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文檔簡介
武昌理工學院本科畢業設計(論文)題目四氧嘧啶對糖尿病小鼠造模穩定性研究學院生命科學學院專業生物工程武昌理工學院畢業設計(論文)1目錄摘要2ABSTRACT3綜述4前言51實驗材料611實驗動物612實驗藥品613實驗試劑614實驗器材62實驗方法621實驗藥品的配制622動物小鼠實驗分組723滅菌724給藥造模72血糖測定726穩定性觀察73實驗結果與分析731造模成功率732穩定性觀察8321體重變化8322血糖值變化933小鼠血糖變化曲線94分析與討論1241結果分析1242討論1243展望12劉會淼四氧嘧啶造小鼠糖尿病穩定性的研究2參考文獻14致謝16附錄17四氧嘧啶對糖尿病小鼠造模穩定性研究摘要本文研究四氧嘧啶造糖尿病小鼠模型的穩定性,用不同劑量的四氧嘧啶給藥。探究四氧嘧啶糖尿病小鼠模型的維持時間長短。一定劑量的四氧嘧啶溶液,使小鼠血糖增高,成為糖尿病模型鼠,觀察其血糖和體重數值在一段時間的變化。結果顯示,小鼠高血糖的維持時間與四氧嘧啶濃度有一定的關系。四氧嘧啶的劑量對糖尿病小鼠模型穩定性有很大影響,要保證四氧嘧啶的劑量,才能使糖尿病小鼠的高血糖維持穩定性。關鍵詞四氧嘧啶糖尿病小鼠模型血糖武昌理工學院畢業設計(論文)3ABSTRACTTHISPAPERWASTOSTUDYTHESTABILITYOFDIABETESMICEMODELINDUCEDBYALLOXANINJECTEDDIFFERENTDOSESOFALLOXANTHROUGHTHETAILINTRAVENOUSONMICE,THEMAINTAINTIMEOFHIGHBLOODGLUCOSELEVELWASMEASUREDANDTHETHEBLOODGLUCOSEANDWEIGHTCHANGEWEREOBSERVEDTOJUDGETHESTABILITYOFDIABETESMICEMODELTHERESULTSSHOWEDTHATTHEMAINTAINTIMEHASRELATIONSHIPWITHTHECONCENTRATIONOFTHEALLOXANCONCENTRATIONANDDOSESOFTHEALLOXANHASGREATINFLUENCEONTHESTABILITYOFDIABETESMICEMODELONLYENSURETHECONCENTRATIONANDDOSESOFALLOXAN,THEDIABETESMICEMODELWASSTABILITYKEYWORDSALLOXANDIABETESMICEMODELBLOODGLUCOSE劉會淼四氧嘧啶造小鼠糖尿病穩定性的研究4綜述四氧嘧啶1中文別名2,4,5,6嘧啶四酮,英文ALLOXAN,是嘧啶類的一種含氧衍生物,在水溶液中以水合物形式存在。分子式是C4H2N2O4,分子量14207;物理性質熔點255,相對密度1681G/CM;化學性質對胰臟的蘭氏島(胰島)的細胞具有比較特殊的破壞作用。它能終止胰島素的分泌,從而引起動物四氧嘧啶糖尿病。四氧嘧啶是一種實驗室小鼠糖尿病造模十分常用的藥物,也是最早被命名的有機化合物之一。最早有意大利化學家LUIGIVBRUGNATELLI于1818年分離出來。因為去世,并沒有進一步對其進行研究。最后在1838年德國化學家維勒和李比希重新發現,并將它命名為ALLOXAN。近年以來,糖尿病患者日益增多,由于糖尿病已經嚴重威脅人類的身心健康2,12,許許多多的預防糖尿病,降低血糖的保健藥品和食品紛紛問世。因此,目前,最迫切的需要去建立一套完整的合理且經濟的動物實驗評估體系。但要想建立這一體系,必須先建立一套完整科學的動物模型3,它直接影響結果的準確性和可靠性。鏈脲佐菌素4是目前非常常用的糖尿病造模藥物,但是,鏈脲佐菌素價格昂貴且造模成功率較低。因此本文采用四氧嘧啶作為糖尿病造模的藥物。由于大鼠體重大5,個體差異明顯,對于注射四氧嘧啶劑量、次數6,7,11,都有一定影響,而小鼠相比較來說,使用方便很多,常被用作動物造模8。本文主要目的是探究四氧嘧啶對小鼠糖尿病模型的穩武昌理工學院畢業設計(論文)5定性維持。前言四氧嘧啶是一種胰島B細胞破壞劑9,通過產生一些超氧自由基來破壞B細胞,損傷B細胞的DNA。不僅如此,還能間接使輔酶I減少,導致MRNA功能受到損傷,因此整個翻譯過程中產生的胰島素也相應減少,最終導致胰島素太低,動物產生高血糖。四氧嘧啶能對動物實驗造成糖尿病,但是一直對糖尿病的穩定性研究不夠清楚。本文試圖利用最佳劑量10四氧嘧啶對小鼠的造模實驗,來探究四氧嘧啶對糖尿病模型穩定性,從而為后續的實驗提供一些理論上的數據幫助和支持。劉會淼四氧嘧啶造小鼠糖尿病穩定性的研究61實驗材料11實驗動物KM種小鼠50只,SPF級,雌雄各半,體重155G,購買自湖北省病疫預防控制中心12實驗藥品四氧嘧啶ALLOXAN,美國SIGMA公司,生產批號05758氯化鈉(NACL),廣東大冢制藥有限公司生產批號071118血糖試紙,三諾生物傳感股份有限公司,生產批號2318NM13實驗試劑生理鹽水四氧嘧啶溶液苦味酸溶液14實驗器材電子天平,型號MB10KPW,上海海康電子儀器廠生產;精密電子天平,型號J腳SHP07003,上海恒平科學儀器有限公司生產;超凈工作臺,型號KSYLB26,北京中西泰安技術服務有限公司生產電熱爐,宜興市萬石電爐廠有限公司血糖儀,安穩血糖儀,三諾生物傳感股份有限公司灌胃針,注射器,小鼠籠,燒杯(100ML1000ML),剪刀,解剖刀,棉簽,武昌理工學院畢業設計(論文)7涼開水,試管等。2實驗方法21實驗藥品配制四氧嘧啶溶液的配制配制100MG/KG和50MG/KG的四氧嘧啶溶液。生理鹽水精密稱取54G氯化鈉固體顆粒,溶于500ML蒸餾水中,配置成生理鹽水溶液。苦味酸溶液用藥匙加入苦味酸粉末05G,溶于蒸餾水中,配制成苦味酸溶液。(由于苦味酸只適用于標記小鼠,因此濃度不需要那么精細)22動物小鼠實驗分組先將購買的50只小鼠分組,用5個鼠籠飼養,每個鼠籠10只小鼠。每只小鼠都做稱重記錄,并用苦味酸做好標記。23滅菌整個實驗期間,嚴格按照微生物實驗的方法,對小鼠的鼠糧,水分,墊料,鼠籠進行紫外滅菌,整個過程都必須在超凈工作臺上進行。24給藥造模按照事先分好的實驗組別,50只小鼠先禁食不禁水12H后,尾靜脈注高劑量(100MG/KG)四氧嘧啶溶液,每只小鼠的注射量為04ML/100G。給藥結束后,添加飼料,8小時后再禁食不禁水12小時,以同樣的方法尾靜脈注射低劑量(50MG/KG)四氧嘧啶溶液。25血糖測定以血糖值以10MMOL/L為造模成功,選擇成功的小鼠繼續實驗。26穩定性觀察對造模成功的小鼠連續觀察5D,記錄其體重和血糖值的變化。3實驗結果與分析劉會淼四氧嘧啶造小鼠糖尿病穩定性的研究831造模成功率經過2次給藥后的小鼠,進行血糖值檢測,成功率為60,見表1表1四氧嘧啶造模成功率與死亡率小鼠總數糖尿病小鼠數量死亡數量成功率死亡率50只30只0只60032穩定性觀察321體重變化造模成功小鼠有30只,在此分為A、B、C、D、E5組,每組6只小鼠。表1糖尿病小鼠的體重變化編號與體重值(G)第1天第2天第3天第4天第5天A1248228244239236A2226189213195186A3279241256237249A4215228204195173A5248216225235228(A)A6304285287259251B1253224219237223B2229193176196218B3259240221208213B4216201189193190B5284267259237240BB6249223216231218C1273252248264246C2256243219204191C3218206193214209C4207189184196190C5250238217231219CC6243248213195200(D)D1238245251248249武昌理工學院畢業設計(論文)9D2252265260259271D3241227193186190D4278251237215209D5273254217221208D6250218203226231E1194201197210204E2213198202230218E3186192189207195E4231219205212226E5205210198204216(E)E6248240236227235從表1中可以看出來,連續5天,小鼠的體重值都處在正常范圍內。且在實驗過程中,發現小鼠的飲食飲水量,均高于正常小鼠,但是活躍程度不高,且墊料較濕證明小鼠仍然保持在高血糖中,沒有顯著恢復正常血糖值。322血糖值變化表2糖尿病小鼠的血糖值時間(D)12345A組小鼠平均血糖值(MMOL/L)185191186188195B組小鼠平均血糖值(MMOL/L)183192199194195C組小鼠平均血糖值(MMOL/L)197214210213211D組小鼠平均血糖值(MMOL/L)164185180162173劉會淼四氧嘧啶造小鼠糖尿病穩定性的研究10E組小鼠平均血糖值(MMOL/L)171193165188198由于小鼠數量較多,如果直接將30只小鼠血糖全部按照記錄下來的作表,不僅不美觀,而且不夠清晰明了。以上是30只小鼠分為5組之后,每組小鼠的平均血糖值。33小鼠血糖變化曲線182184186188191921941960123456時間(天)血糖值(MMOL/L)圖1A組小鼠平均血糖值隨時間變化曲線從圖1中可以看出,隨著時間的變化,小鼠血糖值有所變化,但是基本穩定保持在1905MMOL/L左右。182184186188191921941960123456時間(天)血糖值(MMOL/L)圖2B組小鼠平均血糖值隨時間變化曲線從圖2中可以看出,隨著時間變化,小鼠血糖有所升高,但上升幅度不大,血糖值基本保持在18505MMOL/L左右。武昌理工學院畢業設計(論文)1119619820202204206208212122142160123456時間(天)血糖值MMOL/L圖3C組小鼠平均血糖值隨時間變化曲線從圖3中可以看出來,注射四氧嘧啶不久,小鼠血糖值持續上升。隨著時間變化,C組小鼠血糖開始保持較小變化,血糖值基本穩定在20505MMOL/L左右。161651717518185190123456時間(天)血糖值(MMOL/L)圖4D組小鼠平均血糖值隨時間變化曲線從圖4中可以看出,隨時間變化,小鼠血糖值變化波動較大,但其平均值能保持在1751左右。劉會淼四氧嘧啶造小鼠糖尿病穩定性的研究1205101520250123456時間(天)血糖值(MMOL/L)圖5E組小鼠平均血糖值隨時間變化曲線從圖5中可以看出,從開始測血糖,到第5天測血糖,小鼠血糖值基本沒發生什么變化,血糖值一直穩定保持在1851左右。4分析與討論41結果分析從圖1圖5中,可以看出來,2次注射四氧嘧啶可以使小鼠高血糖。從第一天到第五天,小鼠血糖值基本不會發生太大變化,5組小鼠的平均血糖值為188MMOL/L。實驗結果證明第一次給小鼠注射100MG/KG的四氧嘧啶溶液后,再次注射50MG/KG的四氧嘧啶溶液能使小鼠患糖尿病,且小鼠血糖值保持在高水平范圍,沒有顯著恢復正常值,說明這種四氧嘧啶造模實驗方法是非常穩定的。42討論本實驗研究的是四氧嘧啶造小鼠糖尿病穩定性,四氧嘧啶能夠破壞小鼠胰島B細胞,導致胰島素產生降低,以致小鼠高血糖。糖尿病是目前老年人群體中非常常見的一種疾病。要治療這種疾病,首先就要針對其作出一套動物實驗方案,為此就要用降糖藥來治療小鼠糖尿病。因此,下一步的目標就是用這來進行降糖實驗,從而為人類糖尿病的治療提供一些理論上的數據支持。43展望武昌理工學院畢業設計(論文)13四氧嘧啶能夠造成小鼠糖尿病,并且高濃度的小鼠能夠穩定的維持小鼠糖尿病。不禁讓人聯想到,如果四氧嘧啶換成是葡萄糖,直接給小鼠注射葡萄糖,會不會也導致小鼠糖尿病。此外,一旦葡萄糖真的能代替四氧嘧啶造成小鼠糖尿病,葡萄糖的來源豐富,價格成本相對偏低,應該會有很大的可能性被用來作為小鼠造模的試劑。劉會淼四氧嘧啶造小鼠糖尿病穩定性的研究14參考文獻【1MIR,SDARZIMMHISTOPATHOLOGICALABNORMALITIESOFPROLONGEDALLOXANINDUCEDDIABETESMELLITUSINRABBITS期刊INTERNATIONALJOURNALOFEXPERIMENTALPATHOLOGY,2009,90,(1)【2】程樺內分泌代謝系統疾病北京科學技術出版社,200,235【3】周敏柴可夫實驗性2型糖屎病動物模型研究及其進展期刊論文浙江中醫學院學報200205【4】嵇揚,張癸榮,王文俊,建立四氧嘧啶糖尿病模型的研究,10095276200307112502【5】艾靜,郭健,張永春,劉欣,何樹莊,楊寶峰,四氧嘧啶致大鼠高血糖模型的實驗研究,10001905(2001)02009403【6】張均田現代藥理實驗方法M北京醫科大學中國協和醫科大學聯合出版社,1998982【7】邱敏錢麗娜鄔國棟楊玉梅,四氧嘧啶劑量、給藥途徑、給藥次數與小鼠體重對制作小鼠糖尿病模型的影響期刊論文中國醫師雜志2009,1111【8】現代醫學實驗動物學M北京,人民軍醫出版社,2000,482【9】王曉穎段有金,四氧嘧啶實驗性糖尿病大鼠模型的復制及其發病機制的探討,2002(07)【10】成雪,王意忠,四氧嘧啶制備犬糖尿病模型的最佳劑量探討,2014,54(6)武昌理工學院畢業設計(論文)15【11】何學令,尹海林,四氧嘧啶劑量和給藥途徑對制作大鼠糖尿病模型的影響,2003,22(4)【12】毛培江,楊明華,金祖漢,金捷,楊蘇蓓,柴可夫,四氧嘧啶致大鼠糖尿病的比較,2007,21(5)【13】GADSBYR,EPIDEMIOLOGYOFDIABETES期刊ADVANCEDDRUGDELIVERYREVIEWS,2002,549【14】陳紅艷,楊新波,王建華,盧立君,曹文斌,黃正明,四氧嘧啶糖尿病小鼠模型的制備及影響因素,2005,29(6)【15】黃敏,王書奎,王小峰,戴德哉,王自正,不同禁食時間對四氧嘧啶糖尿病小鼠模型的血清胰島素何血糖的影響,中國藥科大學學報,2001,32(3)【16】楊海山,柳林,張昱,鏈脲佐菌素與四氧嘧啶誘導建立兔I型糖尿病模型的比較,中國實驗診斷學,2008,12(4)【17】陳建國,梅松,付穎,胡欣,王茵,四氧嘧啶致小鼠高血糖模型的研究,衛生毒理學雜志,2004,18(2)劉會淼四氧嘧啶造小鼠糖尿病穩定性的研究16致謝在論文即將完成之際,喜悅與激動充盈我心頭,但最多的是感謝。在這里,對這大學四年來關心過我,幫助過我的大學老師,同學,以及最親的家人致以誠摯的謝意
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