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文檔簡介
當歸提取物的檢測方法當歸為傘形科植物當歸Angelicasinensis(Oliv.)Diels的干燥根。2005版《中國藥典》收載的含量測定方法為高效液相色譜法,以阿魏酸為對照品。文獻報道的當歸及其制劑的含量測定方法主要為高效液相色譜法、薄層掃描法等?,F就其含量測定方法作一介紹。
一、高效液相色譜法
⑴2005版《中國藥典》當歸含量測定項下:
色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙腈-0.085%磷酸溶液(17:83)為流動相,檢測波長為316nm;柱溫為35℃。理論板數按阿魏酸峰計算應不低于5000。
供試品溶液的制備取本品粉末(過三號篩)約0.2克,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加70%甲醇20ml,密塞,稱定重量,加熱回流30分鐘,放冷,再稱定重量,用70%甲醇補足減失的重量,搖勻,靜置,取上清液用微孔濾膜(0.45μm)濾過,取續濾液,即得。
⑵文獻報道的方法
文獻報道的HPLC條件:流動相一般為乙腈-磷酸溶液,還有水-冰醋酸-正丁醇、乙腈-磷酸二氫鉀溶液、乙腈(甲醇)-醋酸溶液等。檢測波長一般為313nm,也有320nm、325nm等?,F具體舉幾例非藥典方法。
羅秀瓊等測定生乳靈中阿魏酸的含量。高效液相色譜儀:日本島津LC-10AT;色譜柱:HYPERILODSC18柱(5.0×250mm,5μm);流動相:水-冰醋酸-正丁醇(347:1:5);流速1.5ml/min;檢測波長:313nm;柱溫:40℃;進樣量:20μl。,阿魏酸在0.12μg~1.0μg的范圍內呈良好的線性關系。理論板數按阿魏酸峰計算應不低于4OOO。樣品溶液的制備:精密量取本品50ml,加鹽酸(0.1mol/L)40ml,攪拌,移至分液漏斗中,用乙醚提取3次,每次45ml,合并提取液,加2%碳酸鈉液40ml提取,分取碳酸鈉層,用鹽酸(2.0mol/L)調pH至2~3,移至50ml量瓶中,加水至刻度,搖勻,即得。
蔣心惠等測定普藏紅膠囊中阿魏酸的含量。島津LC-3A液相色譜儀,SPD-1型紫外檢測器及C-R1A色譜數據處理機;Rheodyne7725型液相色譜進樣器;色譜柱為BondapakODS柱(250mm×4.6mm,10μm);流動相甲醇-水(20:80),磷酸調pH3.0);流速1.0ml/min;柱溫25℃;檢測波長300nm。樣品溶液的制備:取本品裝量差異下混勻的內容物約0.5g,精密稱定,置50ml具塞離心管中,精密加人2%碳酸鈉溶液10ml,稱重,超聲提取30min,放冷,再稱定重量,用2%碳酸鈉溶液補足減失的重量。離心,精密吸取上清液5.0ml置具塞離心管中,加入乙醚25ml,機械旋混5min,離心,棄去乙醚層,重復操作3次,用稀鹽酸調水層pH為1,輕搖至無大量氣泡產生時,加入乙醚2.5ml,機械旋混5min,離心,吸取乙醚層,重復操作4次。合并乙醚層,置具塞1Oml尖底離心管中,空氣流揮去乙醚,精密加人甲醇1.0ml溶解殘渣,即得。
二、毛細管電泳法
采用毛細管電泳法測定當歸及其制劑中阿魏酸的含量,文獻報道較多。實驗條件比較多,現舉幾例。
翟淮敏采用毛細管電泳法測定當歸及其制劑中阿魏酸的含量??招娜廴谑⒚毠?75μm×10cm),10mmol/L硼砂溶液為電泳介質,30kV運行電壓,溫度25℃,重力進樣5s,檢測波長214nm。阿魏酸在5~100μg/ml范圍內,可定量檢測。回歸方程為:Y=-7.735+O.0263X,r=0.9993,精密度試驗RSD為2.59%,樣品重復性RSD為1.20%,三種樣品含量的RSD為2.29%。樣品溶液的配制:精密稱取當歸、八珍顆粒、養心氏細粉各3g,加入70%的乙醇約8ml,超聲振蕩提取30min。離心15min(3O00r/min),殘渣用上述提取液洗滌后重復提取兩次。合并提取液至25ml量瓶中,加入內標,并使其濃度為40μg/ml,加70%的乙醇定容至刻度,作為樣品溶液備用。
郭濤等采用膠束電動毛細管色譜法對當歸中的有效成分阿魏酸和腺苷同時進行含量測定。采用熔融石英毛細管柱(50μm×66.5cm,有效長度58cm)作為分離通道;以50mmol/L硼砂和10mmol/L去氧膽酸鈉并且含2%甲醇的溶液(pH9.6)為運行緩沖液;運行電壓24kV;毛細管柱溫20℃;檢測波長:210nm。以戊巴比妥鈉為內標,阿魏酸和腺苷分別在20~320μg/mL和10~160μg/mL濃度范圍內線性關系良好(r>0.998);回收率分別為96.8%~97.4%和93.2%~95.0%;重復性試驗RSD分別為4.7%和6.8%(n=5)。樣品溶液的配制:精密稱取60℃干燥的當歸粉末2.0g,用6o%乙醇20mL超聲提取20min,3000r/min離心10min,取上清液,殘渣同法重復提取2次,合并上清液,減壓回收溶劑,用60%甲醇定容至10mL,再經0.45μm濾膜濾過后得供試品溶液。
張藝等采用高效毛細管區帶電泳法對逍遙片及當歸原藥材中所含阿魏酸進行含量測定,以控制逍遙片的質量及避免在生產過程中盲目投料。采用HP3D全自動毛細管電泳儀對逍遙片及當歸原藥材中的阿魏酸以橙皮苷為內標在波長為313am處進行測定。電泳條件為:石英毛細管柱(75μm×65cm,有效長度56.5cm);行緩沖液為20mmol/L硼砂溶液(25℃時pH=9.18);分離電壓25kV;溫度為25℃。阿魏酸在5~100μg/mL范圍內呈良好的線性關系,其回歸方程為y=26.47X-3.52,r=0.9999。平均回收率分別為99.0%,93.8%,96.0%;RSD分別為1.5%,1.8%,1.3%(n=3)。樣品溶液的配制:精密稱取當歸原藥材0.500g,置小三角燒瓶中,加甲醇8mL,超聲20min,過濾,殘渣以甲醇2mL洗滌,再過濾,合并濾液,在濾液中加入內標溶液2mL并定容至10mL,以0.45μm濾膜過濾至樣品小瓶中備用。
三、薄層掃描法
此方法在阿魏酸的含量測定中應用較少,雖然操作簡便,重現性好,但在操作中應注意阿魏酸不穩定,薄層展開后應盡快完成掃描,否則影響含量測定效果。如:盧衛平等測定養血當歸精中阿魏酸含量。樣品測定波長323nm,參比波長365nm;狹縫1.25mm×1.25mm。掃描方法:鋸齒掃描
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