。 對于青霉素：cx/c對=ax/a對 cx=(ax/a對)c對青%=(cx/c配) 100

28、%對于普魯卡因：cx/c對=ax/a對 cx=(ax/a對)c對普%=(cx/c配) 100%按平均裝量算，每瓶含純品青霉素：w平均青%每1mg的c16h18n2o4s (青霉素)相當于1780青霉素單位，故每瓶的純品青霉素為w平均青% 1780單位標%=(w平均青% 1780)/標示量 100%2009-11-03372、碘量法、碘量法利用青霉素或頭孢菌素分子不消耗碘，而其水解產物消耗碘的性質，采用剩余碘量法測定，以標準對照法計算含量。以青霉素為例：以青霉素為例：反應分兩步：第一步：青霉素在堿性條件下水解，該步反應是按化學計量進行的第二步：水解生成的青霉噻唑酸在酸性條件下與定量過量的碘作用，

29、剩余的碘用硫代硫酸鈉滴定同時做空白試驗以消除雜質的影響，并用青霉素標準品進行平行對照測定以消除溫度，ph，時間等因素的影響nsch3ch3coohrco hnonaohnsch3ch3coonarco hnhnaooc青霉素青霉噻唑二鈉nsch3ch3co o narcohnhnao o c青 霉 噻 唑 二 鈉+ 4 i2+ 5h2o + 2hclch(co o h)2nhco r+ h3ch3cso3hcchnh2co o h + 2nacl + 8hi(1:8)(1:8)2009-11-0338式中：s0、r0分別為滴定供試品空白液和對照品空白液消耗的硫代硫酸鈉溶液的體積（ml）；s、r

30、分別為滴定供試品和對照品消耗的硫代硫酸鈉溶液的體積（ml）；c為對照品濃度（g/ml）；u、u0分別為對照品的效價（單位/毫克）和樣品的標示量； w、d分別為供試品取樣量（g）和稀釋倍數。s0sr0rcuwu0平均裝量 100%d2009-11-0339青霉素分子不與汞鹽反應，而其堿性水解產物如青霉噻唑酸在一定條件下能與二價過渡金屬離子如cu2+、hg2+形成穩定的絡合物。將青霉素堿性水解后，用硝酸汞標準液滴定,電位法指示終點（滴定中出現兩個突躍，以第2個突躍為終點，反應摩爾比為1：1 ）。由于樣品中存在的降解雜質也會消耗硝酸汞，為消除干擾，采用兩次滴定法: 水解后滴定總量%； 直接滴定降解雜

31、質的量%(即空白試驗) 則：樣品含量% =總量% 降解雜質的量%3、電位絡合滴定法、電位絡合滴定法2009-11-0340第三節第三節 氨基糖苷類抗生素氨基糖苷類抗生素2009-11-0341它們的抗菌譜、抗菌機理和化學性質都有共同之處。天然的氨基糖苷類抗生素鏈霉菌屬：鏈霉素、卡那霉素、新霉素、 妥布霉素、大觀霉素小單胞菌屬：慶大霉素、西索米星、 小諾米星、福提米星半合成氨基糖苷類抗生素 硫酸依替米星、硫酸奈替米星、阿米卡星等2009-11-0342oohchooch2ohohohnh c nh2nhhooohnhch3onhch3 ohnhch2n123456 鏈霉胍 鏈霉糖 n-甲基-l-

32、葡萄糖胺streptidine streptose n-methyl-l-glucosamine 鏈霉雙糖胺stroptobiosamine 1232“3”5”6“41”4”*一、化學結構與性質一、化學結構與性質鏈霉素第一個用于臨床的氨基糖苷類抗生第一個用于臨床的氨基糖苷類抗生素，亦是第一個抗結核藥素，亦是第一個抗結核藥結合結合較弱較弱結合結合較牢較牢2009-11-0343oohnhch3ohch3oocnh2r1hnhonh2nh2or2r3*1234561234561”2“ 3”4“5”* 絳紅糖胺 2-脫氧鏈霉胺 加洛糖胺 purpurosamine deoxystreptosamin

33、e garosamine慶大霉素r1r2r3分子式c1ch3ch3hc21h43n5o7c2ch3hhc20h41n5o7c2ahhch3c20h41n5o7c1ahhhc19h29n5o7慶大霉素臨床最常用的氨基糖苷類抗生素2009-11-0344溶解度與堿性：溶解度與堿性：分子中具有多個羥基和堿性基團，同屬堿性、水溶性抗生素，能與無機酸或有機酸成鹽。臨床上常用的為硫酸鹽，易溶于水，不溶于有機溶劑；旋光性：旋光性：分子結構中含有多個氨基糖，具有旋光性；苷的水解與穩定性：苷的水解與穩定性：鏈霉素的硫酸鹽水溶液在ph57.5最為穩定，過酸或過堿均易水解。在堿性條件下水解，鏈霉素水解為鏈霉胍和鏈霉

34、雙糖胺，并使鏈霉糖部分發生分子重排，生成麥芽酚(為鏈霉素所特有的性質)；硫酸慶大霉素，硫酸奈替米星對光、熱、空氣均較穩定，水溶液也較穩定。uv吸收：吸收：鏈霉素在230nm處有紫外吸收，其它本類藥物基本無uv吸收。性質：性質：2009-11-0345茚三酮反應茚三酮反應本類抗生素具羥基胺類和-氨基酸的性質，可與茚三酮縮合成藍紫色化合物。二、鑒別試驗二、鑒別試驗坂口（坂口（sakaguchi）反應）反應為鏈霉素水解產物鏈霉胍的特有反應。鏈霉素水溶液加氫氧化鈉試液，水解生成的鏈霉胍，鏈霉胍和8-羥基喹啉分別與次溴酸鈉反應，二者反應產物再相互作用生成橙紅色化合物。2009-11-0346麥芽酚（麥芽

35、酚（maltolmaltol）反應反應為鏈霉素鏈霉素的特征反應。在堿性堿性溶液中，鏈霉素水解為鏈霉胍和鏈霉雙糖胺，并使鏈霉糖部分經分子重排、擴環、消除反應，生成麥芽酚麥芽酚，與鐵離子鐵離子在微酸性溶液中形成紫紅色配位化合物。oohchooch2ohohohnh c nh2nhhooohnhch3onhch3 ohnhch2n h2onaohoch3oohh+fe3+och3oofe/3麥芽酚 紫紅色 2009-11-0347molisch試驗n-甲基葡萄糖胺反應硫酸鹽反應光譜法：uv、ir色譜法：tlc、hplc等此外，此外，2009-11-0348鏈霉素b是指甘露糖鏈霉素，由發酵產生, 其生

36、物活性僅為鏈霉素的20%25%，能被甘露糖鏈霉素b苷酶水解成甘露糖和鏈霉素。 chp2005增加了該項檢查，采用薄層色譜法檢查。供試品溶液： 10mg / 1ml甘露糖對照溶液： 72g / 1ml(相當于含鏈霉素b 0.3mg / ml)薄層板：硅膠g展開劑：甲苯-醋酸-甲醇（50：25：25）點樣量：10l顯色劑：新鮮配制的0.2%1，3-苦二酚乙醇溶液與20%硫酸溶液等體積混合液判定法：供試品溶液所顯鏈霉素b斑點的顏色與對照溶液的主斑點比較，不得更深（3.0%）。 三、特殊雜質檢查及組分分析三、特殊雜質檢查及組分分析1、鏈霉素中鏈霉素、鏈霉素中鏈霉素b的檢查的檢查2009-11-0349

37、奈替米星是西梭米星化學衍生得到的半合成抗生素，成品中有可能殘留西梭米星，需對其進行控制。供試品溶液：供試品溶液：150mg / ml；標準品溶液（標準品溶液（1 1） 1.5mg / ml；奈替米星 （2 2） 3mg / ml；奈替米星 （3 3） 1.44mg/ml，西梭米星點樣：點樣：各2l，展開劑：展開劑：二氯甲烷-甲醇-濃氨溶液（4：4：2）顯色：顯色：0.2%茚三酮溶液，110加熱20min。規定：規定：供試溶液若顯雜質斑點，其顏色與標準品溶液(3)所顯主斑點相比較，不得更深(1%)，其他雜質與標準品溶液(1)所顯主斑點相比較，均不得更深，如有一點超過，應不深于標準品溶液(2)的主

38、斑點(2%)。 2、硫酸奈替米星中有關物質的、硫酸奈替米星中有關物質的tlc檢查：檢查：2009-11-0350慶大霉素c1、c2、c1a對微生物的活性無明顯差異，但其毒副作用和耐藥性有差異，導致各組分的多少影響產品的效價和臨床療效。因此各國藥典均規定控制各組分的相對百分含量。例：慶大霉素c組分測定(chp2005) 色譜柱：ods柱（ph值范圍0.88.0）；流動相：0.02mol/l三氟醋酸-甲醇（92：8）；流速：每分鐘0.6ml；檢測器：蒸發光檢測器（參考條件：漂移管溫度110，載氣流量為每分鐘2.8l）。3、慶大霉素、慶大霉素c組分測定組分測定2009-11-0351c組分的出峰順序

39、依次為慶大霉素c1a、c2、小諾霉素、c2a、c1 測定法： 取小諾霉素標準品適量，精密稱定，分別用流動相制成每1ml 中約含小諾霉素0.2mg、0.5mg和1.0mg的溶液作為標準品溶液(1)、(2)、(3)。取上述三種溶液各20l，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計算標準品溶液濃度的對數值與相應的主峰面積對數值的回歸方程，相關系數(r)應不小于0.99；另取本品適量，精密稱定，用流動相制成每1ml中約含慶大霉素2.5mg的供試品溶液，同法測定，用回歸方程計算供試品中對應各組分的量（xcx），并根據所得的各組分的量（xcx）按下面公式計算出各組分的含量。 xcx cx()100 xc1a+x

40、c2+xc2a+xc1 式中 cx為慶大霉素各組分的含量； c1應為2550，c1a應為1540，c2c2a應為2050。 2009-11-0352氨基糖苷類抗生素臨床上主要用硫酸鹽，各國藥典規定edta絡合滴定法測定硫酸鹽含量，作為組分分析。例：硫酸奈替米星中硫酸鹽的測定 取本品約0.12g，精密稱定，加水100ml使溶解，用濃氨溶液調節ph值至11后，精密加氯化鋇滴定液(0.1mol/l) 10ml、酞紫指示液5滴，用乙二胺四醋酸二鈉滴定液(0.05mol/l) 滴定，注意保持滴定過程中的ph值為11，滴定至紫色開始消褪，加入乙醇50ml，繼續滴定，至藍紫色消失，并將滴定的結果用空白試驗校

41、正。每1ml氯化鋇滴定液(0.1mol/l)相當于9.606mg硫酸鹽(so4)，本品含硫酸鹽的量按無水物計算應為31.535.0。 4、硫酸鹽的含量、硫酸鹽的含量2009-11-0353氨基糖苷類抗生素的效價測定目前各國藥典主要采用微生物檢定法和hplc法。理化分析方法文獻報道逐漸增多。 氨基糖苷類抗生素的分析方法微生物法自動免疫分析法用于治療藥物監測hplc法用于藥動學、代謝物、穩定 性等研究。需進行柱前或柱后衍生化。四、含量測定四、含量測定2009-11-0354第四節第四節 四環素類抗生素四環素類抗生素四環素類抗生素是放線菌產生的一類廣譜抗生素，包括金霉素、土霉素、四環素及半合成四環素

42、類抗生素。 這類抗生素分子有四個環構成，故統稱為四環素類抗生素。 2009-11-0355天然的四環素類抗生素中金霉素因毒性大，只作外用。土霉素和四環素現在在臨床上也已少用，主要用作獸藥和飼料添加劑。 結構改造后得到半合成四環素類抗生素。例如多西環素、米諾環素等。米諾環素在四環素類抗生素中抗菌作用最強，具有高效、長效作用。 2009-11-0356一、化學結構與性質一、化學結構與性質化學結構： 四環素類抗生素，可以看作四駢苯或萘駢萘的衍生物，基本結構如下：n(ch3)2rrr r hohconh2ohohodcba123456789101112oho該類藥物有共同的a、b、c、d四個環的母核，

43、僅在5、6、7位上有不同的取代基。 2009-11-03571、酸堿性與溶解度2、旋光性3、紫外吸收和熒光性質4、與金屬離子形成配位化合物5、穩定性n(ch3)2rrr r hohconh2ohohodcba123456789101112oho c4位上二甲氨基顯弱堿性，c10位上酚羥基和兩個含有酮基和烯醇基的共軛雙鍵系統顯弱酸性，故四環素類是兩性化合物。遇酸及堿，均能成鹽。臨床上多應用鹽酸鹽。 鹽酸鹽易溶于水及酸性或堿性溶液中，不溶于有機溶劑。游離堿在水中溶解度很小，其溶解度與溶液 ph值有關。 四環素類抗生素分子結構中有不對稱碳原子，故具有旋光性。藥典中規定要測定其比旋度。 分子中有共軛雙

44、鍵系統，在紫外光區有吸收。本類抗生素在紫外光下產生熒光，它們的降解產物也有熒光，如土霉素經堿降解后呈綠色熒光，加熱，轉為藍色熒光。 結構中的酚羥基與烯醇基可與金屬離子形成不溶性鹽類(如鈣鹽、鎂鹽)或配位化合物(如鐵的紅色，鋁的黃色配合物)。可用于鑒別。 四環素類抗生素對各種氧化劑（包括空氣中氧在內）、酸、堿都是不穩定的。干燥時避光保存較穩定，水溶液易發生差向異構化、降解等反應。堿性水溶液特別容易氧化，顏色很快變深，形成色素。性質性質 2009-11-0358四環素類抗生素在弱酸性（ph2.06.0）溶液中會發生差向異構化。這個反應是由于a環上手性碳原子環上手性碳原子c4構型的改變，發生差向異構

45、化構型的改變，發生差向異構化，形成差向四環素類，而失去抗菌能力。ohconh2hn(ch3)2hohoaohconh2hhohoaohconh2h+n(ch3)2ohoahh+conh2hhohoaoh(ch3)2n+h(ch3)2n+h四環素（tc） 差向四環素（etc） 四環素和金霉素易差向異構化，土霉素、多西霉素、美他環素c5位上有羥基，可與c4位上的二甲氨基形成氫鍵，比較穩定，不易發生差向異構化。磷酸根、枸櫞酸根、醋酸根加速異構化反應。（1）差向異構化性質）差向異構化性質2009-11-0359oohoohoohohoch3ch3h+oh2h3chohh3ccbcbcbcbhh+-h2o- h+四 環素（tc） 脫 水四 環素（atc） （2）降解性質）降解性質l酸性降解：在酸性條件下（ph2），特別是在加熱情況下，四環素類抗生素c6上的醇羥基和c5a上的氫發生反式消去反應生成脫水四環素（atc）。其共軛雙鍵數目增加，使四環素色澤加深四環素和多霉素易發生該降解2009-11-0360ohh3cohoohrohconh2ch3n(ch3)2roooohcbaoh-ohabd四環類抗生素 異四環類抗生素l堿性降解：在堿性溶液中，由于氫氧離子的作用，c6上的羥基形成氧負離子，向c11發