1、 2 某些物質受到光照射，除吸收某種波長的光之外，發射出某些物質受到光照射，除吸收某種波長的光之外，發射出 比原來所吸收光的波長更長的光比原來所吸收光的波長更長的光光致發光光致發光（二級光）。（二級光）。 光致發光光致發光 熒光熒光 fluorescence 磷光磷光 phosphorescence 熒光分析法是根據物質的熒光分析法是根據物質的熒光譜線的位置熒光譜線的位置及其及其強度強度進進 行物質鑒定和含量測定的儀器方法。行物質鑒定和含量測定的儀器方法。 3 分子熒光分析的特點：分子熒光分析的特點： 靈敏度靈敏度高：高：一般紫外一可見分光光度法的檢出一般紫外一可見分光光度法的檢出 限約為限約

2、為10-7g/ml，而熒光分析法的檢出限可達到，而熒光分析法的檢出限可達到 10-10甚至甚至10-12 g/ml。 選擇性選擇性好好 線性范圍線性范圍寬寬 應用范圍應用范圍窄窄 4 1. 分子熒光的產生分子熒光的產生 一、分子熒光一、分子熒光 molecular fluorescence 分子能級比原子能級復雜分子能級比原子能級復雜 在分子體系中，每個電子能級上都存在振動、轉動能層在分子體系中，每個電子能級上都存在振動、轉動能層 室溫下大多數分子處于基態的最低振動能層室溫下大多數分子處于基態的最低振動能層 在基態時，含有偶數個電子的分子，電子的在基態時，含有偶數個電子的分子，電子的ms為為+

3、1/2和和- 1/2, s=0，M=1。則該分子所處的電子能態稱為。則該分子所處的電子能態稱為基態單重態基態單重態, 用符號用符號S0表示表示 5 分子吸收輻射后分子吸收輻射后 電子被激發且不發生自旋方向的改變電子被激發且不發生自旋方向的改變 ms為為+1/2和和-1/2, s=0，M=1。則該分子所處的電子能態稱為。則該分子所處的電子能態稱為 激發單重態激發單重態,用符號用符號S表示。表示。 （S1 S2 S3） 電子被激發且伴隨著自旋方向的改變電子被激發且伴隨著自旋方向的改變 ms為為+1/2和和+1/2, s=1，M=3。則該分子所處的電子能態稱為。則該分子所處的電子能態稱為 激發三重態

4、激發三重態,用符號用符號T表示。（表示。（T1 T2 T3） S0 6 小結：分子能級與躍遷小結：分子能級與躍遷 基態基態(S0)激發態：吸收特定頻率的輻射；量子化；躍遷激發態：吸收特定頻率的輻射；量子化；躍遷 一次到位；一次到位； 激發態激發態基態：多種途徑和方式基態：多種途徑和方式(見能級圖見能級圖)；速度最快、激；速度最快、激 發態壽命最短的途徑占優勢，發生的幾率大；發態壽命最短的途徑占優勢，發生的幾率大； 第一、第二、第一、第二、電子激發單重態電子激發單重態 S1 、S2 ； 第一、第二、第一、第二、電子激發三重態電子激發三重態 T1 、 T2 ； 電子能級的多重性電子能級的多重性 M

5、=2S+1 平行自旋比成對自旋穩定平行自旋比成對自旋穩定( (洪特規則洪特規則) )，三重態能級比相應，三重態能級比相應 單重態能級低；單重態能級低； 大多數有機分子的基態處于單重態；大多數有機分子的基態處于單重態； 7 S0S1、S2 允許躍遷；允許躍遷； S0T1、T2 禁阻躍遷；通過其他途徑進入禁阻躍遷；通過其他途徑進入 (見能級圖見能級圖)；進入的幾率小；進入的幾率小； 小結：激發單重態與激發三重態的不同小結：激發單重態與激發三重態的不同 激發單重態分子中沒有凈電子自旋，因而具有反磁性；激發單重態分子中沒有凈電子自旋，因而具有反磁性； 激發三重態有激發三重態有2個自旋平行電子，是順磁性

6、的個自旋平行電子，是順磁性的 激發單重態分子平均壽命短（激發單重態分子平均壽命短（10-810-6s），而激發三重態），而激發三重態 的長（的長（10-410s） 基態單重態到激發單重態的激發，不涉及電子自旋方向的基態單重態到激發單重態的激發，不涉及電子自旋方向的 改變而容易發生，屬于允許躍遷；而到激發三重態屬于禁阻改變而容易發生，屬于允許躍遷；而到激發三重態屬于禁阻 躍遷躍遷 S2 S1 S0 T1 吸吸 收收 發發 射射 熒熒 光光 發發 射射 磷磷 光光 系間跨越 內轉換 振動弛豫 能 量 l l 2l l 1 l l 4 外轉換 l l 3 3 T2 內轉換 振動弛豫 9 激發態激發態

7、基態的能量傳遞途徑基態的能量傳遞途徑 電子處于激發態是不穩定狀態，返回基態時，通過輻射電子處于激發態是不穩定狀態，返回基態時，通過輻射 躍遷躍遷( (發光發光) )和無輻射躍遷等方式失去能量；和無輻射躍遷等方式失去能量； 熒光延遲熒光磷光 輻射躍遷輻射躍遷無輻射躍遷無輻射躍遷 傳遞途徑傳遞途徑 內轉移外轉移系間跨越振動弛豫 熒光熒光：10-710-9s，第一激發第一激發單重態單重態的最低振動能級的最低振動能級基態基態 磷光磷光：10-410s； 第一激發第一激發三重態三重態的最低振動能級的最低振動能級基態基態 10 輻射和非輻射能量傳遞過程輻射和非輻射能量傳遞過程 振動弛豫振動弛豫：同一電子能

8、級中，以：同一電子能級中，以熱能量交換形式由高振動能熱能量交換形式由高振動能 層至低相鄰振動能層間的躍遷層至低相鄰振動能層間的躍遷。發生振動弛豫的時間。發生振動弛豫的時間1010-12 -12s s 內轉換：內轉換：相同多重態的電子能級間的相同多重態的電子能級間的等能級的無輻射躍遷等能級的無輻射躍遷。 通過內轉換和振動弛豫，高激發單重態的電子躍回第一激通過內轉換和振動弛豫，高激發單重態的電子躍回第一激 發單重態的最低振動能級。發生內轉換的時間發單重態的最低振動能級。發生內轉換的時間10-13s。 熒光發射：熒光發射：電子由電子由第一激發單重態的最低振動能層第一激發單重態的最低振動能層基態基態

9、( 熒光多為熒光多為 S1 S0躍遷躍遷)，發射波長為，發射波長為 l l3的熒光，的熒光，10-710-9s 。 發射熒光的能量比分子吸收的能量小，波長長：發射熒光的能量比分子吸收的能量小，波長長： l l3 l l 2 l l 1 ； 系間跨越：系間跨越：激發態的電子發生自旋反轉而使分子的多重性發激發態的電子發生自旋反轉而使分子的多重性發 生變化的生變化的非輻射躍遷非輻射躍遷。 禁阻躍遷，但當能層有較大重疊時禁阻躍遷，但當能層有較大重疊時S1T1 就可發生系間就可發生系間 跨越，通過自旋跨越，通過自旋軌道耦合進行。軌道耦合進行。 10-6s 外轉換：外轉換：激發態分子與溶劑或其他溶質分子之

10、間碰撞引起的激發態分子與溶劑或其他溶質分子之間碰撞引起的 轉移能量的轉移能量的非輻射躍遷非輻射躍遷。常發生在。常發生在S1或或 T1 S0 外轉換使熒光或磷光減弱或外轉換使熒光或磷光減弱或“猝滅猝滅”。 磷光發射：磷光發射：電子電子由第一激發三重態的最低振動能級由第一激發三重態的最低振動能級基態基態(T1 S0躍遷躍遷)；發光速度很；發光速度很慢慢： 10-4100s、磷光的、磷光的能量比熒光小能量比熒光小 電子由電子由S0進入進入T1的過程：（的過程：（ S0 T1禁阻躍遷）禁阻躍遷） S0激發激發振動弛豫振動弛豫內轉移內轉移系間跨越系間跨越振動弛豫振動弛豫 T1 光照停止后，可持續一段時間

11、光照停止后，可持續一段時間 12 2. 熒光的激發光譜與熒光光譜熒光的激發光譜與熒光光譜 excitation spectrum and fluorescence spectrum （1 1）熒光的激發光譜）熒光的激發光譜 激發光譜：激發光譜：表示表示不同激發波長不同激發波長 下所引起物質下所引起物質發射某一波長熒光發射某一波長熒光的的 相對效率。相對效率。 繪制激發光譜：繪制激發光譜：固定發射波長固定發射波長 ( (選最大發射波長選最大發射波長),),然后以不同波長的然后以不同波長的 入射光激發熒光物質，以入射光激發熒光物質，以熒光強度熒光強度F對對 激發波長激發波長l l作圖作圖，即為激發

12、光譜。，即為激發光譜。 熒光分子都具有兩個特征光譜：熒光分子都具有兩個特征光譜： 激發光譜激發光譜和和發射光譜（熒光光發射光譜（熒光光 譜）譜）。 激發光譜曲線的最高處，處于激發態的分子最多，熒光強激發光譜曲線的最高處，處于激發態的分子最多，熒光強 度最大，稱為度最大，稱為最大激發波長最大激發波長 l lex （2）熒光的發射光譜（熒光光譜）熒光的發射光譜（熒光光譜） 熒光光譜表示在所發射的熒光中各種波長組分的相對強熒光光譜表示在所發射的熒光中各種波長組分的相對強 度。繪制發射光譜時，度。繪制發射光譜時， 使激發光波長使激發光波長固定在固定在l lex處處，然后對發，然后對發 射光譜掃描，測定

13、各種波長下相應的熒光強度，射光譜掃描，測定各種波長下相應的熒光強度，以以熒光強度熒光強度 F 對發射波長對發射波長l l作圖作圖，得發射光譜圖（即熒光光譜）。，得發射光譜圖（即熒光光譜）。 發射光譜（熒光光譜）的位置？發射光譜（熒光光譜）的位置？ 磷光光譜的位置？磷光光譜的位置？ 200260320380440500560620 熒光激發光譜熒光激發光譜 熒光發射光譜熒光發射光譜磷光光譜磷光光譜 室溫下菲的乙醇溶液熒（磷）光光譜室溫下菲的乙醇溶液熒（磷）光光譜 15 激發光譜與發射光譜的關系激發光譜與發射光譜的關系 a. Stokes位移位移 熒光光譜總是位于物質激發光譜的長波一側，即熒光波熒

14、光光譜總是位于物質激發光譜的長波一側，即熒光波 長大于激發光波長的現象。長大于激發光波長的現象。 激發光譜與發射光譜之間的波長差值：激發光譜與發射光譜之間的波長差值： 振動弛豫、內轉換等物輻射躍遷損失了部分能量。振動弛豫、內轉換等物輻射躍遷損失了部分能量。 b. 熒光光譜的形狀與激發波長無關熒光光譜的形狀與激發波長無關 電子可以躍遷到不同激發態能級，吸收不同波長的能量電子可以躍遷到不同激發態能級，吸收不同波長的能量 (如能級圖如能級圖l l 2 、l l 1)，產生不同吸收帶，但熒光光譜卻只有一，產生不同吸收帶，但熒光光譜卻只有一 個發射態，如個發射態，如l l 3 。 為什么？為什么？ 16

15、 c. c. 鏡像規則鏡像規則 由于電子基態的振動能級分布與激發態相似，由于電子基態的振動能級分布與激發態相似，故通常故通常 熒光光譜與它的激發光譜成鏡像對稱關系。熒光光譜與它的激發光譜成鏡像對稱關系。 各小峰波長各小峰波長 遞減值與遞減值與振振 動能級差動能級差有有 關，各小峰關，各小峰 的高度與的高度與躍躍 遷幾率遷幾率有關。有關。 基態上的各振動能級分布與第一激發態上的各基態上的各振動能級分布與第一激發態上的各振動振動 能級分布類似能級分布類似； 基態上的某振動能級若躍遷到第一激發態的某振動能基態上的某振動能級若躍遷到第一激發態的某振動能 級的幾率較大的話，級的幾率較大的話，相反躍遷也如

16、此相反躍遷也如此。 18 二、熒光的產生與分子結構的關系二、熒光的產生與分子結構的關系 relation between fluorescence and molecular structure 1.分子產生熒光必須具備的條件分子產生熒光必須具備的條件 （1）具有合適的結構；）具有合適的結構； （2）具有一定的熒光量子產率。）具有一定的熒光量子產率。 熒光量子產率（熒光量子產率（ ）：）： 吸收的光量子數 發射的光量子數 物質的熒光量子產率范圍一般是多少? 如果一個分子將吸收的光子全部釋放，則其量子產率為如果一個分子將吸收的光子全部釋放，則其量子產率為100%100%。 19 2.有機化合物的

17、分子結構與熒光的關系有機化合物的分子結構與熒光的關系 （1）躍遷類型：* 的熒光效率高，系間跨越過程的速 率常數小，有利于熒光的產生； （2）共軛效應：提高共軛度有利于增加熒光效率并產生紅移 （4）取代基效應：芳環上 有供電子基，使熒光增強。 （3）剛性平面結構：可降低 分子振動，減少與溶劑的相 互作用，故具有很強的熒光 。如熒光素和酚酞有相似結 構，熒光素有很強的熒光， 酚酞卻沒有。 20 21 三、影響熒光強度的因素三、影響熒光強度的因素 relation between fluorescence and molecular structure 影響熒光強度的影響熒光強度的外部因素外部因素

18、 1.溶劑的影響溶劑的影響 同一物質在不同溶劑中，其熒光光譜的形狀和強度都有差別。同一物質在不同溶劑中，其熒光光譜的形狀和強度都有差別。 一般情況下，熒光波長隨著溶劑極性的增大而長移，熒光強度也有一般情況下，熒光波長隨著溶劑極性的增大而長移，熒光強度也有 所增強。這是因為在極性溶劑中，所增強。這是因為在極性溶劑中，*躍遷所需的能量差躍遷所需的能量差E小，小， 而且躍遷幾率增加，從而使紫外吸收波長和熒光波長均長移，強度而且躍遷幾率增加，從而使紫外吸收波長和熒光波長均長移，強度 也增強。也增強。 溶劑溶劑粘度粘度減小時，可以增加分子間碰撞機會，使無輻射躍遷增減小時，可以增加分子間碰撞機會，使無輻射

19、躍遷增 加而熒光減弱。故熒光強度隨溶劑粘度的減小而減弱。由于溫度對加而熒光減弱。故熒光強度隨溶劑粘度的減小而減弱。由于溫度對 溶劑的粘度有影響，一般是溫度上升，溶劑粘度變小，因此溫度上溶劑的粘度有影響，一般是溫度上升，溶劑粘度變小，因此溫度上 升，熒光強度下降。升，熒光強度下降。 22 2.溫度的影響溫度的影響 熒光強度對溫度變化敏感，溫度增加，分子運動速度加熒光強度對溫度變化敏感，溫度增加，分子運動速度加 快，分子間碰撞的幾率增加，外轉換去活的幾率增加，熒光快，分子間碰撞的幾率增加，外轉換去活的幾率增加，熒光 效率降低。例如熒光素鈉的乙醇溶液，在效率降低。例如熒光素鈉的乙醇溶液，在0以下，溫

20、度每降以下，溫度每降 低低10， f增加增加3，在，在 80時，時， f為為1。 23 當熒光物質本身是當熒光物質本身是弱酸或弱堿弱酸或弱堿時，溶液的時，溶液的pH值對該熒光物質的值對該熒光物質的 熒光強度有較大影響，這主要是因為在不同酸度中分子和離子間的熒光強度有較大影響，這主要是因為在不同酸度中分子和離子間的 平衡改變，離子結構發生變化，因此熒光強度也有差異。每一種熒平衡改變，離子結構發生變化，因此熒光強度也有差異。每一種熒 光物質都有它最適宜的發射熒光的存在形式，也就是有它最適宜的光物質都有它最適宜的發射熒光的存在形式，也就是有它最適宜的 pH值范圍。例如苯胺在不同值范圍。例如苯胺在不同

21、pH值下有下列平衡關系：值下有下列平衡關系： 苯胺在苯胺在pH712的溶液中主要以分子形式存在，由于的溶液中主要以分子形式存在，由于 NH2為為提高熒提高熒 光效率光效率的取代基，故苯胺分子會發生藍色熒光。但在的取代基，故苯胺分子會發生藍色熒光。但在pH2和和pH 13的溶液中均以苯胺離子形式存在，故不能發射熒光。的溶液中均以苯胺離子形式存在，故不能發射熒光。 3. 溶液溶液pH 對酸堿化合物，溶液對酸堿化合物，溶液pH的影響較大，需要嚴格控制；的影響較大，需要嚴格控制； 24 4.內濾光作用和自吸現象內濾光作用和自吸現象 自吸現象自吸現象：化合物的熒光發射光譜的短波長端與其吸收：化合物的熒光

22、發射光譜的短波長端與其吸收 光譜的長波長端重疊，產生自吸收；如蒽化合物。光譜的長波長端重疊，產生自吸收；如蒽化合物。 內濾光作用內濾光作用：溶液中含有能吸收激發光或熒光物質發：溶液中含有能吸收激發光或熒光物質發 射的熒光，如色胺酸中的重鉻酸鉀；射的熒光，如色胺酸中的重鉻酸鉀； 25 5.熒光熄滅劑熒光熄滅劑 熒光熄滅是指熒光物質分子與溶劑分子或溶質分子相互熒光熄滅是指熒光物質分子與溶劑分子或溶質分子相互 作用引起熒光強度降低的現象。引起熒光熄滅的物質稱為作用引起熒光強度降低的現象。引起熒光熄滅的物質稱為 熒光熄滅劑熒光熄滅劑(quenching medium)。如。如鹵素離子鹵素離子、重金屬離

23、子重金屬離子 、氧分子氧分子以及以及硝基化合物硝基化合物、重氮化合物重氮化合物、羰基羰基和和羧基化合羧基化合 物物均為常見的熒光熄滅劑。均為常見的熒光熄滅劑。 26 6、散射光、散射光 小部分光子和物質分子相碰撞，使光子的運動方向發生小部分光子和物質分子相碰撞，使光子的運動方向發生 改變而向不同角度散射。改變而向不同角度散射。 瑞利光：瑞利光：光子和物質發生彈性碰撞，不發生能量交換，只光子和物質發生彈性碰撞，不發生能量交換，只 是光子運動方向發生改變。其波長與入射光波長相同。是光子運動方向發生改變。其波長與入射光波長相同。 拉曼光：拉曼光：光子和物質發生彈性碰撞，發生能量交換，光子把光子和物質

24、發生彈性碰撞，發生能量交換，光子把 部分能量轉移給物質分子或從物質分子獲得部分能量。從而部分能量轉移給物質分子或從物質分子獲得部分能量。從而 發射出比入射光稍長或稍短的光。發射出比入射光稍長或稍短的光。 散射光對熒光測定有干擾，散射光對熒光測定有干擾，尤其是波長比入射光波長更長尤其是波長比入射光波長更長 的拉曼光的拉曼光，與熒光波長接近，對測定的干擾大，必須采取，與熒光波長接近，對測定的干擾大，必須采取 措施消除。措施消除。拉曼光的干擾主要來自溶劑，當溶劑的拉曼光拉曼光的干擾主要來自溶劑，當溶劑的拉曼光 與被測物質的熒光光譜相重疊時，應更換溶劑或改變激發與被測物質的熒光光譜相重疊時，應更換溶劑

25、或改變激發 光波長光波長 27 選擇適當的激發波長可消除拉曼光的干擾選擇適當的激發波長可消除拉曼光的干擾 a:320nm或350nm為激發光， 熒光峰總是在448nm。 b:將 空白溶劑分別在320nm及 350nm激發光照射下測定熒 光，激發光波長為320nm時， 拉曼光波長是360nm， 360nm的拉曼光對熒光無影 響；當激發光波長為350nm 時，拉曼光波長是400nm， 400nm的拉曼光對熒光有干 擾，因而影響測定結果。 硫酸奎寧在不同波長激發下的熒光與散射光譜硫酸奎寧在不同波長激發下的熒光與散射光譜 28 四、熒光試劑四、熒光試劑 熒光試劑熒光試劑是一種可以使非熒光物質或弱熒光物

26、質與其反是一種可以使非熒光物質或弱熒光物質與其反 應之后，得到強熒光性產物的標記物，從而可擴大熒光分析應之后，得到強熒光性產物的標記物，從而可擴大熒光分析 法的使用范圍法的使用范圍 1.1.有機化合物的熒光分析有機化合物的熒光分析 脂肪族化合物能產生熒光的為數不多。芳香族及具有芳香脂肪族化合物能產生熒光的為數不多。芳香族及具有芳香 結構的化合物，因存在共軛體系而容易吸收光能，在紫外光照結構的化合物，因存在共軛體系而容易吸收光能，在紫外光照 射下很多能發射熒光。有時為了提高測定的靈敏度和選擇性，射下很多能發射熒光。有時為了提高測定的靈敏度和選擇性， 常使弱熒光性物質與某些熒光試劑作用，以得到強熒

27、光性產物常使弱熒光性物質與某些熒光試劑作用，以得到強熒光性產物 ( (衍生化衍生化) )。因此，熒光分析法在有機物測定方面的應用很廣。因此，熒光分析法在有機物測定方面的應用很廣。 29 能用熒光分析法測定的有機物包括多環胺類、萘酚類、嘌啉類、能用熒光分析法測定的有機物包括多環胺類、萘酚類、嘌啉類、 吲哚類、多環芳烴類、具有芳環或芳雜環結構的吲哚類、多環芳烴類、具有芳環或芳雜環結構的氨基酸類及蛋白質氨基酸類及蛋白質 等；藥物中的生物堿類如麥角堿、蛇根堿、麻黃堿、嗎啡、喹啉類等；藥物中的生物堿類如麥角堿、蛇根堿、麻黃堿、嗎啡、喹啉類 及異喹啉類生物堿等；及異喹啉類生物堿等；甾體類如皮質激素及雌醇等

28、甾體類如皮質激素及雌醇等；抗生素類如青抗生素類如青 霉素、四環素等霉素、四環素等；維生素類如維生素維生素類如維生素A、B1、B2、B6、B12、E、抗、抗 壞血酸、葉酸及煙酰胺等壞血酸、葉酸及煙酰胺等。此外，。此外，中草藥中的許多有效成分中草藥中的許多有效成分，不少，不少 是屬于芳香性結構的大分子雜環類，都能產生熒光，可用熒光分析是屬于芳香性結構的大分子雜環類，都能產生熒光，可用熒光分析 法作初步鑒別及含量測定。熒光分析法的靈敏度高，選擇性較好，法作初步鑒別及含量測定。熒光分析法的靈敏度高，選擇性較好， 取樣量少，方法快速，已成為醫藥學、生物學、農業和工業等領域取樣量少，方法快速，已成為醫藥學

29、、生物學、農業和工業等領域 進行科學研究工作的重要手段之一。以下是幾個重要的熒光試劑：進行科學研究工作的重要手段之一。以下是幾個重要的熒光試劑： 1熒光胺熒光胺(fluorescamine)：能與脂肪族或芳香族伯胺類形成高度熒能與脂肪族或芳香族伯胺類形成高度熒 光衍生物，典型反應如下：光衍生物，典型反應如下： 熒光胺及其水解產物不顯熒光。熒光胺及其水解產物不顯熒光。100mg熒光胺溶于熒光胺溶于100ml無無 水丙酮中，放置水丙酮中，放置24小時后即可使用。取相當于小時后即可使用。取相當于10mg藥物的甲醇或藥物的甲醇或 水溶液水溶液0.lml，加適宜，加適宜pH值的磷酸緩沖溶液值的磷酸緩沖溶

30、液5ml，加熒光胺試劑，加熒光胺試劑0.lml， 混合，放置混合，放置15分鐘后測定熒光強度。熒光條件為：分鐘后測定熒光強度。熒光條件為：ex=275、 390nm，em=480nm。 31 2鄰苯二甲醛鄰苯二甲醛(OPA) 在在2 巰基乙醇存在下，巰基乙醇存在下，pH910的緩沖溶液中的緩沖溶液中OPA能能 與伯胺類、特別是除半胱氨酸、脯氨酸及羥脯氨酸外的與伯胺類、特別是除半胱氨酸、脯氨酸及羥脯氨酸外的a 氨基酸生成靈敏的熒光產物。取氨基酸生成靈敏的熒光產物。取OPA 500mg溶于溶于10ml乙醇乙醇 中，加中，加200ml 2 巰基乙醇，將此混合液加至巰基乙醇，將此混合液加至1L 3的硼

31、酸的硼酸 溶液中，再用溶液中，再用KOH調節至調節至pH10，即為常用試劑溶液。熒，即為常用試劑溶液。熒 光條件為：光條件為：ex=340nm，em=455nm。 32 31 二甲氨基二甲氨基 5 氯化磺酰萘氯化磺酰萘(Dansyl-Cl，丹酰氯，丹酰氯) 能與伯胺、仲胺及酚基的生物堿類反應生成熒光性產物。能與伯胺、仲胺及酚基的生物堿類反應生成熒光性產物。 取取50mg或或100mg試劑，溶解于試劑，溶解于500ml無水丙酮中即可使用。無水丙酮中即可使用。 與丹酰氯類似的一個試劑是丹酰肼與丹酰氯類似的一個試劑是丹酰肼(DansylNHNH2)，它能，它能 與可的松的羰基縮合，產生強烈熒光。熒光

32、條件為：與可的松的羰基縮合，產生強烈熒光。熒光條件為： ex=365nm，em=500nm左右。左右。 丹酰氯試劑不穩定，其水解產物丹酰氯試劑不穩定，其水解產物Dansyl OH呈藍色熒光呈藍色熒光 ，必須，必須暗處保存暗處保存，每周重，每周重新配新配制。制。 33 2.2.生物與有機化合物的分析生物與有機化合物的分析 34 無機離子一般不顯熒光，與有機試劑形成有熒光的配無機離子一般不顯熒光，與有機試劑形成有熒光的配 合物后，可測量約合物后，可測量約6060種元素及離子種元素及離子 鈹、鋁、硼、鎵、硒、鎂、稀土鈹、鋁、硼、鎵、硒、鎂、稀土采用熒光分析法采用熒光分析法 氟、硫、鐵、銀、鈷、鎳氟、

33、硫、鐵、銀、鈷、鎳采用熒光熄滅法測定采用熒光熄滅法測定 銅、鐵、鈷、鋨及過氧化氫銅、鐵、鈷、鋨及過氧化氫采用催化熒光法測定采用催化熒光法測定 鉻、鈮、鈾、碲鉻、鈮、鈾、碲采用低溫熒光法測定采用低溫熒光法測定 鈰、銪、銻、釩、鈾鈰、銪、銻、釩、鈾采用固體熒光法測定采用固體熒光法測定 2.無機化合物的分析無機化合物的分析 35 第二節第二節 熒光定量分析方法熒光定量分析方法 一、熒光強度與物質濃度的關系一、熒光強度與物質濃度的關系 當一束強度為當一束強度為I0的紫外的紫外/可見光照射一濃度為可見光照射一濃度為c、液層厚液層厚 度為度為d的液槽時，可在溶液的的液槽時，可在溶液的各個方向各個方向觀察到熒光，其觀察到熒光，其 由于能產生熒光的物質占被分析物的數量相當有限，由于能產生熒光的物質占被分析物的數量相當有限， 且就這少量的熒光物質幾乎在同一波長段產生光致發光，且就這少量的熒光物質幾乎在同一波長段產生光致發光， 所以熒光法所以熒光法很少用來定性分析很少用來定性分析 吸收光強度為吸收光強度為Ia 透過光強度為透過光強度為It 熒光強度為熒光強度為F I0 It Ia F垂直