1、第四章第四章 醫藥生物制品醫藥生物制品第一節第一節醫藥生物制品的免疫學基礎醫藥生物制品的免疫學基礎第二節第二節醫藥生物制品的基本概念醫藥生物制品的基本概念第三節第三節醫藥生物制品的一般制造方法醫藥生物制品的一般制造方法第四節第四節重要的醫藥生物制品重要的醫藥生物制品第一節第一節醫藥生物制品的免疫學基礎醫藥生物制品的免疫學基礎、免疫學檢測、免疫學檢測體液免疫測定法體液免疫測定法細胞免疫測定法細胞免疫測定法藥物（免疫分子）的免疫測定法藥物（免疫分子）的免疫測定法一、體液免疫測定法一、體液免疫測定法1、體液免疫測定法的原理、體液免疫測定法的原理又稱血清學檢查法，建立在抗原抗體反應特異性的基礎上。又稱

2、血清學檢查法，建立在抗原抗體反應特異性的基礎上。抗原與其相應的抗體相遇，將發生特異性結合，在體外的抗原與其相應的抗體相遇，將發生特異性結合，在體外的實驗條件下，會出現凝集、沉淀、補體結合、溶解、中和實驗條件下，會出現凝集、沉淀、補體結合、溶解、中和等反應。等反應。各種微生物的鑒定、生物體內各種大分子物質、細胞表各種微生物的鑒定、生物體內各種大分子物質、細胞表面分子、各種半抗原物質的測定。面分子、各種半抗原物質的測定。2、體液免疫測定法的應用、體液免疫測定法的應用用已知的抗原去測定未知的抗體用已知的抗原去測定未知的抗體用已知的抗體去鑒定或測定未知的抗原用已知的抗體去鑒定或測定未知的抗原有些疾病在

3、感染早期，人體內已經有病毒存在，但抗體有些疾病在感染早期，人體內已經有病毒存在，但抗體還未產生，或產生量極少檢測不出來，這個時期就稱為還未產生，或產生量極少檢測不出來，這個時期就稱為窗口期。窗口期。3、抗原抗體反應的特征、抗原抗體反應的特征高度特異性（二抗的含義？）高度特異性（二抗的含義？）可逆性（分子表面的結合）可逆性（分子表面的結合）可見性（合適的分子比例）可見性（合適的分子比例）反應分為兩個階段（特異性結合反應分為兩個階段（特異性結合-快、出現可見反應快、出現可見反應-慢）慢）4、影響抗原抗體反應的因素、影響抗原抗體反應的因素電解質（生理鹽水作為緩沖液）電解質（生理鹽水作為緩沖液）酸堿度

4、（酸堿度（ph68）溫度（溫度（37）5、常見的抗原抗體反應、常見的抗原抗體反應凝集反應凝集反應細胞性或顆粒性抗原與相應抗體在電解質存在下，將出現細胞性或顆粒性抗原與相應抗體在電解質存在下，將出現細胞或顆粒的凝集現象稱為凝集反應。細胞或顆粒的凝集現象稱為凝集反應。抗原稱為凝集原，抗體稱為凝集素。抗原稱為凝集原，抗體稱為凝集素。例如：例如：abo血型的測定！血型的測定！可溶性抗原與相應抗體在有電解質存在下，可出現肉眼可可溶性抗原與相應抗體在有電解質存在下，可出現肉眼可見的沉淀現象稱為沉淀反應。見的沉淀現象稱為沉淀反應。反應中的抗原稱為沉淀原，抗體稱為沉淀素。反應中的抗原稱為沉淀原，抗體稱為沉淀素

5、。沉淀反應沉淀反應例如：免疫擴散或免疫電泳的抗體組成、含量！例如：免疫擴散或免疫電泳的抗體組成、含量！補體參與的反應補體參與的反應溶血和溶菌反應溶血和溶菌反應補體結合反應補體結合反應待檢系統：已知抗體與待檢抗原待檢系統：已知抗體與待檢抗原/已知抗原與待檢抗體已知抗原與待檢抗體指示系統：綿羊紅細胞和溶血素指示系統：綿羊紅細胞和溶血素補體：新鮮豚鼠血清補體：新鮮豚鼠血清結果判斷：不溶血結果判斷：不溶血陽性；溶血陽性；溶血陰性陰性抗體使相應的毒素的毒性消失的試驗稱為中和試驗。抗體使相應的毒素的毒性消失的試驗稱為中和試驗。中和試驗常用于毒素的鑒定。中和試驗常用于毒素的鑒定。中和試驗中和試驗免疫標記測定

6、技術免疫標記測定技術是指用酶、熒光素或放射性同位素等標記抗體或抗原后進是指用酶、熒光素或放射性同位素等標記抗體或抗原后進行的抗原抗體反應。行的抗原抗體反應。用于定性、定量或定位檢測用于定性、定量或定位檢測標記物的敏感性標記物的敏感性+抗原抗體反應的特異性抗原抗體反應的特異性酶聯免疫吸附分析法酶聯免疫吸附分析法免疫熒光技術免疫熒光技術放射免疫測定法放射免疫測定法酶聯免疫吸附分析法酶聯免疫吸附分析法基本原理基本原理關鍵技術關鍵技術elisa的常用方法的常用方法elisa的應用的應用間接法間接法雙抗體夾心法雙抗體夾心法競爭法競爭法基本原理基本原理通過酶標記技術，將抗原抗體反應的特異性和酶催化作用的高

7、效性相結合，利用酶反應底物的顏色變化來判斷結果。關鍵技術：關鍵技術：固相包被技術固相包被技術酶交聯技術酶交聯技術 常用聚苯乙烯微量反應板：固相包被技術固相包被技術樣品量少使用方便重復性好優點：酶交聯技術酶交聯技術常用的酶：辣根過氧化物酶（常用的酶：辣根過氧化物酶（hrp）堿性磷酸酯酶（堿性磷酸酯酶（ap）交聯方法：戊二酸法、過碘酸法交聯方法：戊二酸法、過碘酸法酶酶反應底物反應底物顯色變化顯色變化測定波長測定波長/nmhrpap鄰苯二胺鄰苯二胺鄰聯甲苯胺鄰聯甲苯胺對硝基苯磷酸酯對硝基苯磷酸酯黃黃色色405桔紅色桔紅色492藍藍色色425elisa的常用方法的常用方法間接法間接法雙抗體夾心法雙抗體

8、夾心法競爭法競爭法（測定抗體）（測定抗體）（測定抗原）（測定抗原）（定量測定）（定量測定）間接法（用于測定抗體）間接法（用于測定抗體）包被加酶標抗體洗板加顯色底物判斷結果加樣洗板雙抗體夾心法（測定抗原）雙抗體夾心法（測定抗原）sandwichelisaaddsubstrateandmeasurecolorantibodycoatedwelladdantigenaddenzymeconjugatedsecondaryantibody競爭法（定量測定）競爭法（定量測定）y y y待待測測管管eeey y ye 樣品 y y ye參參考考管管 y y yeeey y yeeey y yeee 酶標抗

9、原不加樣品底物各種微生物的鑒定、生物體內大分子物質、細胞表面分各種微生物的鑒定、生物體內大分子物質、細胞表面分子的測定。子的測定。elisa的應用的應用用已知的抗原去測定未知抗體用已知的抗原去測定未知抗體用已知的抗體鑒定未知抗原用已知的抗體鑒定未知抗原藥物的免疫測定藥物的免疫測定例：胰島素、干擾素等例：胰島素、干擾素等1、t細胞總數的測定細胞總數的測定2、t細胞亞群的測定細胞亞群的測定3、淋巴細胞轉化試驗、淋巴細胞轉化試驗4、nk細胞活性測定細胞活性測定5、il-2的測定的測定二、細胞免疫測定法二、細胞免疫測定法三、藥物的免疫測定法三、藥物的免疫測定法免疫學預防免疫學預防一、獲得免疫力的方式一

10、、獲得免疫力的方式自然獲得性免疫自然獲得性免疫人工獲得性免疫人工獲得性免疫人工自動免疫：人工自動免疫：人工被動免疫：人工被動免疫：給機體接種抗原，使機體主動地建給機體接種抗原，使機體主動地建立起針對該抗原的免疫應答。立起針對該抗原的免疫應答。給機體注入特異性抗體或細胞因子給機體注入特異性抗體或細胞因子等，使機體獲得特異性免疫。等，使機體獲得特異性免疫。人工自動免疫與人工被動免疫的比較人工自動免疫與人工被動免疫的比較人工自動免疫人工自動免疫人工被動免疫人工被動免疫免疫材料免疫材料抗原抗原(菌苗、疫苗、類毒素菌苗、疫苗、類毒素)抗體或細胞因子抗體或細胞因子免疫力出現時間免疫力出現時間晚（晚（14周

11、）周）早（立即）早（立即）免疫力維持時間免疫力維持時間長（數月長（數月數年）數年）較短（較短（2周周數月）數月）用途用途主動用于預防主動用于預防主要用于治療或緊急預防主要用于治療或緊急預防二、人工自動免疫用生物制品二、人工自動免疫用生物制品由細菌菌體成分（或螺旋體）制成的生物制品稱為菌苗；由細菌菌體成分（或螺旋體）制成的生物制品稱為菌苗；由病毒（或立克次體）制成的生物制品則稱為疫苗。由病毒（或立克次體）制成的生物制品則稱為疫苗。1、菌苗、疫苗、菌苗、疫苗用無毒或充分減毒的病原微生物制成活菌液的生物制品用無毒或充分減毒的病原微生物制成活菌液的生物制品稱為活菌（疫）苗。稱為活菌（疫）苗。活菌（疫）

12、苗活菌（疫）苗死菌（疫）苗死菌（疫）苗將病原微生物經人工培養增殖后收集菌體，用化學或物將病原微生物經人工培養增殖后收集菌體，用化學或物理方法將其殺死或滅活后制成。理方法將其殺死或滅活后制成。活菌（疫）苗與死菌（疫）苗的比較活菌（疫）苗與死菌（疫）苗的比較活菌（疫）苗活菌（疫）苗死菌（疫）苗死菌（疫）苗體內存在狀態體內存在狀態短期存活并有一定繁殖短期存活并有一定繁殖無存活、繁殖現象無存活、繁殖現象免疫效果免疫效果好好較差較差接種次數接種次數一次一次多次多次接種劑量接種劑量少少大大生產、保存條件生產、保存條件要求條件嚴格要求條件嚴格要求條件一般要求條件一般產品舉例產品舉例卡介苗、脊髓灰質炎卡介苗、

13、脊髓灰質炎傷寒、霍亂、百日咳、傷寒、霍亂、百日咳、糖丸、麻疹疫苗等糖丸、麻疹疫苗等乙腦、狂犬病疫苗等乙腦、狂犬病疫苗等細菌產生的外毒素經細菌產生的外毒素經0.30.4甲醛處理后，使其失去甲醛處理后，使其失去毒性，保留其免疫原性而制成的生物制品稱為類毒素。毒性，保留其免疫原性而制成的生物制品稱為類毒素。2、類毒素、類毒素例：破傷風類毒素、白喉類毒素等例：破傷風類毒素、白喉類毒素等白、百、破三聯疫苗白、百、破三聯疫苗在制備類毒素過程中常加入氫氧化鋁，制成精制沉淀在制備類毒素過程中常加入氫氧化鋁，制成精制沉淀類毒素，這種制劑在體內吸收較慢，能較長時間刺激，類毒素，這種制劑在體內吸收較慢，能較長時間刺

14、激，提高免疫效果。提高免疫效果。亞單位疫苗亞單位疫苗3、新疫苗的研制、新疫苗的研制合成多肽疫苗合成多肽疫苗除去了病原體與產生保護性抗體無關的成分，提取其除去了病原體與產生保護性抗體無關的成分，提取其有效的抗原來制成的。有效的抗原來制成的。在病原微生物的有效蛋白質抗原被闡明后，人工合成一在病原微生物的有效蛋白質抗原被闡明后，人工合成一段肽鏈，配以適當的段肽鏈，配以適當的載體載體及佐劑制成的疫苗。及佐劑制成的疫苗。基因工程疫苗基因工程疫苗由基因工程技術獲得的抗原，再經過精制純化即可制由基因工程技術獲得的抗原，再經過精制純化即可制成相應的基因工程疫苗。成相應的基因工程疫苗。核酸疫苗（基因疫苗）核酸疫

15、苗（基因疫苗）本質上為帶有編碼病原體抗原目的基因的重組質粒本質上為帶有編碼病原體抗原目的基因的重組質粒dna。優點優點核酸疫苗易于設計、構建、改造核酸疫苗易于設計、構建、改造,且成本低廉且成本低廉,適于規模化生產。適于規模化生產。化學性質穩定化學性質穩定,具有良好的耐熱性具有良好的耐熱性,便于保存和運輸。便于保存和運輸。更接近于天然蛋白抗原分子更接近于天然蛋白抗原分子,不僅可以誘導體液免疫不僅可以誘導體液免疫,還可誘導還可誘導細胞免疫細胞免疫,使機體產生比使用其他常規疫苗更有效的免疫應答。使機體產生比使用其他常規疫苗更有效的免疫應答。低劑量的核酸疫苗可激發長時間的免疫。低劑量的核酸疫苗可激發長

16、時間的免疫。免疫原的單一性。免疫原的單一性。在設計核酸疫苗時必須保證質粒不與宿主動物發生基因在設計核酸疫苗時必須保證質粒不與宿主動物發生基因整合。整合。現有的研究表明現有的研究表明,接種核酸疫苗既不出現針對質粒載體本身的應答接種核酸疫苗既不出現針對質粒載體本身的應答,又又不會出現抗抗體不會出現抗抗體,但仍需經過大量的試驗來證實這一點。但仍需經過大量的試驗來證實這一點。質粒長期表達外源抗原質粒長期表達外源抗原,是否會影響機體的免疫系統是否會影響機體的免疫系統,導致導致免疫耐受或對其它抗原的免疫抑制。免疫耐受或對其它抗原的免疫抑制。如果免疫應答過強如果免疫應答過強,是否會出現自身免疫及過敏反應。是

17、否會出現自身免疫及過敏反應。核酸疫苗存在的問題核酸疫苗存在的問題二、人工被動免疫用生物制品二、人工被動免疫用生物制品用毒素或類毒素免疫馬匹，經試血、放血、分離血清、用毒素或類毒素免疫馬匹，經試血、放血、分離血清、提取免疫球蛋白后制成。提取免疫球蛋白后制成。1、抗毒素、抗毒素2、抗菌血清及抗病毒血清、抗菌血清及抗病毒血清針對細菌抗原的抗體血清稱為抗菌血清；針對病毒抗原的針對細菌抗原的抗體血清稱為抗菌血清；針對病毒抗原的抗體血清稱為抗病毒血清。抗體血清稱為抗病毒血清。3、血漿丙種球蛋白、血漿丙種球蛋白從正常成人血漿中提取的從正常成人血漿中提取的g g-球蛋白。球蛋白。實為含有多種抗體的制劑，大都是

18、實為含有多種抗體的制劑，大都是igg或或igm抗體。抗體。在某些傳染病流行時，為了防止體弱的嬰幼兒感染或在某些傳染病流行時，為了防止體弱的嬰幼兒感染或減輕癥狀，可考慮使用這些制品。減輕癥狀，可考慮使用這些制品。免疫學治療免疫學治療是指應用免疫制劑或藥物來增強或抑制機體的免疫應答，是指應用免疫制劑或藥物來增強或抑制機體的免疫應答，以調節免疫功能，維持其相對穩定，達到治療疾病目的的以調節免疫功能，維持其相對穩定，達到治療疾病目的的方法。方法。一、免疫治療概述一、免疫治療概述免疫增強劑：具有增強、促進機體免疫功能的制劑。免疫增強劑：具有增強、促進機體免疫功能的制劑。免疫抑制劑：具有抑制機體免疫功能的

19、制劑。免疫抑制劑：具有抑制機體免疫功能的制劑。二、免疫增強劑二、免疫增強劑卡介苗卡介苗短小棒狀桿菌短小棒狀桿菌lak細胞細胞til細胞細胞等等白細胞介素白細胞介素干擾素干擾素集落刺激因子集落刺激因子腫瘤壞死因子腫瘤壞死因子微生物制劑微生物制劑免免疫疫細細胞胞細細胞胞因因子子化化學學制制劑劑左旋咪唑左旋咪唑聚肌胞聚肌胞等等增強非特異性增強非特異性免疫功能免疫功能三、免疫抑制劑三、免疫抑制劑抗代謝藥抗代謝藥等等烷化劑烷化劑化化學學制制劑劑激激素素真菌代謝產物真菌代謝產物其其他他制制劑劑抗淋巴細胞丙種球蛋白抗淋巴細胞丙種球蛋白抗人抗人t細胞及其亞群單克隆抗體細胞及其亞群單克隆抗體環孢霉素環孢霉素fk

20、-506等等第二節第二節醫藥生物制品的基本概念醫藥生物制品的基本概念根據免疫學原理，用微生物、微生物代謝產物、動物毒根據免疫學原理，用微生物、微生物代謝產物、動物毒素、人或動物的血液或組織等經加工制成，作為預防、素、人或動物的血液或組織等經加工制成，作為預防、治療、診斷特定傳染病或其它有關疾病的免疫制劑以及治療、診斷特定傳染病或其它有關疾病的免疫制劑以及血液制品通稱為生物制品。血液制品通稱為生物制品。生物制品系指以微生物、寄生蟲、動物毒素、生物組織作生物制品系指以微生物、寄生蟲、動物毒素、生物組織作為起始材料，采用生物學工藝或分離純化技術制備，并以為起始材料，采用生物學工藝或分離純化技術制備，

21、并以生物學技術和分析技術控制中間產物和成品質量制成的生生物學技術和分析技術控制中間產物和成品質量制成的生物活性制劑，包括菌苗，疫苗，毒素，類毒素，免疫血清，物活性制劑，包括菌苗，疫苗，毒素，類毒素，免疫血清，血液制品，免疫球蛋白，抗原，變態反應原，細胞因子，血液制品，免疫球蛋白，抗原，變態反應原，細胞因子，激素，酶，發酵產品，單克隆抗體，激素，酶，發酵產品，單克隆抗體，dna重組產品，體外重組產品，體外免疫診斷制品等。免疫診斷制品等。中國生物制品規程中國生物制品規程生物制品種類繁多，一般可分為生物制品種類繁多，一般可分為預防制品預防制品治療制品治療制品診斷制品診斷制品根據所采用的材料、制法或用

22、途不同，具體分類如下：根據所采用的材料、制法或用途不同，具體分類如下：（1）菌苗）菌苗 由有關細菌、螺旋體制成。由有關細菌、螺旋體制成。（2）噬菌體）噬菌體 由特定宿主菌的噬菌體制成。由特定宿主菌的噬菌體制成。（3）疫苗）疫苗 由有關立克次體、病毒制成。由有關立克次體、病毒制成。（4）抗血清與抗毒素）抗血清與抗毒素 經特定抗原免疫動物后，采血分離血漿或血清制成。經特定抗原免疫動物后，采血分離血漿或血清制成。（5）類毒素）類毒素 由有關細菌產生的外毒素經脫毒使之類毒化后制成。由有關細菌產生的外毒素經脫毒使之類毒化后制成。（6）混合制劑）混合制劑 由人的血液分離提取制成。由人的血液分離提取制成。 （8） 細胞因子細胞因子 （9） 診斷制品診斷制品（10）其他）其他（7） 血液制品血液制品生物制品統一名稱規程生物制品統一名稱規程生物制品生產、檢定用菌種、毒種管理規程生物制品生產、檢定用菌種、毒種管理規程生物制品國家標準品的制備和標定規程生物制品國家標準品的制備和標定規程生物制品分批規程生物制品分批規程生物制品分裝規程生物制品分裝規程生物制品包裝規程生物制品包裝規程生物制品儲存、運輸規程生物制品儲存、運輸規程生物制品生產用馬匹檢疫及管理規程生物制品生產用馬匹檢疫及管理規程實驗動物和動物試驗管理規程實驗動物和動物試驗管理規程人二倍體細胞建株、檢定及制備疫苗規程人二倍體細