1、四川樂至貴均衛生材料有限公司醫療器械產品無菌檢測方法1. 目的建立無菌檢測標準規程，對滅菌后的醫療器械產品進行無菌檢測，以確定滅菌的有效性。2. 范圍本規程適用于本公司對醫療器械產品的無菌檢測。3. 依據中國藥典2015版4. 設備、器皿、藥品的準備4.1設備的準備電子天平、干熱滅菌箱、高壓滅菌箱、潔凈工作臺、放大鏡、移液槍、電熱培養箱、霉 菌培養箱、冰箱、斜口鉗、接種環、酒精燈4.2 器皿的準備錐心瓶(500ml)、燒杯(1000ml)、試劑瓶(60ml)、量筒(50ml、1000ml)、培養皿(90mm x 15mm)、斜口鉗、玻璃棒。4.3藥品的準備硫乙醇酸鹽流體培養基、胰酪大豆胨液體培

2、養基、純化水、pH7.0無菌氯化鈉溶液。5. 器皿的清洗將所需的錐形瓶、燒杯、試劑瓶、培養皿、玻璃棒放入超聲波清洗機中用純化水清洗 兩次，每次15分鐘，將清洗完的器皿在180C條件下進行干熱滅菌 2小時。6. 取樣按滅菌批次或者生產批次進行取樣，隨機抽取同一型號的產品4件作無菌檢測樣品7. 培養基的制備7.1硫乙醇酸鹽流體培養基的制備取15g硫乙醇酸鹽流體培養基和1000ml純化水于燒杯中混合，加熱至微沸(注意加熱過程中要不斷地攪拌，使其混合均勻)用棉花塞塞緊復用無塵布和繩子綁好后轉移至高壓滅菌鍋內滅菌，滅菌溫度為121C，滅菌時間30分鐘。滅菌后搖均，冷卻至45C待用。7.2胰酪大豆胨液體培

3、養基的制備取15g胰酪大豆胨和1000ml純化水于燒杯中混合，操作方法同6.1。8. 培養基靈敏度檢查8.1 菌種的要求培養基靈敏度檢查所用的菌株（金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌）傳代次數不得超過5代。8.2菌液的制備接種金黃色葡萄球菌的新鮮培養物至硫乙醇酸鹽流體培養基上，30-35 C培養24小時;接種枯草芽孢桿菌的新鮮培養物至胰酪大豆胨液體培養基上，20-25 C培養24小時。將上述經24小時培養后的培養物用 0.9 %無菌氯化鈉溶液制成每 1ml含菌數小于 100cfu（菌落形成單位）的菌懸液。制備好的菌液應在 2-8 C條件下保存，并在24小時內使用。 8.3接種及培養取每管裝量15ml

4、的硫乙醇酸鹽流體培養基3支，其中2支接種小于100cfu的金黃色葡萄球菌，另一支不接種作為空白對照，30-35 C培養3天逐日觀察并記錄。取每管裝量10ml的胰酪大豆胨液體培養基3支，其中2支接種小于100cfu的枯草芽孢桿菌，另1支不接種作為空白對照，20-25C培養5天，逐日觀察記錄。8.4靈敏度檢測結果判斷空白對照管應無菌生長，若加菌的培養基試管菌落均生長良好，則判定該培養基的靈 敏度檢查符合規定。9. 供試品的無菌檢測9.1 對照試驗取每管裝量15ml的硫乙醇酸鹽流體培養基3支，接種小于100cfu的金黃色葡萄球菌，另一支不接種作為空白對照，30-35C培養14天逐日觀察并記錄。取每管

5、裝量10ml的胰酪大豆胨液體培養基3支，其中2支接種小于100cfu的枯草芽孢桿菌，另1支不接種作為空白對照，20-25C培養14天，逐日觀察記錄。9.2供試品的準備及接種于微生物實驗室超凈工作臺內將樣品剪成小碎段（23cm），其中2件接種于各培養皿足以浸沒供試品的適量硫乙醇酸鹽流體培養基中，另外2件接種于各培養皿足以浸沒供試品的適量胰酪大豆胨液體培養基中，冷卻。9.2培養將接種過的硫乙醇酸鹽流體培養基的培養皿倒置于電熱培養箱中3035 C條件下培養14天，逐日觀察是否有菌落生長并記錄；將接種過的胰酪大豆胨液體培養基的培養皿倒置于霉菌培養箱中2025 C條件下培養14天，逐日觀察是否有菌落生長

6、并記錄。10. 供試品無菌檢測結果判定即為合若上述接種后的培養基經 14天培養后均無菌落生長， 則可判定供試液為無菌, 格；反之，則為不合格。11. 無菌檢測報告（見附表 1）無菌檢測報告檢測依據中國藥典2015版檢測日期樣品數量樣品批號樣品名稱樣品規格培養基的靈敏度檢測硫乙醇酸鹽流體培養基（培養3天）胰酪大豆胨培養基（培養 5天）培養天數接種金黃色葡萄球菌接種金黃色葡萄球菌空白接種枯草芽抱桿菌接種枯草芽抱桿菌空白12345結論：日期：供試品的無菌檢測培養 天數硫乙醇酸鹽流體培養基（培養14天）改良馬丁培養基（培養 14天）金黃色葡萄球菌樣品1樣品2空白白色念珠菌樣品3樣品4空白1234567891011121314結論： 報告日期：備注“ + ”表示有菌生長；“-”表示無菌生長；培養基的靈敏度檢測中空白試驗應無菌