1、大鼠肝臟組織病理切片的制作和步驟如下：HE 染色（一） 固定與修塊7mm 。6 小時左右后用雙面取組織塊放入 Bouin 氏液中，組織塊的直徑應小于 刀片將組織塊修剪成 3-5mm3 大小。1.75% 乙醇50 分鐘2.85% 乙醇50 分鐘3.95% 乙醇(I)30 分鐘4.95% 乙醇(II)30 分鐘5.100% 乙醇(I)30 分鐘6.100% 乙醇(II)30 分鐘7 1/2 二甲苯（乙醇與二甲苯等體積）二） 脫水與透明&二甲苯（ I）20 分鐘20 分鐘9 . 二甲苯（ II ）10 分鐘（可依據透明效果而定）若脫水不好，二甲苯溶液顏色會變混濁。在每一步驟之后，要充分濾干組

2、織 塊，一般用筒紙吸 干組織塊上的液體，以免影響其他液體的濃度，但也要防止組 織塊干燥。全過程約需要 5h 。（三）浸蠟、包埋與修蠟塊1. 浸蠟：將 60C恒溫箱打開，使石蠟充分溶解，待脫水與透明結束后，將組織塊轉入石蠟里，放置于 60 C 恒溫箱 120 分鐘。2 . 包埋：將 60 C 的石蠟倒入紙盒內，然后用小鑷子將各組織塊按一定的順 序排列好，使切面 朝下。不同組別的同一組織包埋于一個蠟塊中，以保證切片和 染色條件相同。為防止倒入紙盒 內的石蠟底部立刻凝固，可將紙盒置于一玻璃板上（或大培養皿內），然后將玻璃板置于 80-90 C 左右熱水上，包埋時蠟盒底部 要放平，做蠟 塊的蠟要反復凍

3、融較好。3 . 修蠟塊：待紙盒內蠟凝固后，用刀片將其修成梯形，組織塊與蠟塊邊緣 之間的距離不得小于 2mm 。（四）切片 在載玻片上擦少量甘油蛋白。可滴半滴甘油蛋白于載玻片上，用手指充分抹 勻，呈半干狀為佳。切片厚約4-8 卩 m，將切片在 55C 左右水浴中展開，展開程度以帶黃顏色的組織完全攤平為準。用涂有甘油蛋白的載玻片從水浴中撈取切片，放入 37C 烘箱中過夜。每個組織塊撈片 2 張。過夜后，將載玻片置于玻片架上， 進行下面的實驗。（五）脫蠟、染色與脫水 傾斜玻片架，將玻片架和載玻片下緣的試劑用筒紙吸干， 減輕對其他試劑濃 度的影響。全過程約需要 60 分鐘。1. 脫蠟（ 1） 二甲苯（

4、 I） 15 分鐘（ 2）二甲苯（ II） 15 分鐘（3）100%乙醇 2 分鐘（4）95%乙醇（ I）1 分鐘（5）95%乙醇（ II） 1 分鐘（6）蒸餾水浸洗 1 分鐘2 . 染色（7）蘇木精 30 秒鐘（8）自來水沖洗 60 秒。（顯微鏡下觀察效果）（9）伊紅（著色即可） 10 秒鐘（10）蒸餾水浸洗 1 分鐘3 ? 脫水（10）95%乙醇（ I） 1分鐘（11）95%乙醇（ II） 1 分鐘（12）100%乙醇 2 分鐘（13）二甲苯（ I）2 分鐘（14）二甲苯（ II）3-5 分鐘（六）圭寸片將載玻片取下，滴加 12 滴中性樹膠，用鑷子夾住蓋玻片的一角，蓋上蓋玻 片，之后傾斜載

5、玻 片，多余的中性樹膠用筒紙吸干，室溫下保存。2 . 簡要版：肝組織 HE 染色切片制作過程（ 1）取材與固定：取大鼠肝右葉固定部位組織塊，立即投入10 %甲醛中，固定 48h 。（ 2） 脫水透明：組織修片，梯度酒精脫水，后二甲苯中透明。動物組織切成 0. 2-0 . 5cm 的薄片，依次經過 70%酒精 2h-*80 %酒精 2h 一 95%酒精（I、II各 2h） 和無 水酒精 （I、II 各 1h）脫水，二甲苯透明 （I、II 各 lh）, 以置換組織內的酒精溶液。（ 3） 浸蠟包埋：將脫水透明好的組織塊置入融化的石蠟內，使石蠟浸入組織并置換出其中的二甲苯。將浸蠟的組織置于包埋器內，并

6、滴入液化蠟進行組織 包埋，后置于冰面上待其凝固。 切片與貼片：將蠟塊固定于切片機上，切成 5 u m 厚的切片，在 45"C 的水面上展平后鋪在涂有防脫劑的載玻片上，置于 65 C 烤箱烤 3h。脫蠟：切片置入二甲苯 l、n各 15 分鐘，不同濃度酒精 （100% 5min一 95% 5s 一 80%5s 一 70% 5s）置換出其中的二甲苯，最后用 PBS 液洗凈。（6）HE 染色：將石蠟切片放入蘇木精中染色 5mi n蒸餾水洗凈一 1%稀鹽酸分化一流水中充分沖洗返藍，約 20min ; 伊紅染色 5min ，流水沖洗干凈。（ 7）脫水、透明：染好的切片經梯度酒精脫水（70%、80%、95%、100%各