1、艾滋病毒危害性評估報告1危害程度分類1.1分類等級根據中華人民共和國傳染病防治法，艾滋病毒（HIV）屬于乙類傳染病。在衛生部2006年公布的人間傳染的病原微生物名錄中將艾滋病毒(型和型)列為危害程度第二類病原微生物。運輸包裝僅病毒培養物為A類，UN編號為UN2814。1.2不同實驗室操作生物安全實驗室級別要求根據人間傳染的病原微生物名錄要求：艾滋病血清學檢測屬于未經培養的感染材料的操作，應在符合級生物安全實驗室（BSL-2）要求的艾滋病檢測實驗室中進行。2背景資料2.1一般生物學特性HIV屬逆轉錄病毒科慢病毒屬，病毒顆粒呈球形，直徑90nm130nm。病毒的核心呈中空錐形，由兩條相同的單鏈RN

2、A鏈、逆轉錄酶和蛋白質組成其RNA中含有gag、env和pol基因以及6種調控基因tat，vif，vpr，vpx(vpu)，nef，rev。gag基因編碼病毒的核心蛋白；pol基因編碼病毒復制所需要的酶類(逆轉錄酶、整合酶和蛋白酶)；env基因所編碼的病毒包膜蛋白，是HIV免疫學診斷的主要檢測抗原。調控基因編碼的輔助蛋白，是調節病毒蛋白合成和復制;核心之外為病毒衣殼，呈20面體立體對稱，含有核衣殼蛋白質。最外層為包膜，包膜上的糖蛋白有刺突狀結構，是HIV與宿主細胞受體結合位點和主要的中和位點。HIV是一種嗜T細胞和嗜神經細胞的病毒，侵入人體后選擇性攻擊T輔助細胞、腦組織細胞、脊髓細胞和周圍神經

3、細胞。當HIV在TH內大量生長繁殖，是TH大量破壞時，則發生細胞免疫缺陷，自身穩定和免疫監測功能喪失，不僅可發生一系列原蟲、蠕蟲、細菌、真菌和病毒等條件病原體感染，還可發生少見的惡性腫瘤，最終導致死亡。現有兩型HIV：HIV-1和HIV-2，它們主要區別在于包膜糖蛋白上。HIV是一種變異性很強的病毒，不同的毒株之間差異很大，甚至同一毒株在同一感染者體內僅數月就可以改變，使抗原中和抗體失去中和效能，這給HIV疫苗的研制造成很大困難。目前在全球流行的HIV-1毒株已出現三個組，即M、O和N組，其中M組又可分為A到J10個亞型，而且亞型間的重組體已有發現。HIV-2現有AF6個亞型。目前也有學者根據

4、病毒的生物學特性對HIV-1進行分群，如根據病毒與宿主細胞結合所利用的輔助受體的不同(CCR5、CXCR4)，分為R5和X4毒株；或根據宿主范圍及復制特性不同，分為非合胞體誘導株(NSI)和合胞體誘導株(SI)；有毒力株和無毒力株；快/高型和低/慢型等。2.2對外界環境的穩定性HIV對外界抵抗力較弱，遠較乙型肝炎病毒(HBV)對外界的抵抗力低得多，病毒離開人體后，常溫下可存活數小時至數天，對熱、乾燥敏感，不耐酸。60以上就可被滅活。因此，注射器具、醫療用具通過高溫消毒、煮沸或蒸汽消毒完全可以達到消毒目的。HIV對化學品也十分敏感，常用的消毒劑如70%酒精、10%漂白粉、2%戊二醛、4%福爾馬林

5、等均能滅活病毒。2.3致病性HIV具有嗜細胞特性，主要感染T輔助細胞和單核巨噬細胞，它所引起的疾病臨床表現十分復雜，以CD4T淋巴細胞進行性減少和免疫缺陷為特征，常伴有實質器官（腦、淋巴結和肺等）的炎性疾病、神經障礙和惡性腫瘤。感染HIV后的24周為急性期，突發病毒血癥，30%70%的感染者可能伴有流感樣或單核細胞增生樣癥狀。此后由于特異性細胞免疫的作用，病毒血癥和臨床癥狀基本消失，進入平均810年的無癥期（或稱潛伏期），此時病毒仍在復制，并不斷減少和免疫功能逐漸下降。免疫系統的進行性損傷將導致免疫功能嚴重缺陷，逐步出現持續性全身淋巴腺病及艾滋病相關綜合癥（AIDS-relatedcomple

6、x,ARC），約50%的感染者會表現出各種機會性感染、惡性腫瘤和神經損傷等臨床癥狀，進而發展成為艾滋病患者，進入病程的終末階段。2.4傳播途徑及暴露的后果2.4.1傳播途徑：目前發現有HIVI和HIV-兩型，HIV主要存在于血液、精液和陰道分泌液中，通過性接觸，輸入染有HIV的血液、血制品，器官移植、注射等方式傳播，亦可經垂直方式造成母嬰傳播，至今尚無特效治療。2.4.2暴露的后果：HIV感染可誘導體液和細胞免疫，集體的免疫反應可限制病毒感染，但不能完全清除病毒，經過急性感染期、臨床潛伏期后，進入免疫缺損期。2.5艾滋病的預防、診斷和治療2.5.1預防1)艾滋病是一種病死率極高的嚴重傳染病。目

7、前還沒有治愈的藥物和方法，但可預防。2)艾滋病病毒主要存在于感染者的血液、精液、陰道分泌物、乳汁等體液中，所以通過性接觸、血液和母嬰三種途徑傳播。絕大多數感染者要經過5-10年時間才發展成病人，一般在發病后的2-3年內死亡。3)與艾滋病人及艾滋病病毒感染者的日常生活和工作接觸（如握手、擁抱、共同進餐、共用工具、辦公用具等）不會感染艾滋病，艾滋病不會經馬桶圈、電話機、餐飲具、臥具、游泳池或公共浴室等公共設施傳播，也不會經咳嗽打噴嚏、蚊蟲呆咬等途徑途徑傳播。4)潔身自愛、遵守性道德是預防經性途徑傳染艾滋病的根本措施。5)正確使用避孕套不僅能避孕，還能減少感染艾滋病、性病的危險。6)及早治療并治愈性

8、病可減少感染艾滋病的危險。正規醫院能提供正規、保密的檢查、診斷、治療和咨詢服務，必要時可借助當地性病、艾滋病熱線進行咨詢。7)共用注射器吸毒是傳播艾滋病的重要途徑，因此要拒絕毒品，珍愛生命。8)避免不必要的輸血、注射、使用沒有嚴格消毒器具的不安全拔牙和美容等，使用經艾滋病病毒抗體檢測的血液和血液制品。9)關心、幫助和不歧視艾滋病人和艾滋病病毒感染者，他們是疾病的受害者，應該得到人道主義的同情和幫助。家庭和社會要為他們營造一個友善、理解、健康的生活和工作環境，鼓勵他們采取積極的生活態度，改變危險行為，配合治療，有利于提高他們的生命質量、延長生命，也有利于艾滋病的預防和維護社會安定。2.5.2診斷

9、依據2.5.2.1實驗室檢查：抗體確證陽性，CD4200/mm3，CD4/CD81。檢測HIV核酸及抗原可預測疾病進展及隨訪抗病毒治療的效果。2.5.2.2我國艾滋病病例診斷標準2.5.2.2.1HIV感染者：受檢血清初篩試驗陽性，確證試驗如蛋白印跡法陽性。檢測HIV核酸或抗原可預測疾病的進展和抗病毒藥物治療的效果。2.5.2.2.2確診病例：1）艾滋病病毒抗體陽性，又具有下述任何一項者，可為確診艾滋病病人。近期內（36個月）體重減輕10%以上，且持續發熱達38度1個月以上。近期內（36個月）體重減輕10%以上，且持續腹瀉（每日達35次）1個月以上。卡氏肺囊蟲性肺炎（PCP）。卡波濟肉瘤（Ka

10、posi）。明顯的霉菌或其它條件致病菌感染。2）若HIV抗體陽性者體重減輕、發熱、腹瀉癥狀接近上述第1項標準且具有以下任何一項時，可為確診艾滋病病人。CD4/CD8淋巴細胞計數比值1，CD4細胞計數下降。全身淋巴結腫大。明顯的中樞神經系統占位性病變的癥狀和體征、出現癡呆，辨別能力喪失、或運動神經功能障礙。2.5.3艾滋病治療針對HIV的治療研究亦經過了多個階段，80年代單一用藥劑量較大，曾出現細胞毒性副作用，易產生抗藥突變株而出現耐藥性。1994年蛋白酶抑制劑經過4-5年研究而逐步推向臨床，可以使HIV感染者體內病毒數量快速而持續下降。為此除了AZT（1987年開始的核苷類）可以單用于防止母嬰

11、傳播或在特殊情況下預防用藥外，只要是抗HIV臨床治療已不主張任何藥物的單獨使用，而是聯合使用包括三種藥物的雞尾酒療法。3擬從事實驗室活動的危險性分析及相應的預防措施3.1實驗室實驗活動背景資料本實驗室主要從事HIV病毒的血清學檢測：HIV抗體篩查實驗:酶標法(ELISA)、3.2可能危害在HIV實驗操作過程中，包括接收樣本時樣本包裝密封性不好造成樣本泄露；操作過程中如打開容器蓋時樣本外濺，加樣、孵育、震蕩、分離保存血清等時由于操作不慎導致樣本濺出、離心管破裂崩濺等。實驗室工作環境的污染，實驗人員如果接觸污染的實驗儀器表面、冰箱、加樣器、實驗臺、門把手及實驗廢棄物等均可能被感染。3.3預防及處置

12、措施3.3.1預防1)HIV抗體的檢測過程均應在生物安全防護級實驗室內進行。2)操作者在實驗全過程包括樣品接收，都應穿戴好一切生物安全防護裝備，一次性的口罩、帽子、雙層乳膠手套，防護衣、必要時配戴防護鏡等，操作全過程應嚴格執行實驗室的標準操作規程（SOP）。3)盡量避免在實驗室使用針頭、刀片、玻璃器皿等利器，以防刺傷。如果必須使用，在處理或清洗時應采取措施防止刺傷或劃傷，并應對用過的物品進行消毒處理。3.3.2處置措施1)所有的血液、血清、未固定的組織和組織液樣品，均應視為有潛在傳染性，都應以安全的方式進行操作。應按操作未知的有傳染風險樣品一樣，小心存放、拿取和使用所有可能有傳染性的質量控制和

13、參考物質，用后的包裹應進行消毒。2)接收樣本時，核對樣品與送檢單，檢查樣品管有無破損和溢漏，如發現溢漏應立即將尚存留的樣品移出，若樣本外漏到標本容器外面，應立即用浸有0.5%含氯消毒液的多重軟布及75%酒精擦拭標本容器，必要時通知重新采集標本。打開標本容器時要小心，以防內容物潑濺。廢棄的標本視為高危物質放置到高壓滅菌鍋內消毒，同時立即更換污染的手套，污染的手套也應放到高壓滅菌鍋內滅菌。3)在進行操作時，若發生液體外濺，應將被濺的地方用0.5%含氯消毒液浸泡的物質覆蓋，待消毒液起作用10-15分鐘后清理該地方，移走吸水性物質，并用75%酒精及清水多次擦拭該地方。所有實驗用品應按污染物質處理，放入

14、高壓滅菌鍋內滅菌。4)在離心過程中，若發生離心管破裂及樣本外濺，應立即停止離心，待離心機自動停止并發出提示信號5分鐘后，確保穿戴好一切防護用品后，方可打開離心機蓋，用止血鉗子夾出離心的碎片，被樣本污染的地方，防置浸泡有0.5%含氯消毒劑的吸水性物質，待消毒劑起作用后10-15分鐘再清理污染處，移走吸水性物質，并用75%酒精多次消毒污染處所有消毒處理用過的物品應按高危物質處理，放入高壓滅菌鍋內滅菌。5)如果在操作過程中將待檢測的血液、體液等樣本濺灑于皮膚粘膜表面時，應立即用自來水、清水或生理鹽水反復沖洗；如濺入眼睛、口腔等部位，應用用自來水、清水或生理鹽水長時間徹底沖洗（30分鐘）；如發生皮膚粘

15、膜針刺、切割傷、刮傷等出血性損傷，應立即擠出損傷局部的血液，然后用用自來水、清水或生理鹽水等徹底沖洗，再用碘伏消毒創面；如衣物被污染，應盡快脫掉被污染的衣物，進行消毒處理；如有高危的意外事故發生，除進行局部處理外，同時應立即采取預防措施，包括對其隨訪、HIV檢測、休息并暫時離開原崗位3個月，按醫囑服用抗HIV藥物進行預防。若一旦發生意外事故造成污染，應立即按實驗室突發事件處理預案和程序中處理辦法進行處理。4實驗室的安全操作和實驗室意外處理4.1實驗室的安全操作1)在安排工作人員的實驗室區域時，要根據其工作的種類和所涉及的生物試劑，對實驗室環境做好安全檢查。2)進入實驗室應穿隔離衣、戴手套，必要

16、時戴防護眼鏡，以防污染暴露的皮膚和衣物。不用戴手套的手觸摸暴露的皮膚、口唇、眼睛、耳朵和頭發等。3)如接觸物傳染性危險大，可戴雙層（兩付）手套以增加保護。操作時手套破損，應立即丟棄、洗手并戴上新手套。4)禁止采用口腔吸液管，必須使用移液器來操作實驗室的所有液體。5)操作中有標本、檢測試劑外濺時應及時消毒。對大量濺出的濃度高的傳染物在清潔之前應先用1%次氯酸鈉溶液浸泡，然后戴上手套擦凈。6)工作完畢，要對工作臺面消毒。工作臺面應當用0.1%0.2%次氯酸溶液消毒；用消毒液清洗后要干燥20min以上；7)工作完畢，脫去手套后洗手，再脫去工作衣，用肥皂和流動水洗手。8)血清及其它體液樣品均應嚴格按要

17、求保存，HIV抗體陽性樣品應做好標記單獨保存。9)避免利器的使用。4.2實驗室意外處理發生意外事故時，應立即進行緊急處理，并報告實驗室負責人。1)皮膚針刺傷或切割傷：立即用肥皂和大量流水沖洗，盡可能擠出損傷處的血液，用70%乙醇或其它消毒劑消毒傷口。2)皮膚污染：用水和肥皂沖洗污染部位，并用適當的消毒劑浸泡，如70%乙醇或其它皮膚消毒劑。3)粘膜污染：用大量流水或生理鹽水徹底沖洗污染部位。4)衣物污染：盡快脫掉污染的衣物，進行消毒處理。5)污染物潑濺：發生小范圍污染物潑濺事故時，應立即進行消毒處理。發生大范圍污染物潑濺事故時，應立即通知實驗室主管領導和安全負責人到達事故現場查清情況，確定消毒的

18、程序。6)低溫蒸汽甲醛氣體消毒。5工作人員的預防接種和工作人員素質5.1工作人員的預防疫苗5.1.1HIV病毒目前尚無有效疫苗預防其感染。雖然國內目前正在研制疫苗預防HIV感染，但何時應用于臨床尚不知曉。5.1.2進行HIV病毒相關操作的人員必須取得以下資格或處于以下工作狀態1）完成乙型肝炎病毒疫苗接種程序，并且進行抗體檢測。2）經過規范的生物安全培訓，并經過嚴格考核和取得上級主管部門人員許可；近期較深的開放性傷口的人員應該禁止或限制其進入相關實驗操作區。3）限制在妊娠早期的工作人員進行HIV病毒相關的感染性材料的操作。5.1.3根據實驗室從事HIV病毒需要，為實驗室人員建立健康檔案；新工作人

19、員進實驗室前必須進行本實驗室規定項目的體檢，并根據需要進行疫苗接種；每年最少一次為本實驗室職工提供相關項目體檢。主要體檢項目包括：血常規、肝炎五項、HIV抗體檢測、RPR、TPPA等。5.1.4實行健康監測報告，實驗室人員必須在身體狀況良好的情況下，才能進入實驗室工作。建立監測網，有關人員每天監察實驗人員健康狀況。如遇實驗室人員暴露情況出現，當時除按實驗室突發事件處理程序進行處理以外，還要在HIV-Ab的潛伏期內進行定期（1月、2月、3月、6月、12月）監測。5.1.5對所有從事HIV檢測的實驗室工作人員在進入實驗室前都要做健康體檢，保留血樣，定期體檢，采集的血清標本，留在健康檔案中備案。5.2工作人員素質實驗室共有技術人員2名，其中申請進入BSL-2實驗室2名。所有技術人員均參加過生物安全培訓，所有技術人員均學習過生物安全手冊并簽署知情同意書。熟知HIV-Ab初篩實驗SOP文件及流程，并簽署知情同意書。HIV初篩實驗室工作人員目前健康狀況良好。工作人員素質評價見附表。6評估結論6.1實驗活動的防護措施1)在操作HIV抗體初篩實驗過程中，可能發生皮膚、粘膜的接觸感染等實驗室意外感染。因此，對檢測HIV抗