35DB35/T2026—2021操作規程Detectionoffootandmouthdiseasevirus(Otype)antibodybyhypersensitivefluorimetricimmunoassay2021-11-23發布2022-02-23實施福建省市場監督管理局發布I 4 本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草本文件主要起草人：鄭騰、張體銀、吳冠英、吳俊清、章鍵、謝向機、張志燈、唐寰宇、林杰、1NY/T541獸醫診斷樣品采集、保存與運輸技5.1.3恒溫培養箱（20℃~25℃和37℃±1℃)。2把硝酸纖維素膜粘貼在PVC底板上，采用劃膜噴金機在硝酸纖維素膜上噴涂已經稀釋成0.5mg/mL用封閉液（配制方法應符合附錄A中的A.1）封閉硝酸纖維素膜30min，用10mmol/L磷酸鹽緩（配制方法應符合附錄A中的A.2）清洗硝酸纖維素膜30min，室溫（20℃~25℃)干燥2h后備用。加入10mg碳二亞胺和10mgN-羥基琥珀酰亞胺磺酸鈉鹽攪拌溶解，室溫（20℃~25℃)反應30min后，在4℃下，18000r/min離心10min，取離心后沉淀物用50mL硼酸緩沖液（pH8.2，配制方法應符合附錄A中的A.3）重懸，加入2mg透析過的雞IgY，在室溫（20℃~25℃)下攪拌反應24h，行封閉，再加入5mL樣品稀釋液（配制方法應符合附錄A中的A.4）保存（2℃~8℃)。加入10mg碳二亞胺和10mgN-羥基琥珀酰亞胺磺酸鈉鹽攪拌溶解，室溫（20℃~25℃)反應30min后在4℃下，18000r/min離心10min，取離心沉淀物用50mL的0.05mol/L硼酸緩沖液（pH8.2，25℃)下攪拌反應24h，在4℃下，18000r/min離心10min，取離心沉淀物加入5mL含0.5%牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖溶液封閉，再加入5mL樣品稀釋液（配制方法應符合附錄A中的A.4）保存（2℃~8℃)。3將高敏熒光納米微球標記的雞IgY抗體和口蹄疫病毒O型重組抗原，分別稀釋成0.1μg/mL和3μg/mL，采用點膜噴金機器噴涂在標記物墊上，噴量為2.5μL/cm，然后在37℃±1℃的溫度PVC底板上從左到右依次粘貼樣品墊、標記物墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，樣品墊的右端搭在標記靜置后的血液樣品在3000r/min下離心3m待檢血清在2℃~8℃下可保存48h，在-20℃條件下可以長期保存。將平衡至室溫的口蹄疫病毒（O型）抗體高敏熒光檢測試劑卡置于潔凈平坦的臺面上，在加樣孔內4結果為可疑，需要重新進行一次試驗，如果仍然為可疑，建議判定為陰性；當抗體效價＜15磷酸二氫鉀（KH2PO4，分析純），0.2g；磷酸氫二鈉（Na2HPO4?12H2O，分析純），2.9g；氯化鈉（NaCl，分析純），8.0g；氯化鉀（KCl，分析純），0.2g；牛白蛋白，5.0g；聚乙烯醇,磷酸二氫鉀（KH2PO4，分析純），0.2g；磷酸氫二鈉（Na2HPO4?12H2O，分析純），2.9g；氯化鈉（NaCl，分析純），8.0g；氯化鉀（KCl，分析純），0.2g。加水至1000mL，溶解后A.30.05mol/L