湖北普愛(ài)藥業(yè)有限公司驗(yàn)證管理標(biāo)準(zhǔn)文件第1頁(yè)共5頁(yè)消毒劑滅菌效果驗(yàn)證湖北普愛(ài)藥業(yè)有限公司驗(yàn)證管理標(biāo)準(zhǔn)文件第1頁(yè)共5頁(yè)消毒劑滅菌效果驗(yàn)證編號(hào)：PY-ZR-YZ-004-00起草：審核：批準(zhǔn)：類別：技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)日期：日期：日期：頒發(fā)部門：QA生效日期：年月日分發(fā)部門：驗(yàn)證委員會(huì)、質(zhì)量管理部、生產(chǎn)管理部消毒劑的選用原則：目的：確認(rèn)各潔凈級(jí)別的操作間及設(shè)備外表面按照規(guī)定的消毒程序消毒能夠達(dá)到消毒、防止污染的目的，并在消毒劑有效期內(nèi)能確保其消毒效力能符合要求。范圍：本驗(yàn)證方案適用于本公司潔凈區(qū)的墻面、天花板、門窗、機(jī)器設(shè)備、儀器、操作臺(tái)、地漏、推車、桌椅等表面以及操作人員雙手（手套）的消毒等。參考文件《醫(yī)療器械生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》《中國(guó)藥典》2015版第4部微生物限度檢查法概述本公司的潔凈區(qū)為D級(jí)，擬定用于潔凈區(qū)表面消毒的有五種消毒劑：75%乙醇、0.1%新潔爾滅溶液、0.2%新潔爾滅溶液、0.5%醋酸氯己定溶液、0.1%醋酸氯己定溶液。本次驗(yàn)證方案將選用以上5種消毒劑分別進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)。作用對(duì)象一樣的消毒劑每月輪換使用，避免表面微生物產(chǎn)生耐藥菌株。在利用消毒劑進(jìn)行表面擦拭消毒過(guò)程中消毒劑的作用時(shí)間應(yīng)不少于10分鐘，利用消毒劑進(jìn)行浸泡消毒的不少于5分鐘。消毒劑的種類、消毒對(duì)象、消毒方法和有效期序號(hào)名稱消毒對(duì)象消毒方法有效期175%乙醇用于設(shè)備表面、器具和手消毒。采用擦拭或噴灑方式密閉保存D級(jí)：30天20.1%新潔爾滅溶液用于地面、墻面、器具、工作服、清潔布、拖布和潔凈鞋的消毒采用擦拭或浸泡方式密閉保存D級(jí)：30天30.2%的新潔爾滅溶液用于水池和地漏的消毒用于液封密閉保存D級(jí)：30天40.5%醋酸氯己定溶液用于水池和地漏的消毒用于液封密閉保存D級(jí)：30天50.1%醋酸氯己定溶液用于工作服、清潔布、拖布和潔凈鞋的消毒采用浸泡方式密閉保存D級(jí)：30天為了確認(rèn)消毒劑的消毒效力，通過(guò)實(shí)驗(yàn)室考察部分和現(xiàn)場(chǎng)考察部分分別進(jìn)行驗(yàn)證。其中，用定量懸浮試驗(yàn)法和表面實(shí)驗(yàn)法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室考察試驗(yàn)部分。潔凈區(qū)設(shè)施表面材質(zhì)基本都是不銹鋼和玻璃兩種，故表面試驗(yàn)法選用不銹鋼載片和玻璃裁片模擬潔凈區(qū)設(shè)施表面進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)。兩種試驗(yàn)方法作用的消毒劑見(jiàn)表。序號(hào)試驗(yàn)方法消毒劑1表面實(shí)驗(yàn)法75%乙醇20.1%新潔爾滅溶液3定量懸浮試驗(yàn)法0.3%的新潔爾滅溶液40.1%新潔爾滅溶液50.5%醋酸氯己定溶液60.1%醋酸氯己定溶液現(xiàn)場(chǎng)考察試驗(yàn)部分選擇車間(D級(jí))的配液間、灌裝間設(shè)備表面消毒前和消毒后分別進(jìn)行取樣，測(cè)定其微生物數(shù)量。確認(rèn)前準(zhǔn)備驗(yàn)證用試劑與材料菌種序號(hào)名稱序列號(hào)1金黃色葡萄球菌[CMCC(B)26003]2大腸埃希菌[CMCC(B)44102]3枯草桿菌芽孢[CMCC(B)63501]

白色念珠菌[CMCC(F)98001]結(jié)果判斷試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)符合下列全部條件，判斷所選中和劑合格。第1組無(wú)菌生長(zhǎng)，或僅有少數(shù)試驗(yàn)菌菌落生長(zhǎng)。第2組菌落數(shù)比第1組菌落數(shù)多，但比第3、4、5組菌落數(shù)少，且符合下表要求第1組平板平均菌落數(shù)第2組平板平均菌落數(shù)0〉5x〉(x+5)y〉(y+0.5y)第3、4、5組有相似菌落數(shù)生長(zhǎng)，其每組間菌落數(shù)誤差率不超過(guò)15%。計(jì)算公式如下：（3組間菌落平均數(shù)-各組菌落平均數(shù)）的絕對(duì)值之和誤差率＝————————————————————————×100％3×3組間菌落平均數(shù)第6組無(wú)菌生長(zhǎng)。否則，說(shuō)明試劑有污染，應(yīng)重新進(jìn)行試驗(yàn)。中和劑鑒定試驗(yàn)記錄見(jiàn)附錄2。定量懸浮試驗(yàn)試驗(yàn)?zāi)康挠捎?.2%的新潔爾滅溶液、0.1%新潔爾滅溶液、60mg/L二氧化氯溶液、0.5%醋酸氯己定溶液、0.1%醋酸氯己定溶液是通過(guò)浸泡或液封消毒，通過(guò)定量懸浮試驗(yàn)，確定其消毒效力是否符合要求。試驗(yàn)操作配制0.2%的新潔爾滅溶液、0.1%新潔爾滅溶液、60mg/L二氧化氯溶液、0.5%醋酸氯己定溶液、0.1%醋酸氯己定溶液，操作執(zhí)行《清潔劑和消毒劑管理》。將配置好的消毒劑置20℃±1℃恒溫水浴鍋中備用。由于0.2%的新潔爾滅溶液、0.1%新潔爾滅溶液中低效消毒劑，且不能殺滅芽孢，故定量懸浮試驗(yàn)用菌為金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、白色念珠菌。0.5%醋酸氯己定溶液、0.1%醋酸氯己定溶液為高效消毒劑，能殺滅芽孢，故定量懸浮試驗(yàn)用菌枯金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、白色念珠菌、枯草芽孢桿菌。將菌液制備成1×108~5×108CFU/ml的工作菌液，菌液的制備及計(jì)數(shù)同8.1.2。將試管按需要分組排列在試管架上，試驗(yàn)組分3組（4min、5min、6min各一組），并由左向右逐管標(biāo)明消毒劑、中和劑、10-1、10-2。對(duì)照組分1組，并由左向右逐管標(biāo)明稀釋液、中和劑、10-1、10-2、10-3、10-4。。向個(gè)試管加入4.5ml相應(yīng)的試劑，標(biāo)明10-1、10-2、10-3、10-4。加入4.5ml的稀釋液。吸取工作菌液0.5ml加入標(biāo)明消毒劑的試管中，對(duì)照組加入標(biāo)明稀釋液的試管中，迅速混勻，并開(kāi)始計(jì)時(shí)。待菌液與消毒劑相互作用至8min、10min、12min，吸取菌液和消毒劑混合液0.5ml，加入標(biāo)明中和劑的試管中，迅速混勻。中和作用10min后，吸取0.5ml加入標(biāo)明10-1的試管中，混勻后吸取0.5ml加入標(biāo)明10-2試管中（對(duì)照組以此類推，對(duì)照組直至10-4）。試驗(yàn)組分別取中和劑管、10-1、10-2管溶液1ml按平皿法測(cè)定存活菌數(shù)；對(duì)照組取10-3、10-41ml按平皿法測(cè)定存活菌數(shù)。每管平行制備2皿。金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽孢菌用營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，倒置于30～35℃培養(yǎng)3天計(jì)數(shù)；白色念珠菌用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，倒置于23～28℃培養(yǎng)5天計(jì)數(shù)。結(jié)果計(jì)算計(jì)算試驗(yàn)組和對(duì)照組的活菌濃度

（CFU/ml），并換算為對(duì)數(shù)值（N），并按下式計(jì)算殺滅對(duì)數(shù)值:殺滅對(duì)數(shù)值

(KL)＝對(duì)照組平均活菌濃度的對(duì)數(shù)值（NO）－試驗(yàn)組活菌濃度對(duì)數(shù)值（NX）可接受標(biāo)準(zhǔn)殺滅對(duì)數(shù)值

(KL)應(yīng)不低于3~5個(gè)對(duì)數(shù)單位。定量懸浮試驗(yàn)記錄見(jiàn)附錄3表面試驗(yàn)法試驗(yàn)?zāi)康挠捎?5%乙醇、40mg/L二氧化氯溶液、0.1%新潔爾滅溶液是通過(guò)擦拭消毒，故選用不銹鋼載片和玻璃裁片進(jìn)行表面試驗(yàn)法，確定其消毒效力是否符合要求。菌種選擇由于75%乙醇、0.1%新潔爾滅溶液中低效消毒劑，且不能殺滅芽孢，故定量懸浮試驗(yàn)用菌為金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、白色念珠菌。0.5%醋酸氯己定溶液、0.1%醋酸氯己定溶液為高效消毒劑，能殺滅芽孢，故定量懸浮試驗(yàn)用菌枯金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、白色念珠菌、枯草芽孢桿菌。工作菌液制備工作菌液的制備方法、濃度及驗(yàn)證同步計(jì)數(shù)操作同8.1.2。試驗(yàn)操作染菌不銹鋼載片制備將經(jīng)滅菌的載片平鋪于無(wú)菌平皿內(nèi)，滴加金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌含菌量為1×108~5×108CFU的菌液0.1ml，并均勻涂布于整個(gè)載體表面。滴染菌液后，載片置超凈工作臺(tái)晾干后備用。每種菌平行制備兩個(gè)染菌不銹鋼載片。（2）染菌玻璃載片制備因培養(yǎng)皿的材質(zhì)為玻璃，故用培養(yǎng)皿代替玻璃載片進(jìn)行染菌試驗(yàn)。進(jìn)行菌液滴染前，用記號(hào)筆在培養(yǎng)皿菌液滴染面的背面畫出染菌面積（50mm×50mm），標(biāo)注清晰。菌液滴染操作同染菌不銹鋼載片制備。試驗(yàn)組：將消毒劑擦拭在制備好的染菌載片上，消毒劑作用時(shí)間分別為8min、10min、12min，不銹鋼載片和玻璃載片每個(gè)作用時(shí)間分別制備2個(gè)。作用結(jié)束后，用接觸碟取樣（接觸碟規(guī)格：55mm，取樣面積為25m2）。取金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽孢菌用大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基接觸碟（編號(hào)：BZW12085）；取樣白色念珠菌用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基接觸碟（編號(hào)：BZW15129）。接觸碟取樣方法：打開(kāi)接觸碟蓋，使無(wú)菌培養(yǎng)基表面與取樣面直接接觸，均勻按壓接觸碟底板，確保全部瓊脂表面與取樣面表面均勻接觸10秒左右，在蓋上跌蓋。對(duì)照組對(duì)照組的活菌濃度計(jì)數(shù)見(jiàn)8.3.3。.陰性對(duì)照：用接觸碟在已滅菌的載片上（未染菌片的載）按壓取樣，操作同上。每種載片及每種接觸碟平行制備兩份。培養(yǎng)將取樣金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽孢菌的接觸碟倒置于30～35℃培養(yǎng)3天計(jì)數(shù)；取樣白色念珠菌的接觸碟倒置于23～28℃培養(yǎng)5天計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)。結(jié)果計(jì)算計(jì)算試驗(yàn)組和對(duì)照組的活菌濃度

（CFU/ml），并換算為對(duì)數(shù)值（N），并按下式計(jì)算殺滅對(duì)數(shù)值:殺滅對(duì)數(shù)值

(KL)＝對(duì)照組平均活菌濃度的對(duì)數(shù)值（NO）－試驗(yàn)組活菌濃度對(duì)數(shù)值（NX）可接受標(biāo)準(zhǔn)殺滅對(duì)數(shù)值

(KL)應(yīng)不低于3~5個(gè)對(duì)數(shù)單位。表面試驗(yàn)法記錄見(jiàn)附錄5現(xiàn)場(chǎng)考察試驗(yàn)消毒前對(duì)潔凈區(qū)進(jìn)行表面微生物取樣。取樣地點(diǎn)：D級(jí)車間的配料間墻壁和設(shè)備表面、灌裝間墻壁和設(shè)備表面、中間站墻壁表面。取樣操作及檢驗(yàn)執(zhí)行《表面微生物檢驗(yàn)》。生產(chǎn)操作結(jié)束后操作人員按照《生產(chǎn)區(qū)清潔》對(duì)潔凈區(qū)進(jìn)行清潔消毒。清潔消毒完畢15分鐘后，現(xiàn)場(chǎng)QA對(duì)清潔消毒后的潔凈區(qū)進(jìn)行表面微生物取樣。取樣地點(diǎn)：固體車間（D級(jí)）的制粒間一墻壁和設(shè)備表面、小容量注射劑車間(C級(jí))的配液間墻壁和設(shè)備表面、灌封間層流罩（A級(jí)）下設(shè)備表面。取樣操作及檢驗(yàn)執(zhí)行《表面微生物檢驗(yàn)》。至少進(jìn)行3次試驗(yàn)。可接受標(biāo)準(zhǔn)消毒后：D級(jí)：50CFU/25cm2現(xiàn)場(chǎng)考察試驗(yàn)記錄見(jiàn)附錄5消毒劑有效期確認(rèn)試驗(yàn)試驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^(guò)該試驗(yàn)，確定消毒劑在有效期內(nèi)是穩(wěn)定的，并且消毒效力不會(huì)變化，符合要求。試驗(yàn)操作配制75%乙醇、0.1%新潔爾滅溶液、0.2%新潔爾滅溶液、0.5%醋酸氯己定溶液、0.1%醋酸氯己定溶液。操作與儲(chǔ)存執(zhí)行《清潔劑和消毒劑管理》。在消毒劑儲(chǔ)存的第0天、第6天、第7天、第8天、第28天、第30天、第32天取樣試驗(yàn)。0.1%新潔爾滅溶液、0.2%新潔爾滅溶液、0.5%醋酸氯己定溶液、0.1%醋酸氯己定溶液試驗(yàn)操作同8.2定量懸浮試驗(yàn)。75%乙醇試驗(yàn)操作同8.3表面試驗(yàn)。結(jié)果計(jì)算計(jì)算試驗(yàn)組和對(duì)照組的活菌濃度

（CF