第一章化學發光技術

一、免疫學檢測發展階段

免疫學檢測重要是運用抗原利抗體的特異性反應進行檢測的一種手段，由于其可以運用同位素、酶、

化學發光物質等對檢測信號進行放大和顯示，因此常被用于檢測蛋白質、激素等微量物質。我國免疫學的

檢測基本歷經了如下幾種過程，如圖1.1所示。

_________化學發光免疫檢測（CLIA）

酶聯免疫檢測（ELISA）

放射免授檢測（R1A）

20世紀60年代70年代90年代時間

圖1.1免疫學檢測發展階段

盡管免疫診斷在臨床診斷中與據著非常重要的地位，不過從我國臨床免疫診斷現實狀況來看，無論是

臨未應用方面，還是產業化角度，都處在相對比較落后的狀態，亟待改善。下表1.1就此做一比較：

表1.1中國免疫診斷現實狀況

中國國際（歐美為主）

.興起于20世紀70年代，現仍普遍使.興起于20世紀60年代，現已基本退

用于縣級以上醫院；出臨床應用；

放射免疫法.產品處在衰退期；.產品生命周期已終止；

（RIA）.廠商試劑與儀器共同開發，試劑基本.廠商試劑和儀器共同開發，試劑基本

系列化。系列化。

.興起于20世紀80年代，現普遍使用.興起于20世紀70年代，現仍在臨床

于各級臨床機構，為我國臨床免疫診斷應用；

的基本措施；.產品處在衰退期：

酶聯免疫法

.產品處在成熟期；.廠商試劑與儀器共同開發，試劑基本

(ELISA)

.廠商試劑與儀器共同開發，試劑尚未系列化。

系列化。

.導入于20世紀90年代，現個別較大.興起于20世紀8()年代，現已被臨床

醫院開展個別項目；普遍使用，成為臨床免疫診斷的支柱措

化學發光免疫法.產品處在導入期或成長期；施；

(CLIA).無廠商開發生產，完全依賴進口。.產品處在成熟期：

.廠商試劑與儀器共同開發，儀器自動

化程度高，試劑系列化狀態好。

由以上分析不難看出，化學發光免疫檢測是大勢所趨；而取代進口，發展我國的化學發光檢測事業，

正是臨床檢查界著手發展的方向＜由此，我企業自1998年立項至今，致利于化學發光檢測方案設計，自

行開發了具有國內領先水平的化學發光底物，與國外著名檢測儀器生產商聯合開發了化學發光全自動、半

自動檢測儀，并自行設計開發了化學發光管理軟件，而今形成了儀器、試劑、軟件全面配套，為我國的臨

床檢查界提供了一套完善的處理方案。

二、化學發光免疫分析技術

【概述】

本世紀70年代中期Arakawe初次報道用發光信號進行酶免疫分析，運用發光的化學反應分析超微量

物質，尤其是用于臨床免疫分析中檢查超微量活性物質。目前，這一技術已從試驗室的稀有技術過渡到臨

床醫學的常規檢測手段。化學發光免疫分析(ChemiluminescenceImmunoassay,CLIA)是將化學發光或生

物發光體系與免疫反應相結合，用于檢測微量抗原或抗體的一種新型標識免疫測定技術。其檢測原理與放

射免疫(RIA)和酶免疫(EIA)相似，不一樣這處是以發光物質替代放射性核素或酶作為標識物，并藉助

其自身的發光強度直接進行測定,

化學發光免疫分析既具有放射免疫的高敏捷度，又具有酶聯免疫的操作簡便、迅速的特點，易于原則

化操作。且測試中不使用有害的試劑，試劑保持期長，應用于生物學、醫學研究和臨床試驗診斷工作，成

為非放射性免疫分析法中最有前途的措施之一。

【原理】

在化學發光免疫分析中包括兩個部分，即免疫反應系統和化學發光系統。免疫反應系統，其基本原理

同海聯免疫技術（ELISA）,常采用雙抗體夾心法、競爭法、間接法等反應模式，如圖1.2,1.3,L4所示。

固相抗體

如圖1.2雙抗體夾心法反應原理示意圖

陶標瘠原

待

測

管

標本

（含抗原）

圖L3競爭法反應原理示意圖

的標

抗體

固相抗原

圖L4間接法反應原理示意圖

化學發光系統的原理在于免疫反應中的酶作用于發光底物。發光底物在酶的作用下，底物發生化學反

應并釋放出大量的能量，產生激發態的中間體。這種激發態中間體，當其回到穩定的基態時，可同步發射

出光子。運用發光信號測量儀器即可測量光量子產額，該光量子產額與樣品中的待測物質的量成正比,由

此可以建立原則曲線并計算樣品中待測物質的含量。

詳細說來，我們采用的是辣根過氧化物酶（HRP）催化魯米諾（Luminol）底物發光系統，如圖1.5所

示,

圖1.5HRP催化Luminol發光示意圖

我們的關鍵技術之一在于自行研制開發的發光底物系統，該系統與國外同類產品的比較表明，不僅重

要性能指標到達了國外產品水平，并且由于自行生產，因此大大減少了發光底物的成本。在該底物系統中,

我們采用特殊的復合型增強劑，發光快，強度高，發光平臺期長，可達30?60分鐘，因此完全可以滿足臨

床檢測的需要。其發光平臺期測定成果如圖1.6所示

Time—>

Delectionlimit10"moles

國L6發光平臺期測示總圖

（1）與放免（RIA）產品比較

與放射免疫試劑（RIA）匕較，化學發光防止了放射性核素的污染以及對操作人員的傷害，大大縮

短了反應時間，同步兼具高敏捷度的優勢。

（2）與陶免（ELISA）產品比較

敏捷度與可測范圍遠遠高于酶免產品，兼具ELISA法簡便的操作措施與較短的反應時間。

（3）與進口全自動發光比較

試劑成本遠遠低于進口全芻動發光試劑，為開放體系，也可合用其他發光檢測儀器檢測。

【應用】

發光免疫分析作為一種非放射性免疫標識技術，除了具有敏捷、特異、標識物穩定等特點外，其檢測

程序亦簡便、迅速，只需微量標本，近年來臨床上已應用于檢測多種激素、腫瘤標志物、藥物及其他微量

生物活性物質，亦可用丁細菌和病毒感染的迅速診斷。

三、技術優勢

【技術路線確實定】

為適應中國臨床檢查的實際需要，我企業確定了如下的技術路線，如下表1.7所示：

【技術鑒定】

（I）化學發光試劑的現實狀況

▲已通過河北省科委鑒定：

▲國外進口發光劑對比成果：符合率為98%,部分技術指標超過進口發光劑。

▲甲胎蛋白（AFP）化學發光定量檢測試劑盒：已通過中國藥物生物制品檢定所檢定，各項指標優秀。

▲癌抗原125（CA125）化學發光定量檢測試劑盒：已通過中國藥物生物制品檢定所檢定，各項指標優

秀。

▲催乳素（PRL）化學發光定量檢測試劑盒：已通過中國藥物生物制品檢定所檢定，各項指標優秀。

（2）化學發光儀及軟件

▲化學發光分析管理軟件已開發完畢，可實現程序測量、迅速測量、單板多項、兩點定標、自動打印化

驗單、工作量記錄等功能。

表1.7技術路線思緒確定

技術路線思緒

原則微孔板為反應載體操作簡便、易于原則化

標識辣根過氧化物酶應用廣泛、標識技術穩定

魯米諾底物系統針對辣根過氧化物的，發光強度大，擴展性強

全自動、半自動發光儀適合不一樣層次顧客的需要

中文操作軟件以便國內臨床免疫學檢測試驗室

四、產品簡介

【系列試劑盒】

既有試劑盒共有5個系列，20余種產品。

（I）腫瘤標志物系列：甲胎蛋白（AFP）、癌胚抗原（CEA）、A清鐵蛋白抗F）、B2微球蛋白（B2-MG）、

人絨毛膜促性腺激素（HCG）、前列腺特異性抗原（PSA）、游離前列腺特異性抗原（f-PSA）、癌抗

原125（CA125）、癌抗原15-3（CA15-3）、癌抗原19-9（CAI9-9）

（2）甲狀腺功能系列：甲狀腺素（T4）、游離甲狀腺素（FT4）、三碘甲腺原氨酸（T3）、游離三碘甲腺

原氨酸（FT3）、促甲狀腺素（TSH）

（3）生殖內分泌激素系列：催乳素（PRL）、黃體生成素（LH）、卵泡刺激激素（FSH）、孕酮（P）、睪

酮（T）、雌二醇（E2）

（4）糖尿病系列：胰島素、由清C肽

（5）其他檢測系列：皮質醇、總IgE、生長激素（GH）

【試劑盒評價原則】

從臨床應用角度考核檢查試劑的可靠性，是以其能否辨別健康與疾病的能力作為根據的。目前還很難找到

100%可靠的試驗，任何試驗都會出現假陰性或假陽性。如下指標為評價一種試劑盒的常用指標，不一樣的

試劑盒將根據不一樣的原則進行評價。

（I）精確性

精物性是指測定所得值與真值的一致性。

（2）精密性

精密度是指對同一份樣品反更測定，每次測定成果和均值的靠近程度。

（3）敏捷度

敏捷度是指某種試驗檢出極低免疫物質的能力。

（4）特異性

特異性是指以無病者試驗，其陰性的百分率。

（5）穩定性

是指試劑盒在有效期內保持穩定的程度。

【試劑盒操作注意事項】

（I）發光反應最適溫度在25?28℃,為保證試驗測定的精確性，應嚴格控制試驗室溫度在18?25℃。

（2）發光反應敏捷度很高，因此需要嚴格按照闡明書規定，控制每步反應時間，操作應緊湊。

（3）處理試劑和樣品時需戴次性手套，操作后應徹底洗手。

（4）所有標本應視為潛在的傳染性物質，廢棄處理時，請按照當地政府和有關國家規定進行。

（5）操作前仔細閱讀使用闡明書，不一樣批號的試劑不得混用。

（6）包被條打開后，應將剩余包被條用密封保留，以免受潮。

<7）加樣頭不可混用，以免交叉感染。

（8）為防止邊緣效應，提議溫育過程中將微孔板用封膜覆蓋。

（9）洗滌要徹底，洗液應注滿每孔，防止產生氣泡。每次洗滌均應甩干孔內液體。但不可用水過猛，

最終應將孔內液體拍干。

（10）提議各試驗室根據自己實際條件建立臨界值范圍。本試劑盒僅作其他診斷措施的輔助手段之一，

供醫生參照。

（II）試劑請在有效期內使用。

第二章腫瘤標志物檢測

一、腫瘤標志物簡介

近年來，腫瘤已成為危害人類生命健康的常見病、多發病。腫瘤根據來源可分為瘤和癌，按照性質可

分為良性和惡性。

腫瘤的發生直接影響機體的代謝，如變化糖的代謝途徑，變化蛋白質與核酸的合成，變化代謝過程中

關健酶的活性，以及引起激素代謝異常等。以蛋白質為例，腫瘤組織中的蛋白質含量要比正常組織高。作

為可用于腫瘤標志檢測蛋白質來講，屬于腫瘤組織自身增值中合成的標志蛋白質或酶均見增高，而屬于腫

痛細胞分化標志的蛋白質或酶，其合成往往成減低趨勢。并且通過研究發現，在哺乳類動物胚胎期所具有

蛋白質，伴隨年齡增長其構造有所變化，當人體出生后或伴隨在齡變化，某些基因被關閉，不再體現或很

少體現該基因的活性，當癌變時，某些細胞退化成為分化較差的、近似于胚胎細胞時，使得某些基因失活,

某星基因被激活，重新合成某些坯胎蛋白，如甲胎蛋白、癌胚抗原等，這一現象稱為返祖現象。這即為腫

瘤標志物的檢測建立了科學基礎，所謂腫瘤標志物(tumormarker,TM),是指由腫瘤組織產生的存在于腫

瘤組織自身，或分泌至血液或其他體液，或因腫瘤組織刺激，由宿主細胞產生而含量明顯高于正常參照值

的一類物質。

腫瘤標志物的檢測，對于腫瘤的初期發現，病情的發展、治療后的評價、監測復發和轉移等方面都具

有一定的應用價值，可認為患者爭取治療時間，延長患者生命。因而近年來，世界許多醫學科學工作者致

力于對腫瘤細胞生長各環節、代謝與調控的基本規律和變化研究，尋求新的特異性或相對特異性的腫瘤標

志物。

二、瘤標志物的分類

［腫瘤胚胎性抗原標志物］

該類蛋白質即前文所提到的因返祖現象的出現，而產生的腫瘤標志物。雖然該類標志物與腫瘤組織不一定

具有特定的有關性，但與腫瘤的發生存在著內在的聯絡。

例：甲胎蛋白(alpha-fetoprotcin,AFP)

癌胚抗原(carcinoembryonicantigen,CEA)

［糠類抗原標志物］

該類物質是腫瘤細胞表面的抗原物質，或腫瘤細胞所分泌的物質。此類標志物的出現為臨床腫瘤的診斷帶

來以便，但其命名無規律可言。有些是腫瘤細胞株編號，有些是抗體物質的編號。該類標志物又可分為兩

類

1.糖類高分了?粘蛋白抗原

例：癌抗原CA125癌抗原CA15-3

2.血型類抗原

例：癌抗原CA19-9癌抗原CA50

［酶類標志物］

酶及同工酶是最早出現和使用的腫瘤標志物之一。腫瘤狀態時，機體的酶活力就會發生較大變化，這重要

是由于①腫瘤細胞或組織自身誘導其他細胞和組織產生異常含量的酶；②腫瘤細胞的代謝旺盛，細胞通透

性增長，使得腫瘤細胞內的酶進入俶液，或因腫瘤使得某些器官功能不良，導致多種酶的滅活和排泄障礙。

例：前列腺特異性抗原(prostatespecificantigen,PSA)

神經原特異性烯醉化酶(ncuron-spccificenolase,NSE)

［激素類標志物］

當具有分泌激素功能的細胞癌變對，就會使分泌的激素量發生異常。這種現象被稱為正位激素異常。而正

常狀況下不能生成激素的那些細胞，轉化為腫瘤細胞后所產生的激素，或者是那些能產生出激素的細胞癌

變后，分泌出的是其他激素細胞所產生的激素，這種現象被稱為異位激素異常。衡量異位激素異常的條件

是：①有非內分泌腺細胞合成的激素；②某種內分泌細胞卻分泌其他分泌腺細胞的激素；③腫瘤患者同步

伴有分泌異常綜合征；④此類腫痛細胞在體外培養時也能產生激素；⑤腫瘤切除或經治療腫瘤消退時，此

種激素含量下降，內分泌綜合征的癥狀改善。

例：人絨毛膜促性腺激素（humanchorionicgonagotropin,HCG）

人胎盤催乳素（PRL）

［其他蛋白質類標志物］

此外尚有某些初期發現的蛋白類腫瘤標志物，特異性稍差，但檢測措施相對比較輕易，因而常作為常規檢

測項目，用以腫瘤普查。

例：例-微球蛋白（P2-microglobulin,32_MG）

血清鐵蛋白（SerumFerritin,SF）

三、肝癌及甲胎蛋白（AFP）

原發性肝癌是指由肝細胞或肝內膽管細胞癌變所形成的惡性腫瘤，是我國常見的惡性腫瘤。近年來國

內外原發性肝癌的發病率，均有不停增高的趨勢。從世界范圍來看，各地區發病有較大差異，歐美國家發

病率較低（1.9~3.4人/10萬人），亞非國家發病率較高（4.6-98.2人/10萬人）。根據我國某些地區的

普查，我國的發病率為14.5?53人/10萬人，可見我國亦屬原發性肝癌的高發區.男性肝癌的死亡率僅次

于胃癌和食管癌，占多種惡性腫瘤的第三位，女性則僅次于胃癌、宮頸癌和食管癌，為笫四位。肝癌的發

病率呈一定的地辨別布，沿海高于內地，東南和東北高于西北、華北和西南部，沿海島嶼和江河海口又高

于沿海其他地區。肝癌多見于男性，男女發病之比為2?5:1,年齡大多為40?49歲。越是肝癌高發區，

這種性別差異就越明顯，發病年齡也越早。原發性肝癌起病除匿，初期癥狀不明顯，一旦出現臨床病狀和

體征，診斷多屬晚期，難以治療,因此臨床上迫切需要一種可以初期診斷原發性肝癌的檢查措施。

1956年Bergstrand和Czar在人胎兒血清中發現?種胚胎專一-性甲種球蛋白，后來證明為甲胎蛋白

(AFP)；1963年蘇聯GlAbelev首先在移植肝癌細胞的小鼠血清中發現了甲胎蛋白，并發現甲胎蛋白重要

由抬肝合成；1964年Tatarinov證明肝癌病人血清中也存在AFP：其后Uriel等深入證明AFP在原發性肝

癌診斷中的價值。1970年后，通過廣泛的臨床應用，證明AFP是診斷肝癌的可靠指標之一，從而使肝癌的

診斷獲得重大突破。大量研究成果表明，原發性肝癌者血清AF?含量90%以上超過500ng/ml,最高可達每

毫升數毫克，一般正常人血清AF)含量都在20ng/ml如下。世界各國已先后將AFP檢查作為初期診斷原發

性肝癌的有效措施用于臨床。我國在十一屆國際肝瘤會議上匯報了49430人AFP普查工作，初步肯定了AFP

普查對原發性肝癌具有初期診斷意義。通過普查在臨床上發現了許多無癥狀、無體征的“小肝癌”，對初

期治療、提高患者的生存率起到了十分重要的作用。

AFP測定的臨床意義:

I.原發性肝癌的診斷

檢測血清AFP含量是診斷原發性肝疵的重要手段之%由于措施學的不停改善，使原發性肝癌的陽性

檢出率到達了90%以上。正常成人血清AFP含量各家匯報不一致。也許與測定措施、原則品等不一樣有關。

中國肝癌研究協會報導正常人血清AFPV20ng/ml。而原發性肝癌患者血清AFP多數在500ng/ml左右。目

前國內多采用1977年全國肝癌防治協作會議確定的單項AFP診斷肝癌的原則：定量2500ng/inl,持續一種

月以上，并能排除妊娠，活動性肝病，生殖腺胚胎性腫瘤等。

通過觀測血清AFP的動態變化可理解患者病情進展狀態，由于血清AFP升高常在患者癥狀和體征出現

數月之久之前，故AFP檢測對原發性肝癌具有初期診斷價值。Kwala等檢測一例肝癌患者血清AFP僅31nN/ml,

一年后即達10000ng/ml。Purres報導一例血清AFP為30()ng/m：的患者，經尸檢證明其肝癌結節的直徑僅

0.5emo上海1971~1976年普查196萬人,發現300例肝癌，其中134例為無明顯肝癌癥狀和體征的初

期病人。普查發現的臨床前期病人，經手術證明81.6%為W5cm的小肝癌。以上的成果提醒：AFP檢測用于

普查可初期發現原發性肝癌。此外檢測AFP還可作為治療效果的評價指標。

2.急慢性肝炎和肝硬化的鑒別診斷

急慢性肝炎、肝硬化患者血清中可檢出AFP一般僅為50?200ng/ml,少數病人可臨時升高到400ng/ml

以上。但急性肝炎患者伴隨病情好轉，常在短時間內下降至正常水平，此即AFP“一過性升高”。慢性肝病

和肝硬化可呈下降或持續低水平，肝癌則呈逐漸上升趨勢。由于肝硬性患者有轉化為肝癌的也許，故在AFP

本來正常的肝硬化病人中，出現AFP持續升高應考慮癌變的也許。據文獻匯報，我國某些地區肝硬化病例

中肝癌發生率可高到達32.隗。在臨床工作中，應進行多項動態測定才能與肝癌進行鑒別。

3.先天性胎兒畸形診斷

胎兒AFP可有少許通過胎盤屏障進行母體，因此孕婦血清AFP可升窗，一般在500ng/ml如下，產后

20天內降至正常人水平。在無腦兒脊柱裂畸形妊娠時，孕婦血清AFP異常升高，高者可達800ng/ml以上。

近年來，羊水中AFP檢測的意義又引起人們的注意，如胎兒為無腦兒、開放性脊柱裂時，羊水中甲胎蛋白

含量可明顯增長。因此，羊水中甲胎蛋白的測定已成為開放性神經管畸形的特異診斷措施。

4.惡性畸胎瘤的診斷

某些胚胎性腫瘤如睪丸和卵巢的惡性畸胎瘤細胞也可合成AFP,因此惡性畸胎瘤患者血清中可出現較

高含量的AFP,因此惡性畸胎瘤患者血清中可出現較高含量的AFP,臨床上應注意根據患者的癥狀、體征

等進行鑒別。

四、前列腺癌及其腫瘤標志物

前列腺癌的發病率在全球范圍內呈上升趨勢。據美國記錄約占男性癌腫的36%,以及男性癌腫有關死

亡率的13%o在歐美國家前列腺揭是發病率最高的惡性腫瘤，死亡率僅次于肺癌位于男性腫搐的第二位。

在我國，伴隨人口的老齡化、膳食構造的變化和診斷技術的提高，前列腺疫的發病率和死亡率也在迅速增

長，1992年，美國白人前列腺癌的發病率為404.5/1（）萬男性人口，黑人可達477.2/10萬男性人口。我

國前列腺發病率約為3.4/10萬男性人II,遠低于西方國家，但國人良性前列腺增生（BPH）手術發現的偶

發癌和尸檢前列腺標本的潛伏癌約為歐美二分之一左右。由此推斷中國人前列腺癌從組織學發展到臨床要

比歐美人需要更長的時間，而前列腺癌的初期診斷是決定能否進行根治性治療的關鍵。

根據Stamey前列腺癌臨床分期原則，可將前列腺癌分為4期。A期：直腸指檢不能觸及前列腺癌結節;

B期：可觸及節結但局限在前列腺內；C期：腫瘤侵犯周圍組織；D期：前列腺癌有遠處轉移。其中，A、

B期為臨床初期，而前列腺癌根治術也只限于A、B期的腫瘤。

前列腺癌為老年性疾病，50歲此前很少發生。前列腺癌患者的體現變化多端。其自然發展規律無法預

測，多數前列腺癌發生在腺體周圍，遠離尿道，故初期患者很少出現癥狀。其診斷重要通過直腸指檢（DRE）、

血清PSA檢測或直腸B超（TRUS）針刺活檢確定診斷。自1979年Wang等首先從前列腺組織內分離和提純

出前列腺特異性抗原（prostaticspecificantigen,PSA）以來，PSA在臨床上得到了廣泛的研究和應用〃

PSA是由人前列腺上皮細胞合成并分泌至精漿中的一種糖蛋白，分子量為33000-34000道爾頓。許多體外

試驗表明，PSA具有.糜蛋白酸樣活性，其本質是一種絲氨酸蛋白醐，能使精液的凝塊水解，功能與男性性

生育力有關。PSA重要存在于前列腺組織中，女性體內不存在，當發生前列腺癌時，PSA會大量釋放進入

血液，因此測定血PSA對前列腺癌的診斷有重要價值。當血清PSA>10ng/ml時，應高度懷疑前列腺癌;

而PSA4?lOng/ml時,則為灰色區。

PSA測定可使前列腺癌的診斷提前4年，在用PSA進行篩選的人群中，通過活檢發現癌的機會，PSA

4ng/ml者為1/50：4?10ng/ml者為1/5；>10ng/ml者為1/3。近年來采用以檢測血清PSA為基礎,結合

DRE、直腸B超(TRUS)、針刺活檢來診斷前列腺癌，其檢出率比未用PSA前提高了70%,對局限在前列腺

內的初期前列腺癌提高了一倍。因此提議50歲以上的男性，有條件時應每年作一次直腸指檢(DRE)及

血清PSA檢查。不過值得注意的是，血清PSA濃度可受多種原因的影響，尤其是PSA的升高和前列腺的

創傷有關。常規的直腸指檢、前列腺按摩、前列腺活檢、膀胱鏡操作、留置導尿都可以使PSA明顯升高，

故血清PSA測定應在前列腺操作前或操作后至少一周才抽血，前列腺活檢后則需等待更長的時間。

PSA對前列腺癌組織有特異性，但對前列腺癌并無特異性，多種良性前列腺病變如BPH也可體現為

PSA增高。為了將前列腺癌和前列腺良性病變區別開來，近年又在此基礎上產生了如下指標，尤其是當血

清PSA為4?10ng/ml時，對前列腺癌的診斷有較大協助。

[血清游離PSA(f-PSA)與總PSA的比值(fPSA/tPSA)]

1995年McCrmack發現正常fPSA僅占tPSA的10%?20%,若fPSA/tPSA>25%,前列腺癌的也許性

極小(V1()%=當fPSA/tPSA<10%時，則前列腺癌的也許性極大080%),必須作前列腺活檢以確診。

[前列腺特異性抗原速率(PSAvelocity,PSAV)]

回憶性研究表明，持續觀測血清PSA濃度的變化，前列腺癌組織PSA速率明顯高「良性前列腺增生

組和正常人組，正常值上限為每年0.75ng/mlo這樣，雖然在兩次檢測中PSA的濃度均在正常范圍，但根

據PSA的速率變化，可深入檢查發現初期前列腺癌。大量的篩選資料證明，假如PSA速率超過每年

O.75ng/ml,則可發現47%的患者患前列腺癌。

五、卵巢癌及癌抗原CA125

據記錄，每年都約有20,()(X)名婦女被診斷為新的卵巢癌病人。每年死于卵巢癌的婦女超過12,()00

人，卵巢癌是僅次于宮頸癌、宮體癌的第三位婦科腫瘤，居女性惡性腫瘤的第六位，但其死亡率卻明顯高

于宮頸痛和宮體瘡，是惡性程度最高的婦科癌癥，且由于大多數卵巢癌均發現于晚期，故其王年生存率僅

為20%?30%。世界上卵巢癌發病率最高的是瑞典(21/10萬)。上海1988年記錄，卵巢惡性腫瘤發病率

為5.37/10萬。卵巢癌的高發年齡在40?7()歲。卵巢癌的組織病理類型復雜，一般而言，卵巢實性腫瘤多

屬惡性，而囊性腫瘤多屬良性。

1981年,Bast等從人卵巢漿液囊胞腺癌抗原可被單克隆抗體OC125識別,因而被稱為CA125,是一

種卵巢癌有關抗原。為一種糖蛋白，MW不小于(X)。CAI25是研究最多的卵巢癌標識物，在初期篩查、

診斷、治療及預后的應用研究均有報道。在初期篩查方面，雖然血清CA125在I、H期卵巢癌的敏感性只

有60%左右，仍被認為是一項經濟、以便的初期檢查手段。有研窕表明，尚未被診斷為卵巢癌者血清中即

可檢測到CA125升高，比臨床診斷提前至少1年的時間。在一項用挪威的血清庫進行的更大規模的研究中，

發現CA125升高早在臨床檢查前18個月即可出現。更早的CA125變化可出目前臨床確診前5年，那時即

有25%的病人高于30U/mI,同年齡段的對照組只有7%的升高。這表明通過檢測血清CA125,上皮性卵巢

癌能被提前相稱一段時間發現.

CA125在初期篩查方面的敏感性低于陰道超聲檢查(TVU),持續檢測CA125或與陰道超聲(TVU)

聯合應用可提高診斷的特異性和敏感性。在一種550()人的健康女性人群中，175人被查到CA125升高，

連司此外175個健康對照隨訪者，每三個月做一次CA125,每六個月做一次陰道超聲和盆腔槍查。用這種

方式查到6個病人，其中4人是初期。

在持續檢測中，CA125的初始濃度和上升斜率應考慮在內，以鑒別腫瘤是良性生長還是惡性生長。在

一次8688份血清樣品的回憶性研究中，發現用這種方式來計算卵巢癌的危險性，其敏感性83%,特異性

99.1%,陽性預見率16%,認為這種方式是篩查初期卵巢癌的很好技術。

CA125用于卵巢癌篩查假陽性重要出目前妊娠、月經期及婦科炎癥等狀況。在妊娠頭3個月和月經期

CA125假陽性分別可達57%和16%。也有認為CA125與月經周期無關，但子宮內膜炎患者CA125升高。

CA125的升高與臨床分期及病理類型有關，漿液性卵巢上皮癌CAI25陽性率89%,粘液性癌16%,

卵巢內胚竇瘤CA125不升高。I、H期卵巢癌CA125的陽性率在60%左右，H【、N期患者陽性率在85%以

上，甚至靠近100$。

卵巢癌通過手術治療或綜合治療后，因腫瘤負荷的減少，腫瘤標志物的水平亦有明顯變化。通過持續

檢則腫瘤標志物的變化，可對治療效果進行評價。CA125在評價療效方面很有價值。Crombach等報道

CA125水平的變化與治療后病情變化的符合率達89%oHilila報道治療后病情進展者中88與升高，在病情

好轉者中87%減少，總符合率88%。CA125治療后的下降幅度和下降后的穩定期長短是評價治療效果的良好

指標。

對治療后隨訪的患者，CA125是較佳的復查指標，其變化比客觀證據早1?6個月，但二次手術探查中

CA125的陽性率僅有35%?40樂復發灶直徑不小于2cm者陽性率較高。但有臨床體現的復發，患者CA125的

陽性率可達90%以上。持續動態測定可以提高在復發診斷方面的陽性率，發現CA125升高應考慮復發轉移,

CA125升高的斜度和幅度可預示局部復發或是遠處轉移。

在無癥狀的絕經后婦女中CA125水平升高也是一種重要的危險原因。Jcyarajah等隨訪了從2名絕經

后婦女中篩選出的血清CA125高于30U/ml的女性771人，此外隨機選擇了同等數量的血清CA125低于

3()U/ml女性一起隨訪1614+897天，成果共有84人死亡，其中CA125升高組占62人，而CA125正常者僅

22人,血清CA125升高者死亡危險性明顯高于正常者。

六、乳腺癌及癌抗原CA15-3

乳腺痛的發病率居常見痛癥的第三位，是婦女中最常見的惡性腫瘤，在我國位于婦女惡性腫瘤的第二

位，乳腺癌的發病率在世界各個國家和地區鑒別很大，北美、北歐最高，亞洲、非洲最低，南歐及拉丁美

洲居中。我國的津、京、滬及沿海都市為高發地區，上海最高。乳腺癌好發于女性，發病率是男性的100

倍，30歲后,發病逐年增多，70-75歲達高峰。乳腺癌常在確診時已經有轉移或在治療后發生轉移，而

腫瘤細胞的轉移是引起患者死亡的重要原因之」因此乳腺癌從發病開始就是?種全身性疾病，在體內也

許隱藏著某些微小轉移灶。手術、放化療及內分泌治療有助于控制乳腺癌的發展。初期檢測乳腺癌轉移和

治療后的復發對控制乳腺癌的發展，改善患者的生存質量，養活轉移復發和死亡率有重要的意義。

1984年，Hikens等人及Kufe等人分別用人乳脂球膜上分離的糖蛋白MAM-16和肝轉移的乳腺癌細胞

免疫小鼠，制成針對對應抗原的單克隆抗體：U5-D8和DF-3o這兩株抗體所識別的抗原是上皮細胞上的

一種粘蛋白MUCT的唾液酸糖抗原，該抗原被命名為CA15-3。這兩株抗體分別與CA15-3抗原上的兩個重

要決定簇相結合。CA15-3分子構造還不清晰。該種糖蛋白具有脫輔基蛋白一種跨膜區，一種胞內區和由

20個氨某酸須向排列的胞外區.CA15-3分子顯約為400KD這種粘液性糖蛋白(VUCT)位于乳腺細胞和肺

上皮細胞上，也大量體現于乳腺癌，卵巢癌，胰腺癌，胃癌和臚癌上，是一種腫瘤有關抗原。CA15-3的血

清半衰期不到兩周。

乳腺良性腫瘤患者術前、術后CAI5-3水平均正常；乳腺癌患者術前CA15-3水平I期處在正常水平，

II、川期升高，并以HI期升高最為明顯。II、H【期乳腺癌根治術后CA15-3水平降至正常，而姑息性切除

術后仍高于正常。術前乳腺癌患者CA15-3水平較低與很好的預后呈正有關。血清CA15-3在治療后持續較

高或又出現持續性升高，提醒體內殘留有腫瘤或乳腺腫瘤發生轉移或復發。血清CA15-3水平持續性升高

較臨床診斷乳腺癌復發轉移灶要早幾種月。因此某些臨床腫瘤專家認為，在乳腺癌術后最初四年中應當每

三個月復查一次血清CA15-3水平，而五年以上的患者應每六個月復查一次。在正常人群及乳腺良性腫瘤

患者中，CA15-3有一定比例的陽性檢出率，在少數良性疾患中，如慢性肝炎，結核，自身免疫疾病中也會

有所升而。

七、消化道腫瘤及癌抗原CA19-9

消化道腫瘤，尤其是胃癌在中國占多種惡性腫瘤發病率及死亡率的第?位，且未見明顯下降趨勢。據

調查，雖然都市人口胃癌死亡率稍有下降，但在農村中則有所升高。記錄成果表明在中國胃癌的死亡率由

1973-1974年的19.8萬增至19907992年的21.8/10萬。男性的胃癌發病率高于女性，男女發病率之比為

2-3：k發病的高峰年齡為40-59歲，且有年輕化的趨勢.結腸癌，胰腺癌發病率也有所升高。結腸癌的

發病率，以上海市為例，在這期間以每年10%的速度增長。在間增長2.25倍。

1979年Koprowski用結腸癌細胞系SW1116免疫小鼠，與骨髓瘤雜交制備出被命名為116NS19-9的單

克隆抗體。該株抗體能識別腫瘤細胞膜上如糖脂和粘蛋白成分中所體現的唾液酸化的Lewis血型抗原

(Sialosy-fucosyl-lactototraoso)的表位”這種血型抗原是一種異質性的高分子量:粘糖蛋白，分子量

范圍從200-1OOOKd。在胚胎上皮組織中有較高體現，但在正常人中體現量很低，該株抗體所識別的腫瘤有

關抗原被命名為CA19-9。CA19-9在消化道腺癌病人血清中濃度可明顯升高，因而又稱作胃腸癌抗原。

CA19-9是一種與胃腸道惡性腫瘤有關的腫瘤有關抗原。在胰腺癌，膽管細胞癌，肝細胞癌，胃癌，結

腸癌以及食管癌，甚至在非胃腸道惡性腫瘤患者，血清CA19-9循環抗原含量均有不一樣程度的升高。伴

隨治療和病情的不一樣轉歸，血清中CA19-9含量會有所變化，因而能很好的反應患者的病變狀態。血清

CA19-9的測定是?種高特異性，高預見性和無害的測定措施，可用于胃腸道惡性腫瘤的初期診斷，及時監

測病情的進展、復發和轉移，有助于臨床腫瘤醫師研究和確定對胃腸道惡性腫瘤患者的治療方案。

八、人絨毛膜促性腺激素（HCG）檢測及癌癥診斷

人絨毛膜促性腺激素（HCG）是由胎盤的滋養層細胞分泌的一種糖蛋白激素，由100個簍基酸和某些

單糖構成，分子量約為30000,有a和B兩個亞單位，重要具有刺激黃體發育的功能，從而維持妊娠的繼

續，HCG的檢測除了可診斷正常妊娠外，還可對異位妊娠、絨毛膜癌、滋養層腫瘤等進行診斷，并可用于

對的指導人工流產。

I.正常妊娠檢測

?般孕婦在停經后30-60天才懂得受孕，并且妊娠癥狀在頭?月往往不是很明顯。胚胎極易受到X線、

放療、手術麻醉以及藥物的損傷，此外煙酒及不良飲食也會影響的發育，為減少由于胚治的損傷，而導致

嬰兒先天缺陷和防止不必要的人工流產，盡早使醫生和孕婦掌握受孕與否就顯得非常必要，對貫徹優生優

育尤為重要。

2.測異位妊娠和正常指導人工流產

HCG在受精卵植入子宮后24至48小時就可以出目前血.尿及休液中，可以被檢測出來.不一樣個休

及時期HCG含量有極大變化。但總的變化趨勢大體相似，一般都在第8-10周到達最高峰，平均上升速度

為2.1±0.4增長一倍，然后逐漸減少，到18周時降至同第4周水平相近時即維持無較大的波動。不過異

位妊娠、先兆流產的HCG水平或增長速度低于正常妊娠時的狀況。當受精卵在子宮外植入后，胚胎的發

育可受到嚴重的限制，因此HCG的水平與同期正常妊娠相比就顯得很低。往往人工流產數天，HCG就會

消失。假如HCG繼續存在，就闡明仍有絨毛組織殘存，需深入清宮。

3.檢測亞臨床自然流產

自然流產多為孕卵和發育異常，機體孕激素分泌局限性，與著床不一樣步或脫膜發育不良。HCG水平

也大大低于正常妊娠，一般在流產前HCG的水平在20mlU/ml左右，因此自然流產的診斷就需采用高敏捷

度的試劑。

4.滋養層細胞腫瘤的診斷

滋養層細胞腫瘤系由絨毛膜的滋養層細胞和合體滋養細胞過度增生而來，根據滋養層細胞增生的程

度，有無絨毛，侵蝕能力及其他生物學特性，分為良性葡萄胎、惡性葡萄胎，HCG水平持續升高，可提醒

此類疾病的存在。

5.HCG與腫瘤

近年來的研究調查提醒，HCG不僅是滋養層細胞腫瘤標志，并且還可為許多其他腫瘤的重要標志。如

胃癌、胰腺癌、肝癌、多發性骨髓癌、卵巢癌、乳癌等。

九、腫瘤普查

腫瘤發生常常無明顯癥狀，因而無法初期治療，常常因此延誤了最佳治療時機FI前某些地區已將甲胎

蛋白（AFP）癌胚抗原（CEA）.Bz-微球蛋白（Bz-MG）,血清鐵蛋白（SF）作為體檢的檢查項目，用以

腫瘤普查，從而提高了癌癥的初期診斷率。以上腫瘤標志物多屬于非組織特異性腫瘤有關標志物，不過聯

合檢測可彌補非特異性的局限性，提高腫瘤的檢出率。如下就這幾種腫瘤標志物進行分別簡介。

甲胎蛋白（AFP）：見前文所述。

癌胚抗原（CEA）是1965年Gold和Freedman首先從胎兒及結腸癌組織中發現的，CEA是一種分子

量為2道爾頓的多糖蛋白復合物，45%為蛋白質。一般狀況下，CEA是由胎兒胃腸道上皮組織、胰和肝的

細胞所合成，一般在妊娠前6個日內CEA含量增高，出生后血清含量降至很低。CEA屬于非器官特異性

腫瘤有關抗原，分泌CEA的腫瘤大多位于空腔臟器，如胃腸道、呼吸道、泌尿道等。正常狀況下，CEA

經胃腸道代謝，而腫瘤狀態時的CEA則進入血液和淋巴循環，引起血清CEA異常增高，使上述多種腫瘤

患者的血清CEA均增高。如肺癌、乳腺癌、膀胱癌和卵巢癌患者血清CEA量會明顯升高，大多顯示為腫

瘤廢潤，其中約有70%為轉移性癌。一般來說，手術切除后6周，CEA水平恢復正常，否則提醒有殘存腫

瘤，若CEA濃度持續不停增高，或其數值超過正常5?6倍者均提醒預后不良。持續隨訪定展檢測血清

CEA含量，對腫瘤病情判斷更具故意義。

82-微球蛋白（Bz-MG）由Bcrggard和Bcsrn于1996年從腎臟患者尿中分離出的一種蛋白質，由于

它的分子量僅為L2KU,電泳是顯于他-MG區帶，故被命名為口-微球蛋白。B2-微球蛋白是人體有核細胞

產生的一種由100個氨基酸殘基構成的單鏈多肽地分了?蛋白。B2-微球蛋白是惡性腫瘤的輔助標志物，也

是某些腫瘤細胞上的腫瘤有關抗原。B2-微球蛋白是人類白細胞抗原（HLA）的輕鏈部分，鏈內具有一對

二流鍵，32-MG與HLA-A、B、C抗原的重鏈非共價的相結合而存在于細胞膜上。一般認為除成熟紅細

胞和胎盤滋養層細胞外，其他細胞均具有fh-MG。它可從有核細胞中脫落進入血循環，使血液中的B2-MG

升高。血清B”MG不僅可以在腎功能衰竭、多種血液系統疾病及炎癥時升高，并且在多種疾病中均可增

高，故應排除由于某些炎癥性疾病或腎小球濾過功能減低所致的血清B2-MG增高。腫瘤患者P2-MG含量

異常增高，在淋巴系統中如慢性淋巴細胞白血病、淋巴細胞肉瘤、多發性骨髓瘤等尤為明顯，在肺癌、乳

腺癌、胃腸道癌及子宮頸癌等也可見增高。由于在腫瘤初期，血清B2-MG可明顯高于正常值，故有助于

鑒別良、惡性腫瘤。腦脊液中的Bz-MG的檢測對膜白血病的診斷有尤其的意義。

鐵蛋白(ferrilin)是Laufberger于1937年從馬脾中發現的一種儲鐵蛋白質，分子量約450KD,每個鐵

蛋白分子由24個亞基構成，亞基分L(light,liver,basic)和H(heavy,heart,acidic)2種,儲扶組織(如

肝、脾)中的鐵蛋白重要由L亞基構成，等電點較高；而心臟、胎盤中的鐵蛋白含H亞基較多，等電點較

低，1965年Richter的報道引起了人們對腫瘤細胞鐵蛋白的極大愛好，與肝、脾鐵蛋白不一樣，腫瘤細胞

的鐵蛋白含H亞基較多，習慣上稱之為酸性鐵蛋白(acidicisofemins)。免疫學研究確立了鐵蛋白為一種

腫瘤有關蛋白質，多數腫瘤病人血清中鐵蛋白濃度升高，而組織鐵儲量并未發生對應的增長，血清鐵蛋白

濃度升高一般闡明病人預后不良,在荷有移植性人腫瘤的裸鼠血清中可檢測到人鐵蛋白的存在，而腫瘤摘

除后人鐵蛋白從血清中迅速消失，這闡明腫瘤細胞可分泌胞外鐵蛋白，腫瘤病人血清中鐵蛋白水平的升面

也許是腫瘤組織泄漏所致。

十、腫瘤標志物檢測圖譜

腫痛標志物的檢測可根據表2.1進行選擇

表2.1腫瘤標志物的選擇

癌腫部分腫瘤標志物選擇次序

肝AFPSFCEA

結直腸CEACA19-9CA50

胰腺CA19-9CEACA50

胃MGAgCA724CEACAI9-9

食道see

肺CA50CEACAI9-9SCCSYFRA211NSE

乳房CAI5-3CAI25CEA

卵巢CAI25AFP3-HCGCEA

子宮SCCSFB-HCG

前列腺fPSAPSAPAP

甲狀腺HTGCEACAI9-9

血液病SFB-HCG

項目名稱主診陽性次序

CA50廣譜胰、肝、卵巢、腸、胃、肺

CA125卵巢卵巢、胰、肺、乳、腸

CA15-3乳房乳房

CA19-9消化道胰、膽、胃、腸

MGAg/CA724胃胃、腸、肺、孚L

SCC/SYFRA211鱗癌肺、食道、上鄂、宮頸、皮膚

★注：以上表格摘自中國檢查醫學用品第一期，僅供參照。

第三章甲狀腺激素檢測

人體生理功能的調整系統包括神經系統和內分泌系統，神經系統通過神經纖維傳導信息實現調整功

能，內分泌通過血液和組織液運送激素，作用于某些靶細胞而到達調整功能，兩者關系親密。所有的內分

泌揉都直接或間接受神經系統的影響，激素也可以影響神經功能，如甲狀激素能明顯影響腦的發育和正常

功能。

甲狀腺是一種內分泌腺體，它分泌具有生物活性的甲狀腺激素。甲狀腺激素對機體的代謝、生長發育、

神經系統、心血管及消化系統等具有重要作用；甲腺激素分泌品:增K或減少均可導致甲狀腺功能失調，內

分泌代謝紊亂。因此，對的檢測甲狀腺有關激素，對于診斷治療甲狀腺疾病具有重要意義。

一、甲狀腺基本知識

甲狀腺分泌有生理活性的甲狀腺素（T4）和三碘甲腺原氨酸（T3）及無生理活性的反T3等。血漿中

T4來自甲狀腺，而80-90%的T3和反T3是T4在外周組織經脫碘作用，脫去一種碘原子而生成的。血液

中的T3和T4,以結合和游離兩種形式存在。絕大部分的甲狀腺激素（T499.97%,T399.7%）可逆性的結

合于血漿蛋白上；游離的甲狀腺激素在血中含量甚微，與蛋白結合的激素和微量游離激素處在動態平衡中，

然仙止是這些微量的游離激素才能進入靶組織細胞，與細胞中受體結合，發揮其生物學作用，它還在垂體

部分反饋地調整促甲狀腺激素（TSH）的分泌。結合型的甲狀腺激素是沒有生物學作用的，它對穩定血中

游嘲激素含量起著貯存與緩沖作用。

與甲狀腺功能親密有關的另一激素為垂體所分泌的TSH。TSH是由垂體前葉嗜堿細胞所分泌，它是一

種糖蛋白，分子量為25000-2800。，糖類分子占總分子量的15%,包括巖藻糖、甘露糖、半乳糖、氨基葡

萄糖和氨基半乳糖等。

TSH的分子是由兩條肽鏈構成，一條是a鏈，由89個氨基酸構成；另一條是B鏈，由112個氨基酸

構成，兩條肽鏈靠非共價鍵結合在一起。激素的生物學活性由肽鏈決定。兩個亞基必須結合才具生物活性,

分開則無活性。

TSH分泌受神經和體液的調整，包括：①下丘腦促甲狀腺素釋放素（TRH）的增進與靶腺激素（T3、T4）

反饋克制的影響，兩者互相拮抗，構成下丘腦腺垂體甲狀腺軸；②神經系統對TSH分泌控制，在中樞神經

系統的控制下,生長介素可減少TSH分泌，多巴胺可抑TSH釋放,雌激素可升高TSH基礎分泌,糖皮質激

素可通過克制TSH的釋放，使垂體分泌TSH減少；③TSH分泌受機體反應調整；④TSH分泌有晝夜節律性

變化，高峰于午夜23：00-24：00,上午11：00時最低；⑤冷刺激TSH分泌增長，再增進T3、T4分泌以

適應冷環境。

甲狀腺功能的調整

生理狀況下，甲狀腺功能有兩種調整方式。即下丘腦垂體甲狀腺之間的反饋性調整和甲狀腺的自身調

整，第一種調整是最重要的調整方式（見圖3.1）

TRH

圖3.1下丘腦垂體甲狀腺軸的調整

1.腦的神經分泌細胞產生促甲狀腺激素釋放激素（TRH）°TRII抵達垂體前葉，增進合成和釋放TSII。

TSH在血液中濃度不不小于10117ml。TSH有興奮甲狀腺的功能：①能使甲狀腺激素的合成增長；②增進

甲狀腺激素分泌；③使甲狀腺上皮細胞增生肥大。

2.血液中甲狀腺激素濃度，對下丘腦和垂體功能也具有負反饋調整作用。血液中甲狀腺激素尤其是

T4濃度升高，可反饋性克制TSH分泌，反之，甲狀腺激素濃度減少時，則TSH分泌增強，從而興奮甲狀

腺，使之分泌更多的甲狀腺激素,

3.血中TSH和甲狀腺激素水平可以反饋性的影響TRH的釋放。TSH增長，可以使TRH分泌減少。

當血液中游離甲狀腺激素，重要是游離T3（fT3）的濃度升高，可刺激TRH合成增長，并貯存于下丘腦，

待FT3、FT4減少時，可興奮TRH的釋放，從而增長TSH的分泌，以提高血中甲狀腺激素的濃度。因此,

機體通過這一調整系統，以滿足周圍組織對甲狀腺激素的需要；并使血中甲狀腺激素濃度保持在正常范圍

之內。

《二）甲狀腺激素的生理作用

I.代謝的影響

①/熱效應：甲狀腺激素能使細胞內氧化速度提高，耗氧量增長，產熱增長，使人體能量代謝維持在一定

水平，調整體溫恒定。

②糖、脂肪、蛋白質代謝

糖代謝：生理劑量甲狀腺激索能增進腸道對葡萄和半乳糖的吸取，增進肝糖原的合成。超生理劑量能增進

肝糖原分解。

脂肪代謝：甲狀腺激素具有刺激脂肪合成和增進脂肪分解的雙直功能，但總的作用是減少脂肪儲存，減少

血脂濃度。故甲亢時血膽固醇低于正常，機能低下時則高于正常。

蛋白質代謝：甲狀腺激素能增進蛋白質及多種酷的生成，T3或T4分泌局限性時，蛋白質合成減少，但細

胞間的粘蛋白增多，引起浮腫，稱為粘液性水腫。T3或T4分泌過多時，蛋白質分解大大增強，基礎代謝

率增長。

2.