ICS71.100.70CCSY42HPCIAIT/HPCIA011—2024前言 2規范性引用文件 3術語和定義 4基本情況 5技術要求 6試驗方法 27檢驗規則 28標志、包裝、運輸、貯藏和保質期 3附錄A（規范性）光甘草酚含量測定方法 4附錄B（規范性）光甘草定生物安全性檢測方法 7T/HPCIA011—2024本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。本文件由廣東省人民醫院提出。本文件由廣州開發區黃埔化妝品產業協會歸口。本文件起草單位：廣東省人民醫院、深圳市一木生物科技有限公司、南方美谷（廣州）集團有限公司、廣州梵之容化妝品有限公司、泉后（廣州）生物科技研究院有限公司、深圳市禾葡蘭化妝品有限公司、無限極(中國)有限公司、甘肅泛植制藥有限公司、江蘇天晟藥業股份有限公司、廣州市絡捷生物科技有限公司、廣州天璽生物科技有限公司、廣州睿森生物科技有限公司、廣州質量監督檢測研究院、廣東省?；瘷z測中心有限公司、廣州山海生物科技有限公司、暨南大學、廣東藥科大學、廣東工業大學。本文件主要起草人：趙海山、譚建華、王冰瑤、李安章、侯森、韓志東、張耀宇、麥卓賢、趙富虎、季浩、鄭偉軍、吳明城、聶舟、鄭偉東、劉潔、鐘潔瑤、徐俊、田海研、郭清泉、吳培誠、蔣晨陽、王雅馨、何銘杰、吳少娟。1T/HPCIA011—2024化妝品用原料光甘草定（Glabridin）本標準規定了光甘草定的基本情況、技術要求、試驗方法、檢驗規則、標志、包裝、運輸、貯藏和保質期等內容。本標準適用于由光果甘草根提取的用于化妝品原料的光甘草定。2規范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件?；瘖y品安全技術規范GB/T39665-2020含植物提取物類化妝品中55種禁用農藥殘留量的測定QB/T4951-2016化妝品用原料光果甘草（Glycyrrhizaglabra）根提取物GB/T6678-2003化工產品采樣總則GB/T6680-2003液體化工產品采樣通則GB/T8170-2008數值修約規則與極限數值的表示和判定GB/T191-2016包裝儲運圖示標志GB/T6682-2008分析實驗室用水規格和試驗方法T/HPCIA003—2022化妝品斑馬魚實驗通用技術規范3術語和定義本文件沒有需要界定的術語和定義。4基本情況產品中文INCI名稱：光甘草定產品英文INCI名稱：Glabridin活性成分：光甘草定建議配方添加量：≤0.1%CAS：59870-68-7分子量：324.29光甘草定，一般是指以光果甘草根為原料通過提取純化得到的粉末提取物。5技術要求符合表1的要求。表1光甘草定質量指標要求BA2T/HPCIA011—2024表1光甘草定質量指標要求（續）BA-應按照GB/T39665-2020《含植物提取物類化妝品中55種禁用農6試驗方法除非另有說明，所有試劑均為分析純，水為GB/T6682規定的三級水。6.1顏色與外觀在非直射陽光條件下，取樣品進行目測。6.2氣味取樣品感官判定，不應有異常氣味。6.3光甘草定(Glabridin)含量按QBT4951-2016《化妝品用原料光果甘草（Glycyrrhizaglabra）根提取物》規定操作。6.4微生物菌落總數、霉菌和酵母菌按《化妝品安全技術規范》微生物檢驗方法規定操作。6.5重金屬汞、砷，按《化妝品安全技術規范》中氫化物原子熒光光度法規定操作。鉛、鎘，按《化妝品安全技術規范》中火焰原子吸收分光光度法規定操作。6.6光甘草酚按本標準附錄A的方法進行檢測。6.7安全性按本標準附錄B的方法進行檢測。7檢驗規則7.1出廠檢驗光果甘草根提取物由生產廠質量檢驗部門取樣檢驗，出廠檢驗項目為:外觀、光甘草定含量、光甘草酚含量、重金屬、微生物，生產廠應保證每批出廠的產品都符合本標準的要求。每一批出廠的產品都3T/HPCIA011—2024應有一定格式的質量證書，內容包括出廠檢驗項目、產品名稱、生產廠名稱、生產日期或批號、凈重、執行標準編號。7.2型式檢驗型式檢驗每年不應少于2次。型式檢驗的項目為技術要求中的全部項目，有下列情況之一時，也應進行型式檢驗:a)當原料、工藝和設備發生重大改變時；b)產品首次投產或停產6個月以上恢復生產時；c)出廠檢驗結果與上次型式檢驗有較大差異時；d)生產場所改變時；e)國家質量監督機構提出進行型式檢驗的要求時。7.3檢驗結果若有1項不符合標準要求，應重新自雙倍量的包裝中取樣進行復驗，復驗結果仍有指標不符合標準要求，即整批產品判定為不合格。若微生物指標不符合標準要求，不得復檢。7.4采樣按GB/T6678、GB/T6680中有關規定進行，采樣量40g，分別裝入兩個潔凈、干燥的玻璃瓶中，密封、貼上標簽，一瓶供檢驗，另一瓶作留樣備查。7.5檢驗結果的判定按GB/T8170數值修約值比較法進行。7.6使用單位有權按照本標準的檢驗規則和試驗方法對所收到的該產品進行驗收，如有異議需在收到產品15天內向生產廠提出:當供需雙方對產品質量發生異議時，由雙方協商解決或請仲裁單位進行仲裁分析，仲裁分析時應按本標準規定的試驗方法和檢驗規則進行。8標志、包裝、運輸、貯藏和保質期8.1標志產品銷售包裝圖示標志應按GB/T191執行，標注內容為：產品名稱、商標(如有)、保質期(用生產日期、保質期或生產批號、限期使用日期等方式組合表示)、生產者名稱、地址、凈含量、執行標準號以及根據產品特點所應標注的其他內容。8.2包裝產品采用適宜包裝，根據用戶要求包裝。8.3運輸本產品屬于非危險品，可采用任何運輸工具，在運輸時應防火、防熱、防雨淋、防受潮。8.4貯藏通風處、干燥密封保存。8.5保質期在符合規定的運輸和貯存條件下，產品在包裝完整和未啟封的情況下，保質期按銷售包裝標注執行。4T/HPCIA011—2024（規范性）光甘草酚含量測定方法A.1規范性引用文件GB/T6682《分析實驗室用水規格和試驗方法》A.2原理試樣經甲醇提取，用高效液相色譜儀測定，外標法定量。A.3試劑和材料A.3.1水：GB/T6682，一級。A.3.2甲醇：色譜純A.3.3對照物質光甘草酚，CAS：59870-65-4，純度≥98%。A.3.4標準儲備溶液1000μg/mL：準確稱取適量（精確至0.0001g）對照物質光甘草酚，用甲醇溶解并定容至10mL，于4℃下冷藏保存。A.3.5標準工作溶液準確移取標準儲備溶液10μL、50μL、100μL、500μL和1000μL于10mL容量瓶中，用甲醇定容，配制成濃度分別為1μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、50μg/mL和100μg/mL的標準工作溶液。A.3.6有機濾膜孔徑0.22μm，材質為尼龍。A.4儀器設備A.4.1高效液相色譜儀（HPLC）配二極管陣列檢測器（DAD）或紫外檢測器（UV）。A.4.2分析天平感量為0.0001g。A.4.3渦旋振蕩器A.4.4超聲波清洗儀功率不低于250W。A.5測定步驟A.5.1試樣制備稱取試樣約0.1g（精確至0.0001g）于10mL具塞比色管中，加入甲醇至近刻度，渦旋30s，超聲提取20min，靜置冷卻至室溫，用甲醇定容至刻度，混勻，經0.22μm有機濾膜過濾，濾液供液相色譜串聯質譜儀測定。A.5.2測定參考條件a)色譜柱：C18柱，250mm×4.6mm（內徑），5μm，或相當者；5T/HPCIA011—2024b)流動相：A：水，B：甲醇，梯度洗脫，梯度洗脫程序見表A.1；c)流速：1.0mL/min；d)柱溫：30℃;e)進樣體積：10μL；f)檢測波長：285nm。表A.1高效液相色譜梯度洗脫程序%%055A.5.3標準曲線繪制取試樣溶液與標準工作溶液在相同試驗條件下測定，試樣溶液中待測組分的保留時間與標準溶液中對應組分的保留時間一致（偏差在±2.5%之內），以標準溶液濃度為橫坐標，對應的峰面積為縱坐標，繪制標準工作曲線，根據峰面積對應標準工作曲線上的溶液濃度定量。試樣溶液中待測組分的響應值應在標準工作曲線的線性范圍內，超過線性范圍則應稀釋后測定。光甘草酚的高效液相色譜圖參見圖A.1。圖A.1光甘草酚的高效液相色譜圖（10μg/mL）A.5.4空白試驗除不加入試樣外，均按A.5.1~A.5.3進行測定。A.5.5檢出限和定量限本方法在取樣量為0.1g時，對于光甘草酚的方法檢出限為0.003%，定量限為0.01%。A.6結果計算試樣中光甘草酚的含量按式（A.1）計算獲得：6T/HPCIA011—2024式中：w——試樣中光甘草酚的含量，單位為質量百分比（%）；p——上機溶液中光甘草酚的質量濃度，單位為微克每毫升(μg/mLV——試樣的定容體積，單位為毫升（mL）；10-6單位轉換系數；m——試樣的稱樣量，單位為克（g）。7T/HPCIA011—2024（規范性）光甘草定生物安全性檢測方法B.1方法原理光甘草定中的雜質成分是影響光甘草定生物安全性的主要因素之一，但現有的質量控制方法很難反映其存在的生物安全性風險。將待測光甘草定與標準參照物的LC50比較，過低的LC50說明可能存在潛在的生物安全性風險。B.2生物模型實驗動物模型及維護要求應符合T/HPCIA003—2022《化妝品斑馬魚實驗通用技術規范》要求。B.3材料試劑B.3.1斑馬魚胚胎推薦使用野生型AB品系斑馬魚的魚卵。B.3.2斑馬魚交配盒B.3.3實驗用水采用符合GB/T6682規定的一級水。B.3.4緩沖水用于空白對照組及胚胎培養，推薦使用Holt-Buffer、E3Buffer等，配置方法見B.3.4.1、B.3.4.2。B.3.4.1Holt-Buffer配制方法B.3.4.1.1按照（B.1）表格中的試劑，依次加入2L燒杯中，用超純水定容至2000mL。表B.1Holt-Buffer配方表NaHCOB.3.4.1.2使用真空過濾器（孔徑：0.2μm）過濾。B.3.4.1.3使用高壓滅菌鍋滅菌，常溫保存，備用。B.3.4.2E3Buffer配制方法B.3.4.2.160×母液：按照（B.2）表格中的試劑依次加入2L燒杯中，用超純水定容至2000mL。OB.3.4.2.2使用氫氧化鈉調pH至7.2。B.3.4.2.31×E3Buffer：量取16.5mL的60×培養液，用水定容至1L。B.3.5二甲基亞砜（DMSO）分析純，CAS號：67-68-58T/HPCIA011—2024B.3.6光甘草定對照品純度≥99%，CAS號：59870-68-7B.4儀器設備B.4.1斑馬魚養殖系統B.4.2生化培養箱B.4.3分析天平精密度為0.0001g。B.4.4移液器B.4.5光學顯微鏡放大倍數不低于50倍（如連續變焦體式顯微鏡、熒光顯微鏡等）。B.4.6實驗室一般常見器材B.5實驗過程B.5.1樣品前處理精確稱量光甘草定對照品與測試樣品，使用DMSO溶解將其溶解為10g/L母液。實驗前，使用DMSO將對照品及測試樣品母液稀釋為600、500、450、400、300、200mg/L溶液，再分別使用緩沖水稀釋100倍至6、5、4.5、4、3、2mg/L工作液，最終各工作液中DMSO濃度應一致，且為1%（v/v）。B.5.2斑馬魚胚胎的獲取實驗前1天下午喂食后1小時，選取健康的成年野生型斑馬魚，雌雄各半，置配種缸中，每缸1對,并用隔板將雌雄隔開。次日上午9:00,抽離隔板,自由交配后1小時后收集胚胎,挑選發育正常受精卵于容器中,加入適量緩沖水，置于28.5±0.5℃生化培養箱中孵育。正常胚胎發育狀態應參考T/HPCIA003—2022《化妝品斑馬魚實驗通用技術規范》要求。B.5.3實驗方法B.5.3.1試驗分組本試驗根據以下方法進行分組：1)空白對照組：含斑馬魚胚胎和緩沖水。2)溶劑對照組：含斑馬魚胚胎和1