1、實(shí)時熒光定量 檢測鼻咽癌骨轉(zhuǎn)移相關(guān)基因表達(dá)的研究 (一) 作者：翟曉曉，劉騰飛，姚開泰【摘要】目的研究 CXCR、4 CTGF、MST1R、種基因在鼻咽癌細(xì)胞 與骨共培養(yǎng)前后的表達(dá)情況，分析這些基 因在鼻咽癌骨轉(zhuǎn)移中的作用。方法采用基于 SYBRGREEN法的實(shí)時熒 光定量 檢測 細(xì)胞與骨共培養(yǎng)前后骨轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的表 達(dá)情況。結(jié)果 細(xì)胞與骨共培養(yǎng)后 CXCR、4 CTGF、MST1R、 的表達(dá)水平較共培養(yǎng)前差異有顯著性 (P0.05)，均表達(dá)上調(diào)；、則差異無顯著性。結(jié)論實(shí)時熒光定量能夠敏感、特異地檢測出鼻咽癌細(xì)胞在與骨組織共培養(yǎng)前后的 mRNA 的表達(dá)變化，方 法準(zhǔn)確可靠，操作方便； CXCR

2、、4 CTGF、MST1R、 有可能成為判 斷鼻咽癌骨轉(zhuǎn)移的潛在標(biāo)志物?！娟P(guān)鍵詞】實(shí)時熒光定量 ；骨轉(zhuǎn)移相關(guān)基因；鼻咽癌 Abstract:ObjebonetissueandanalyzetherelationshipbetweenrelatedmRNAexpressionleve lsandthebonemetastasisofNPC.MethodsThemRNAexpressionsofsixgenesin ignificantdifference.ConclusionCXCR4,CTGF,MST1R,andEastasisinNPC.;nasopharyngealcarcinoma 骨轉(zhuǎn)

3、移是晚期惡性腫瘤的常見并發(fā)癥，近年來逐漸成為腫瘤轉(zhuǎn)移機(jī)制 研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)之一，在骨轉(zhuǎn)移的發(fā)生過程中，由于骨組織微環(huán)境與 腫瘤細(xì)胞的相互作用， 使得腫瘤細(xì)胞具有特定的基因型。 研究發(fā)現(xiàn)1： 趨化因子受體 4(chemokinereceptor4 ，CXCR)4、結(jié)締組織生長因子 (connectivetissuegrowthfactor,CTGF) 、 基 質(zhì) 金 屬 蛋 白 酶、白細(xì)胞介素( )是乳腺癌骨轉(zhuǎn)移的標(biāo)簽基因；巨噬細(xì)胞刺激蛋白受 體( macrophagestimulating1receptor,MST1R在) 乳腺癌骨轉(zhuǎn)移中發(fā)揮作 用 2;而則在前列腺癌的骨轉(zhuǎn)移中表達(dá)增高3。鼻咽癌

4、作為我國南方常見的上皮性惡性腫瘤， 遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移以骨最為常見，本 研 究 選 取 較 常 規(guī)更 好 的 實(shí) 時 熒 光 定 量(realtimefluorescencequantitativePCR，)技術(shù)對目的基因在鼻咽癌細(xì)胞株與骨共培養(yǎng)前后的表達(dá)情況進(jìn)行研究，以探討上述 6 個基 因在鼻咽癌骨轉(zhuǎn)移中的作用。1 材料與方法1.1 細(xì)胞鼻咽癌細(xì)胞株 為本實(shí)驗室凍存，低分化人鼻咽癌細(xì)胞株，細(xì)胞 均呈上皮樣，貼壁生長，生長培基為含有 10（ 新）生牛血清的 。1.2 實(shí)驗動物6 8 周 齡 BALB/c 裸 鼠 ， SPF 級 ， 合 格 證 號 ： SCXK（ 粵 ） 2006-00152006B0

5、232006A048，體質(zhì)量 16 20g，雌雄不限，購自南方 醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗動物中心。1.3 主要試劑和儀器BGJb培養(yǎng)基購自 Invitrogen 公司，購自 Hyclone 公司，胎牛血清購自杭州四季青， Trizol試劑購自 Invitrogen 公司，Stratagene公 司的 Mx3000PRealTimePCR擴(kuò)增儀，試劑盒以及SYBRPremixExTaqTM試劑盒購自 Takara。1.4 共培養(yǎng)實(shí)驗 從裸鼠取前肢骨和后肢骨（包括大腿骨、脛骨、肱骨和橈骨） ，去除骨 周圍的肌肉，沿長軸切開骨干，使骨髓腔暴露，切成 0.8cm 長的骨塊 置于含有抗生素的 BGJb培養(yǎng)基中， 37平衡 24h 后，將 35 塊