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CASME

中國中小商業企業協會團體標準

T/CASMEXXXX—2023

化妝品保濕功效的測定魚胚法

CosmeticsDeterminationofmoisturizingeffectFishembryomethod

（征求意見稿）

在提交反饋意見時，請將您知道的相關專利連同支持性文件一并附上。

2023-XX-XX發布202X-XX-XX實施

中國中小商業企業協會??發布

T/CASMEXXXX—2023

化妝品保濕功效的測定魚胚法

1范圍

本文件規定了化妝品保濕功效的測定魚胚法的術語和定義、縮略語、試驗材料、測定操作、計算

結果、判定依據。

本文件適用于化妝品的保濕功效測定評價。

2規范性引用文件

下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

化妝品安全技術規范（2015版）

3術語和定義

本文件沒有需要界定的術語和定義。

4縮略語

下列縮略語適用于本文件

hpf：受精后小時（hourpostfertilization）

5測定材料

測定用魚

本次測試所用斑馬魚為AB系斑馬魚。

主要測定儀器

a)斑馬魚養殖單元。

b)連續變倍體式顯微鏡。

c)曲線控制生化培養箱。

d)SQP萬分之一電子天平。

主要測定材料

氯化鈉（2%）、透明質酸鈉（0.2%）。

5.3.1溶液配制

——空白對照：標準稀釋水

稱量NaCl（3.5g）、NaHCO3（0.2g）、KCl（0.05g）和CaCl2（0.1175g），加入蒸餾水定容至1000mL，

真空過濾器（孔徑0.2μM）過濾，高壓滅菌鍋滅菌，常溫備用。

——模型對照組：2.0%氯化鈉溶液

稱量1000.0mg的氯化鈉于50.0mLEP管中，加入50mL的標準稀釋水溶解。

——陽性對照組：0.2%透明質酸鈉

稱量10.0mg的透明質酸鈉于10.0mLEP管中，加入10mL的2%氯化鈉溶液溶解。

——樣品組：

用2%氯化鈉溶液配制溶液。

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6測定操作

測定設置空白對照組、模型對照組、陽性對照組和不同濃度的樣品組，每組10尾。

隨機挑選發育正常的72hpf野生型斑馬魚胚胎于載玻片上使其平躺，體式顯微鏡下局部拍取斑馬

魚尾鰭長度（拍攝視野為尾鰭缺口處至整條尾巴），記為0min，之后各組分別采用此方法進行拍照處

理。

將斑馬魚胚胎轉移至96孔細胞培養板中，1尾/孔，每孔加入150μL溶液，置于28℃恒溫培養箱

孵育20min。20min后，將斑馬魚置于載玻片上使其平躺，體式顯微鏡下局部拍取斑馬魚尾鰭長度，記

為20min，之后各組分別采用此方法進行拍照處理。

用ImageJ測量斑馬魚尾部長度。

6.4.1導入要測量的斑馬魚胚胎照片，如圖1。

圖1

6.4.2選擇直線工具，測量范圍為尾鰭缺口處至整條尾巴，如圖2。

圖2

6.4.3從尾鰭缺口處按住鼠標左鍵畫直線，直到尾巴末端（透明魚鰭部分不要），如圖3。

圖3

6.4.4點擊Ctrl+m，取length值為測量出來的尾巴長度。

圖4

7計算結果

按照公式計算斑馬魚尾部長度收縮率（%）

×100%

使用GraphPadPrism8統計分析軟件（或類似功能的其它工具）對各組別中斑馬魚尾部長度收縮率

進行統計分析，數值用均值±標準誤（Mean±SEM）表示。

8判定依據

測試指標判定標準

受試物與模型對照組相比，斑馬魚尾部長度收縮率越小，且具有顯著性差異（p<0.05），

尾部長度收縮率（%）

說明受試物在該受試濃度下具有抑制斑馬魚脫水的能力。

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參考文獻

[1]GaultWJ,EnyediB,NiethammerP.Osmoticsurveillancemediatesra