1、2015版藥典 - 高效液相色譜法、質(zhì)譜法0512 高效液相色譜法高效液相色譜法系采用高壓輸液泵將規(guī)定的流動(dòng)相泵入裝有填充劑的色譜柱，對(duì)供試品進(jìn)行分離測(cè)定的色譜方法。 注入的供試品，由流動(dòng)相帶入色譜柱內(nèi)，各組分在柱內(nèi)被分離，并進(jìn)入檢測(cè)器檢測(cè)，由積分儀或數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄和處 理色譜信號(hào)。1. 對(duì)儀器的一般要求和色譜條件高效液相色譜儀由高壓輸液泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、積分儀或數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成。色譜柱內(nèi)徑一般為 3.9 4.6mm，填充劑粒徑為 3lOm。超高效液相色譜儀是適應(yīng)小粒徑（約 2m）填充劑的耐超高壓、小進(jìn)樣量、低死體積、 高靈敏度檢測(cè)的高效液相色譜儀。（1）色譜柱反相色譜柱：以鍵合非

2、極性基團(tuán)的載體為填充劑填充而成的色譜柱。常見(jiàn)的載體有硅膠、聚合物復(fù)合硅膠和聚合物 等；常用的填充劑有十八烷基硅烷鍵合硅膠、辛基硅烷鍵合硅膠和苯基鍵合硅膠等。正相色譜柱：用硅膠填充劑，或鍵合極性基團(tuán)的硅膠填充而成的色譜柱。常見(jiàn)的填充劑有硅膠、氨基鍵合硅膠和氰 基鍵合硅膠等。氨基鍵合硅膠和氰基鍵合硅膠也可用作反相色譜。離子交換色譜柱：用離子交換填充劑填充而成的色譜柱。有陽(yáng)離子交換色譜柱和陰離子交換色譜柱。手性分離色譜柱：用手性填充劑填充而成的色譜柱。色譜柱的內(nèi)徑與長(zhǎng)度，填充劑的形狀、粒徑與粒徑分布、孔徑、表面積、鍵合基團(tuán)的表面覆蓋度、載體表面基團(tuán)殘 留量，填充的致密與均勻程度等均影響色譜柱的性能，

3、應(yīng)根據(jù)被分離物質(zhì)的性質(zhì)來(lái)選擇合適的色譜柱。溫度會(huì)影響分離效果，品種正文中未指明色譜柱溫度時(shí)系指室溫，應(yīng)注意室溫變化的影響。為改善分離效果可適當(dāng) 提高色譜柱的溫度，但一般不宜超過(guò) 60。殘余硅羥基未封閉的硅膠色譜柱，流動(dòng)相 pH值一般應(yīng)在 28 之間。殘余硅羥基已封閉的硅膠、聚合物復(fù)合硅膠或 聚合物色譜柱可耐受更廣泛 pH值的流動(dòng)相，適合于 pH 值小于 2 或大于 8 的流動(dòng)相。（2）檢測(cè)器 最常用的檢測(cè)器為紫外 - 可見(jiàn)分光檢測(cè)器，包括二極管陣列檢測(cè)器，其他常見(jiàn)的檢測(cè)器有熒光檢測(cè)器、 蒸發(fā)光散射檢測(cè)器、示差折光檢測(cè)器、電化學(xué)檢測(cè)器和質(zhì)譜檢測(cè)器等。紫外-可見(jiàn)分光檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器、電化學(xué)檢測(cè)器

4、為選擇性檢測(cè)器，其響應(yīng)值不僅與被測(cè)物質(zhì)的量有關(guān)，還與其 結(jié)構(gòu)有關(guān)；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器和示差折光檢測(cè)器為通用檢測(cè)器，對(duì)所有物質(zhì)均有響應(yīng)，結(jié)構(gòu)相似的物質(zhì)在蒸發(fā)光散射檢 測(cè)器的響應(yīng)值幾乎僅與被測(cè)物質(zhì)的量有關(guān)。紫外-可見(jiàn)分光檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器、電化學(xué)檢測(cè)器和示差折光檢測(cè)器的響應(yīng)值與被測(cè)物質(zhì)的量在一定范圍內(nèi)呈線 性關(guān)系，但蒸發(fā)光散射檢測(cè)器的響應(yīng)值與被測(cè)物質(zhì)的量通常呈指數(shù)關(guān)系，一般需經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換。不同的檢測(cè)器，對(duì)流動(dòng)相的要求不同。紫外 -可見(jiàn)分光檢測(cè)器所用流動(dòng)相應(yīng)符合紫外 - 可見(jiàn)分光光度法（通則 0401） 項(xiàng)下對(duì)溶劑的要求；采用低波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)，還應(yīng)考慮有機(jī)溶劑的截止使用波長(zhǎng)，并選用色譜級(jí)有機(jī)溶劑。蒸發(fā)光散射

5、檢測(cè) 器和質(zhì)譜檢測(cè)器不得使用含不揮發(fā)性鹽的流動(dòng)相。（3）流動(dòng)相 反相色譜系統(tǒng)的流動(dòng)相常用甲醇 -水系統(tǒng)和乙腈 - 水系統(tǒng)，用紫外末端波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)，宜選用乙腈 - 水系 統(tǒng)。流動(dòng)相中應(yīng)盡可能不用緩沖鹽，如需用時(shí)，應(yīng)盡可能使用低濃度緩沖鹽。用十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱時(shí)，流動(dòng) 相中有機(jī)溶劑一般不低于 5%，否則易導(dǎo)致柱效下降、色譜系統(tǒng)不穩(wěn)定。正相色譜系統(tǒng)的流動(dòng)相常用兩種或兩種以上的有機(jī)溶劑，如二氯甲烷和正己烷等。 品種正文項(xiàng)下規(guī)定的條件除填充劑種類、流動(dòng)相組分、檢測(cè)器類型不得改變外，其余如色譜柱內(nèi)徑與長(zhǎng)度、填充劑 粒徑、流動(dòng)相流速、流動(dòng)相組分比例、柱溫、進(jìn)樣量、檢測(cè)器靈敏度等，均可適當(dāng)改變，以達(dá)到系

6、統(tǒng)適用性試驗(yàn)的要求。 調(diào)整流動(dòng)相組分比例時(shí)，當(dāng)小比例組分的百分比例 X小于等于 33%時(shí)，允許改變范圍為 0.7X1.3X；當(dāng) X 大于 33%時(shí)， 允許改變范圍為 X-10% X+10%。若需使用小粒徑（約 2m）填充劑，輸液泵的性能、進(jìn)樣體積、檢測(cè)池體積和系統(tǒng)的死體積等必須與之匹配；如有 必要，色譜條件也應(yīng)作適當(dāng)?shù)恼{(diào)整。當(dāng)對(duì)其測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生爭(zhēng)議時(shí)，應(yīng)以品種項(xiàng)下規(guī)定的色譜條件的測(cè)定結(jié)果為準(zhǔn)。當(dāng)必須使用特定牌號(hào)的色譜柱方能滿足分離要求時(shí)，可在該品種正文項(xiàng)下注明。2. 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜系統(tǒng)的適用性試驗(yàn)通常包括理論板數(shù)、分離度、靈敏度、拖尾因子和重復(fù)性等五個(gè)參數(shù)。按各品種正文項(xiàng)下要求對(duì)色譜系統(tǒng)進(jìn)行

7、適用性試驗(yàn)，即用規(guī)定的對(duì)照品溶液或系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液在規(guī)定的色譜系 統(tǒng)進(jìn)行試驗(yàn)，必要時(shí)，可對(duì)色譜系統(tǒng)進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整，以符合要求。（ 1）色譜柱的理論板數(shù)（ n） 用于評(píng)價(jià)色譜柱的分離效能。由于不同物質(zhì)在同一色譜柱上的色譜行為不同，采用 理論板數(shù)作為衡量色譜柱效能的指標(biāo)時(shí)，應(yīng)指明測(cè)定物質(zhì)，一般為待測(cè)物質(zhì)或內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的理論板數(shù)。在規(guī)定的色譜條件下，注入供試品溶液或各品種項(xiàng)下規(guī)定的內(nèi)標(biāo)物質(zhì)溶液，記錄色譜圖，量出供試品主成分色譜峰 或內(nèi)標(biāo)物質(zhì)色譜峰的保留時(shí)間 t R和峰寬（ W）或半高峰寬 （Wh/2 ），按 n=16（tR/W）2或 n=5.54（tR/Wh/2）2計(jì)算色譜柱的 理論板數(shù)。 t R、 W

8、、Wh/2 可用時(shí)間或長(zhǎng)度計(jì)（下同），但應(yīng)取相同單位。（ 2）分離度（ R） 用于評(píng)價(jià)待測(cè)物質(zhì)與被分離物質(zhì)之間的分離程度，是衡量色譜系統(tǒng)分離效能的關(guān)鍵指標(biāo)。可以 通過(guò)測(cè)定待測(cè)物質(zhì)與已知雜質(zhì)的分離度，也可以通過(guò)測(cè)定待測(cè)物質(zhì)與某一指標(biāo)性成分（內(nèi)標(biāo)物質(zhì)或其他難分離物質(zhì)）的 分離度，或?qū)⒐┰嚻坊驅(qū)φ掌酚眠m當(dāng)?shù)姆椒ń到猓ㄟ^(guò)測(cè)定待測(cè)物質(zhì)與某一降解產(chǎn)物的分離度，對(duì)色譜系統(tǒng)分離效能進(jìn) 行評(píng)價(jià)與調(diào)整。無(wú)論是定性鑒別還是定量測(cè)定，均要求待測(cè)物質(zhì)色譜峰與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)色譜峰或特定的雜質(zhì)對(duì)照色譜峰及其他色譜峰之 間有較好的分離度。除另有規(guī)定外，待測(cè)物質(zhì)色譜峰與相鄰色譜峰之間的分離度應(yīng)大于 1.5 。分離度的計(jì)算公式為：式

9、中 為相鄰兩色譜峰中后一峰的保留時(shí)間；為相鄰兩色譜峰中前一峰的保留時(shí)間；Wt 1、W2及W1，h/2、W2，h/2 分別為此相鄰兩色譜峰的峰 寬及半高峰寬（如圖）當(dāng)對(duì)測(cè)定結(jié)果有異議時(shí)，色譜柱的理論板數(shù)（ n）和分離度（ R）均以峰寬（ W）的計(jì)算結(jié)果為準(zhǔn)。（ 3）靈敏度 用于評(píng)價(jià)色譜系統(tǒng)檢測(cè)微量物質(zhì)的能力，通常以信噪比（ S/N）來(lái)表示。通過(guò)測(cè)定一系列不同濃度的 供試品或?qū)φ掌啡芤簛?lái)測(cè)定信噪比。定量測(cè)定時(shí)，信噪比應(yīng)不小于10；定性測(cè)定時(shí)，信噪比應(yīng)不小于 3。系統(tǒng)適用性試驗(yàn)中可以設(shè)置靈敏度實(shí)驗(yàn)溶液來(lái)評(píng)價(jià)色譜系統(tǒng)的檢測(cè)能力。（ 4）拖尾因子（ T） 用于評(píng)價(jià)色譜峰的對(duì)稱性。拖尾因子計(jì)算公式為：式中

10、 W0.05h 為 5%峰高處的峰寬；d 1 為峰頂在 5%峰高處橫坐標(biāo)平行線的投影點(diǎn)至峰前沿與此平行線交點(diǎn)的距離（如圖）。以峰高作定量參數(shù)時(shí)，除另有規(guī)定外， T值應(yīng)在0.95 1.05 之間。 以峰面積作定量參數(shù)時(shí)，一般的峰拖尾或前伸不會(huì)影響峰面積積分，但嚴(yán)重拖尾會(huì)影響基線和色譜峰起止的判斷和 峰面積積分的準(zhǔn)確性，此時(shí)應(yīng)在品種正文項(xiàng)下對(duì)拖尾因子作出規(guī)定。（ 5）重復(fù)性 用于評(píng)價(jià)色譜系統(tǒng)連續(xù)進(jìn)樣時(shí)響應(yīng)值的重復(fù)性能。采用外標(biāo)法時(shí)，通常取各品種項(xiàng)下的對(duì)照品溶液， 連續(xù)進(jìn)樣 5 次，除另有規(guī)定外，其峰面積測(cè)量值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0%；采用內(nèi)標(biāo)法時(shí)，通常配制相當(dāng)于 80%、100%和120%的

11、對(duì)照品溶液，加入規(guī)定量的內(nèi)標(biāo)溶液， 配成 3種不同濃度的溶液，分別至少進(jìn)樣 2次，計(jì)算平均校正因子， 其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于 2.0%。3. 測(cè)定法（ 1）內(nèi)標(biāo)法 按品種正文項(xiàng)下的規(guī)定，精密稱（量）取對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，分別配成溶液，各精密量取適量，混合 配成校正因子測(cè)定用的對(duì)照溶液。取一定量進(jìn)樣，記錄色譜圖。測(cè)量對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高，按下式計(jì)算校 正因子：式中 A s 為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高；A R為對(duì)照品的峰面積或峰高；C s為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的濃度；C R為對(duì)照品的濃度。再取各品種項(xiàng)下含有內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的供試品溶液，進(jìn)樣，記錄色譜圖，測(cè)量供試品中待測(cè)成分和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰 高，按下式計(jì)算

12、含量：式中 A x 為供試品的峰面積或峰高；c x 為供試品的濃度；A s 為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高；c s 為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的濃度；f 為內(nèi)標(biāo)法校正因子。采用內(nèi)標(biāo)法，可避免因供試品前處理及進(jìn)樣體積誤差對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響。（ 2）外標(biāo)法 按各品種項(xiàng)下的規(guī)定，精密稱（量）取對(duì)照品和供試品，配制成溶液，分別精密取一定量，進(jìn)樣，記 錄色譜圖，測(cè)量對(duì)照品溶液和供試品溶液中待測(cè)物質(zhì)的峰面積（或峰高），按下式計(jì)算含量：式中各符號(hào)意義同上。由于微量注射器不易精確控制進(jìn)樣量，當(dāng)采用外標(biāo)法測(cè)定時(shí)，以手動(dòng)進(jìn)樣器定量環(huán)或自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣為宜。（ 3）加校正因子的主成分自身對(duì)照法 測(cè)定雜質(zhì)含量時(shí)，可采用加校正因子的主成分自身對(duì)

13、照法。在建立方法時(shí)， 按各品種項(xiàng)下的規(guī)定，精密稱（量）取待測(cè)物對(duì)照品和參比物質(zhì) 對(duì)照品各適量，配制待測(cè)物校正因子的溶液，進(jìn)樣， 記錄色譜圖，按下式計(jì)算待測(cè)物的校正因子。式中 c A為待測(cè)物的濃度；A A為待測(cè)物的峰面積或峰高；c B 為參比物質(zhì)的濃度；A B為參比物質(zhì)的峰面積或峰高。也可精密稱（量）取主成分對(duì)照品和雜質(zhì)對(duì)照品各適量，分別配制成不同濃度的溶液，進(jìn)樣，記錄色譜圖，繪制主 成分濃度和雜質(zhì)濃度對(duì)其峰面積的回歸曲線，以主成分回歸直線斜率與雜質(zhì)回歸直線斜率的比計(jì)算校正因子。校正因子可直接載入各品種項(xiàng)下，用于校正雜質(zhì)的實(shí)測(cè)峰面積。需作校正計(jì)算的雜質(zhì)，通常以主成分為參比，采用 相對(duì)保留時(shí)間定位

14、，其數(shù)值一并載入各品種項(xiàng)下。測(cè)定雜質(zhì)含量時(shí)，按各品種項(xiàng)下規(guī)定的雜質(zhì)限度，將供試品溶液稀釋成與雜質(zhì)限度相當(dāng)?shù)娜芤?，作為?duì)照溶液；進(jìn) 樣，記錄色譜圖，必要時(shí)，調(diào)節(jié)縱坐標(biāo)范圍（以噪聲水平可接受為限）使對(duì)照溶液的主成分色譜峰的峰高約達(dá)滿量程的 10% 25%。除另有規(guī)定外，通常含量低于 0.5%的雜質(zhì)， 峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（ RSD）應(yīng)小于 10%；含量在 0.5% 2% 的雜質(zhì)，峰面積的 RSD應(yīng)小于 5%；含量大于 2%的雜質(zhì)，峰面積的 RSD應(yīng)小于 2%。然后，取供試品溶液和對(duì)照溶液適量， 分別進(jìn)樣，除另有規(guī)定外，供試品溶液的記錄時(shí)間，應(yīng)為主成分色譜峰保留時(shí)間的 2 倍，測(cè)量供試品溶液色譜圖上

15、各雜 質(zhì)的峰面積，分別乘以相應(yīng)的校正因子后與對(duì)照溶液主成分的峰面積比較，計(jì)算各雜質(zhì)含量。（ 4）不加校正因子的主成分自身對(duì)照法 測(cè)定雜質(zhì)含量時(shí)， 若無(wú)法獲得待測(cè)雜質(zhì)的校正因子， 或校正因子可以忽略， 也可采用不加校正因子的主成分自身對(duì)照法。同上述（ 3）法配制對(duì)照溶液、進(jìn)樣調(diào)節(jié)縱坐標(biāo)范圍和計(jì)算峰面積的相對(duì) 標(biāo)準(zhǔn)偏差后，取供試品溶液和對(duì)照品溶液適量，分別進(jìn)樣。除另有規(guī)定外，供試品溶液的記錄時(shí)間應(yīng)為主成分色譜峰保 留時(shí)間的 2 倍，測(cè)量供試品溶液色譜圖上各雜質(zhì)的峰面積并與對(duì)照溶液主成分的峰面積比較，依法計(jì)算雜質(zhì)含量。（ 5）面積歸一化法 按各品種項(xiàng)下的規(guī)定，配制供試品溶液，取一定量進(jìn)樣，記錄色譜圖

16、。測(cè)量各峰的面積和色譜 圖上除溶劑峰以外的總色譜峰面積，計(jì)算各峰面積占總峰面積的百分率。用于雜質(zhì)檢查時(shí)，由于儀器響應(yīng)的線性限制， 峰面積歸一化法一般不宜用于微量雜質(zhì)的檢查。0431 質(zhì)譜法質(zhì)譜法是使待測(cè)化合物產(chǎn)生氣態(tài)離子， 再按質(zhì)荷比（m/z）將離子分離、檢測(cè)的分析方法，檢測(cè)限可達(dá) 10-15 l0 -12mol 數(shù)量級(jí)。質(zhì)譜法可提供分子質(zhì)量和結(jié)構(gòu)的信息，定量測(cè)定可采用內(nèi)標(biāo)法或外標(biāo)法。質(zhì)譜儀的主要組成如圖所示。在由泵維持的約 10-3 10-6 Pa 真空狀態(tài)下，離子源產(chǎn)生的各種正離子（或負(fù)離子）， 經(jīng)加速，進(jìn)入質(zhì)量分析器分離，再由檢測(cè)器檢測(cè)。計(jì)算機(jī)系統(tǒng)用于控制儀器，記錄、處理并儲(chǔ)存數(shù)據(jù)，當(dāng)配

17、有標(biāo)準(zhǔn)譜庫(kù) 軟件時(shí)，計(jì)算機(jī)系統(tǒng)可以將測(cè)得的質(zhì)譜與標(biāo)準(zhǔn)譜庫(kù)中圖譜比較，獲得可能化合物的組成和結(jié)構(gòu)信息。圖 質(zhì)譜儀的主要組成一、進(jìn)樣系統(tǒng)樣品導(dǎo)入應(yīng)不影響質(zhì)譜儀的真空度。進(jìn)樣方式的選擇取決于樣品的性質(zhì)、純度及所采用的離子化方式。1. 直接進(jìn)樣室溫常壓下，氣態(tài)或液態(tài)化合物的中性分子通過(guò)可控漏孔系統(tǒng)，進(jìn)入離子源。吸附在固體上或溶解在液體中的揮發(fā) 性待測(cè)化合物可采用頂空分析法提取和富集，程序升溫解吸附，再經(jīng)毛細(xì)管導(dǎo)入質(zhì)譜儀。揮發(fā)性固體樣品可置于進(jìn)樣桿頂端，在接近離子源的高真空狀態(tài)下加熱、氣化。采用解吸離子化技術(shù)，可以使熱不 穩(wěn)定的、難揮發(fā)的樣品在氣化的同時(shí)離子化。多種分離技術(shù)已實(shí)現(xiàn)了與質(zhì)譜的聯(lián)用。經(jīng)分離后

18、的各種待測(cè)成分，可以通過(guò)適當(dāng)?shù)慕涌趯?dǎo)入質(zhì)譜儀分析。2. 氣相色譜 - 質(zhì)譜聯(lián)用（ GC-MS）在使用毛細(xì)管氣相色譜柱及高容量質(zhì)譜真空泵的情況下，色譜流出物可直接引入質(zhì)譜儀。3. 液相色譜 - 質(zhì)譜聯(lián)用（ LC-MS）使待測(cè)化合物從色譜流出物中分離、形成適合于質(zhì)譜分析的氣態(tài)分子或離子需要特殊的接口。為減少污染，避免化 學(xué)噪聲和電離抑制，流動(dòng)相中所含的緩沖鹽或添加劑通常應(yīng)具有揮發(fā)性，且用量也有一定的限制。（ 1）粒子束接口 液相色譜的流出物在去溶劑室霧化、脫溶劑后，僅待測(cè)化合物的中性分子被引入質(zhì)譜離子源。粒 子束接口適用于分子質(zhì)量小于 1000 道爾頓的弱極性、熱穩(wěn)定化合物的分析，測(cè)得的質(zhì)譜可以由

19、電子轟擊離子化或化學(xué) 離子化產(chǎn)生。電子轟擊離子化質(zhì)譜常含有豐富的結(jié)構(gòu)信息。（2）移動(dòng)帶接口 流速為 0.5 1.5ml/min 的液相色譜流出物，均勻地滴加在移動(dòng)帶上，蒸發(fā)、除去溶劑后，待測(cè) 化合物被引入質(zhì)譜離子源。移動(dòng)帶接口不適宜于極性大或熱不穩(wěn)定化合物的分析，測(cè)得的質(zhì)譜可以由電子轟擊離子化或 化學(xué)離子化或快原子轟擊離子化產(chǎn)生。（3）大氣壓離子化接口是目前液相色譜 - 質(zhì)譜聯(lián)用廣泛采用的接口技術(shù)。由于兼具離子化功能，這些接口將在離子 源部分介紹。4. 超臨界流體色譜 - 質(zhì)譜聯(lián)用（ SFC-MS）超臨界流體色譜 - 質(zhì)譜聯(lián)用主要采用大氣壓化學(xué)離子化或電噴霧離子化接口。色譜流出物通過(guò)一個(gè)位于柱

20、子和離子 源之間的加熱限流器轉(zhuǎn)變?yōu)闅鈶B(tài)，進(jìn)入質(zhì)譜儀分析。5. 毛細(xì)管電泳 - 質(zhì)譜聯(lián)用（ CE-MS）幾乎所有的毛細(xì)管電泳操作模式均可與質(zhì)譜聯(lián)用。選擇接口時(shí)，應(yīng)注意毛細(xì)管電泳的低流速特點(diǎn)并使用揮發(fā)性緩沖 液。電噴霧離子化是毛細(xì)管電泳與質(zhì)譜聯(lián)用最常用的接口技術(shù)。二、離子源根據(jù)待測(cè)化合物的性質(zhì)及擬獲取的信息類型，可以選用不同的離子源。1. 電子轟擊離子化（ EI ）處于離子源的氣態(tài)待測(cè)化合物分子，受到一束能量（通常是 70eV）大于其電離能的電子轟擊而離子化。質(zhì)譜中往往 含有待測(cè)化合物的分子離子及具有待測(cè)化合物結(jié)構(gòu)特征的碎片離子。電子轟擊離子化適用于熱穩(wěn)定的、易揮發(fā)化合物的 離子化，是氣相色譜 -

21、 質(zhì)譜聯(lián)用最常用的離子化方式。當(dāng)采用粒子束或移動(dòng)帶等接口時(shí)，電子轟擊離子化也可用于液相 色譜- 質(zhì)譜聯(lián)用。2. 化學(xué)離子化（ CI ）離子源中的試劑氣分子（如甲烷、異丁烷和氨氣）受高能電子轟擊而離子化，進(jìn)一步發(fā)生離子一分子反應(yīng)，產(chǎn)生穩(wěn) 定的試劑氣離子，再使待測(cè)化合物離子化。化學(xué)離子化可產(chǎn)生待測(cè)化合物（M）的（M+H）+或（M-H）- 特征離子、或待測(cè)化合物與試劑氣分子產(chǎn)生的加合離子。與電子轟擊離子化質(zhì)譜相比，化學(xué)離子化質(zhì)譜中碎片離子較少，適宜于采用電子 轟擊離子化無(wú)法得到分子質(zhì)量信息的熱穩(wěn)定的、易揮發(fā)化合物分析。3. 快原子轟擊（ FAB）或快離子轟擊離子化（ LSIMS）高能中性原子（如氬氣

22、）或高能銫離子，使置于金屬表面、分散于惰性黏稠基質(zhì)（如甘油）中的待測(cè)化合物離子化， 產(chǎn)生（ M+H）+或（M-H）- 特征離子或待測(cè)化合物與基質(zhì)分子的加合離子?？煸愚Z擊或快離子轟擊離子化非常適合于各 種極性的、 熱不穩(wěn)定化合物的分子質(zhì)量測(cè)定及結(jié)構(gòu)表征， 廣泛應(yīng)用于分子質(zhì)量高達(dá) 10000道爾頓的肽、 抗生素、核苷酸、 脂質(zhì)、有機(jī)金屬化合物及表面活性劑的分析?？煸愚Z擊或快離子轟擊離子化用于液相色譜 -質(zhì)譜聯(lián)用時(shí)， 需在色譜流動(dòng)相中添加 1%10%的甘油，且必須保持很 低流速（ 1l0 l/min ）。4. 基質(zhì)輔助激光解吸離子化（ MALD）I將溶于適當(dāng)基質(zhì)中的供試品涂布于金屬靶上，用高強(qiáng)度

23、的紫外或紅外脈沖激光照射，使待測(cè)化合物離子化?；|(zhì)輔 助激光解吸離子化主要用于分子質(zhì)量在 100000 道爾頓以上的生物大分子分析，適宜與飛行時(shí)間分析器結(jié)合使用。5. 電噴霧離子化（ ESI）離子化在大氣壓下進(jìn)行。待測(cè)溶液（如液相色譜流出物）通過(guò)一終端加有幾千伏高壓的毛細(xì)管進(jìn)入離子源，氣體輔 助霧化，產(chǎn)生的微小液滴去溶劑，形成單電荷或多電荷的氣態(tài)離子。這些離子再經(jīng)逐步減壓區(qū)域，從大氣壓狀態(tài)傳送到 質(zhì)譜儀的高真空中。電噴霧離子化可在 1l/min 1ml/min 流速下進(jìn)行，適合極性化合物和分子質(zhì)量高達(dá) 100000道爾 頓的生物大分子研究，是液相色譜 - 質(zhì)譜聯(lián)用、毛細(xì)管電泳 -質(zhì)譜聯(lián)用最成功

24、的接口技術(shù)。6. 大氣壓化學(xué)離子化（ APCI）原理與化學(xué)離子化相同，但離子化在大氣壓下進(jìn)行。流動(dòng)相在熱及氮?dú)饬鞯淖饔孟蚂F化成氣態(tài)，經(jīng)由帶有幾千伏高 壓的放電電極時(shí)離子化， 產(chǎn)生的試劑氣離子與待測(cè)化合物分子發(fā)生離子 - 分子反應(yīng)，形成單電荷離子，正離子通常是（M+H） +，負(fù)離子則是（ M-H）-。大氣壓化學(xué)離子化能在流速高達(dá) 2ml/min 下進(jìn)行，常用于分析分子質(zhì)量小于 1500 道爾頓的小 分子或弱極性化合物，主要產(chǎn)生的是（ M+H）+或（M-H）- 離子，很少有碎片離子，是液相色譜 - 質(zhì)譜聯(lián)用的重要接口之一。7. 大氣壓光離子化（ APPI）與大氣壓化學(xué)離子化不同， 大氣壓光離子化是

25、利用光子使氣相分子離子化。 該離子化源主要用于非極性物質(zhì)的分析， 是電噴霧離子化、大氣壓化學(xué)離子化的一種補(bǔ)充。大氣壓光離子化對(duì)于試驗(yàn)條件比較敏感，摻雜劑、溶劑及緩沖溶液的 組成等均會(huì)對(duì)測(cè)定的選擇性、靈敏度產(chǎn)生較大影響。三、質(zhì)量分析器質(zhì)量范圍、分辨率是質(zhì)量分析器的兩個(gè)主要性能指標(biāo)。質(zhì)量范圍指質(zhì)量分析器所能測(cè)定的質(zhì)荷比的范圍；分辨率表 示質(zhì)量分析器分辨相鄰的、質(zhì)量差異很小的峰的能力。雖然不同類型的質(zhì)量分析器對(duì)分辨率的具體定義存在差異，高分 辨質(zhì)譜儀通常指其質(zhì)量分析器的分辨率大 104。1. 扇形磁場(chǎng)分析器離子源中產(chǎn)生的離子經(jīng)加速電壓（ V）加速，聚焦進(jìn)入扇形磁場(chǎng)（磁場(chǎng)強(qiáng)度 B）。在磁場(chǎng)的作用下，不

26、同質(zhì)荷比的離 子發(fā)生偏轉(zhuǎn)，按各自的曲率半徑（ r ）運(yùn)動(dòng)： m/z = B 2r2/2V改變磁場(chǎng)強(qiáng)度，可以使不同質(zhì)荷比的離子具有相同的運(yùn)動(dòng)曲率半徑（ r ），進(jìn)而通過(guò)狹縫出口，達(dá)到檢測(cè)器。扇形磁場(chǎng)分析器可以檢測(cè)分子質(zhì)量高達(dá) 15000 道爾頓的單電荷離子。當(dāng)與靜電場(chǎng)分析器結(jié)合、構(gòu)成雙聚焦扇形磁場(chǎng) 分析器時(shí)，分辨率可達(dá)到 105。2. 四極桿分析器分析器由四根平行排列的金屬桿狀電極組成。直流電壓（ DC）和射頻電壓（ RF）作用于電極上，形成了高頻振蕩電 場(chǎng)（四極場(chǎng)）。在特定的直流電壓和射頻電壓條件下，一定質(zhì)荷比的離子可以穩(wěn)定地穿過(guò)四極場(chǎng)，到達(dá)檢測(cè)器。改變直 流電壓和射頻電壓大小，但維持它們的比

27、值恒定，可以實(shí)現(xiàn)質(zhì)譜掃描。四極桿分析器可檢測(cè)的分子質(zhì)量上限通常是 4000 道爾頓，分辨率約為 103。3. 離子阱分析器四極離子阱（ QIT）由兩個(gè)端蓋電極和位于它們之間的環(huán)電極組成。端蓋電極處在地電位，而環(huán)電極上施加射頻電 壓（RF），以形成三維四極場(chǎng)。選擇適當(dāng)?shù)纳漕l電壓，四極場(chǎng)可以儲(chǔ)存質(zhì)荷比大于某特定值的所有離子。采用“質(zhì)量選 擇不穩(wěn)定性”模式，提高射頻電壓值，可以將離子按質(zhì)量從高到低依次射出離子阱。揮發(fā)性待測(cè)化合物的離子化和質(zhì)量 分析可以在同一四極場(chǎng)內(nèi)完成。通過(guò)設(shè)定時(shí)間序列，單個(gè)四極離子阱可以實(shí)現(xiàn)多級(jí)質(zhì)譜（MSn）的功能。線性離子阱（ LIT ）是二維四極離子阱，結(jié)構(gòu)上等同于四極質(zhì)量分

28、析器，但操作模式與三維離子阱相似。四極線性 離子阱具有更好的離子儲(chǔ)存效率和儲(chǔ)存容量，可改善的離子噴射效率及更快的掃描速度和較高的檢測(cè)靈敏度。離子阱分析器與四極桿分析器具有相近的質(zhì)量上限及分辨率。4. 飛行時(shí)間分析器（ TOF）具有相同動(dòng)能、不同質(zhì)量的離子，因飛行速度不同而實(shí)現(xiàn)分離。當(dāng)飛行距離一定時(shí)，離子飛行需要的時(shí)間與質(zhì)荷比 的平方根成正比，質(zhì)量小的離子在較短時(shí)間到達(dá)檢測(cè)器。為了測(cè)定飛行時(shí)間，將離子以不連續(xù)的組引入質(zhì)量分析器，以 明確起始飛行時(shí)間。離子組可以由脈沖式離子化（如基質(zhì)輔助激光解吸離子化）產(chǎn)生，也可通過(guò)門控系統(tǒng)將連續(xù)產(chǎn)生的 離子流在給定時(shí)間引入飛行管。飛行時(shí)間分析器的質(zhì)量分析上限約

29、15000 道爾頓、離子傳輸效率高（尤其是譜圖獲取速度快）、質(zhì)量分辨率104。5. 離子回旋共振分析器（ ICR）在高真空（ 107Pa）狀態(tài)下，離子在超導(dǎo)磁場(chǎng)中作回旋運(yùn)動(dòng)，運(yùn)行軌道隨著共振交變電場(chǎng)而改變。當(dāng)交變電場(chǎng)的頻 率和離子回旋頻率相同時(shí)，離子被穩(wěn)定加速，軌道半徑越來(lái)越大，動(dòng)能不斷增加。關(guān)閉交變電場(chǎng)，軌道上的離子在電極 上產(chǎn)生交變的像電流。利用計(jì)算機(jī)進(jìn)行傅立葉變換，將像電流信號(hào)轉(zhuǎn)換為頻譜信號(hào)，獲得質(zhì)譜。待測(cè)化合物的離子化和質(zhì)量分析可以在同一分析器內(nèi)完成。離子回旋共振分析器的質(zhì)量分析上限104 道爾頓，分辨率高達(dá) 106，質(zhì)荷比測(cè)定精確到千分之一，可以進(jìn)行多級(jí)質(zhì)譜（ MSn）分析。6. 串

30、聯(lián)質(zhì)譜（ MS-MS）串聯(lián)質(zhì)譜是時(shí)間上或空間上兩級(jí)以上質(zhì)量分析的結(jié)合，測(cè)定第一級(jí)質(zhì)量分析器中的前體離子（ precursor ion ）與 第二級(jí)質(zhì)量分析器中的產(chǎn)物離子（ product ion ）之間的質(zhì)量關(guān)系。 多級(jí)質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)常以 MS表示。產(chǎn)物離子掃描（ product-ion scan ） 在第一級(jí)質(zhì)量分析器中選擇某 m/z 的離子作為前體離子，測(cè)定該離子在第二 級(jí)質(zhì)量分析器中、一定的質(zhì)量范圍內(nèi)的所有碎片離子（產(chǎn)物離子）的質(zhì)荷比與相對(duì)強(qiáng)度，獲得該前體離子的質(zhì)譜。前體離子掃描（ precursor-ion scan ） 在第二級(jí)質(zhì)量分析器中選擇某 m/z 的產(chǎn)物離子，測(cè)定在第一級(jí)質(zhì)量分析器 中、一定的質(zhì)量范圍內(nèi)所有能產(chǎn)生該碎片離子的前體離子。中性丟失掃描（ neutral-loss scan ） 以恒定的質(zhì)量差異，在一定的質(zhì)量范圍內(nèi)同時(shí)測(cè)定第一級(jí)、第二級(jí)質(zhì)量分析 器中的所有前體離子和產(chǎn)物離子，以發(fā)現(xiàn)能產(chǎn)生特定中性碎片（如CO2）丟失的化合物或同系物。選擇反應(yīng)檢測(cè)（ selected-reaction monitoring， SRM） 選擇第一級(jí)質(zhì)量分析器中某前體離子（ m/z）1，測(cè)定該離子在第二級(jí)質(zhì)量分析器中的特定產(chǎn)物離子（ m/z）2 的強(qiáng)度，以